HPLC法测定纺织品中AP和APEO

HPLC法测定纺织品中AP和APEO（15篇）

1.HPLC法测定纺织品中AP和APEO 篇一

圆盘式固相萃取HPLC法测定饮用水中微囊藻毒素LR和RR

采用固相微萃取与高效液相色谱联用技术(SPE/HPLC)测定饮用水的微囊藻毒索,并对SPE的萃取条件和HPLC的.色谱条件进行了优化,对SPE的多项参数,诸如萃取率、检出限及测定限以及准确度和精密度均作了测试.通过实际水样进行了分析,该方法测定MC-LR(LR型微囊藻毒索)的线性范围为0.5～50 ug/L,相关系数为0.999 2;测定MC-RR(RR微囊藻毒索)的线性范围为0.5～50 ug/L,相关系数为0.998 9.SPE法之优于LLE法主要在于分析过程快速,有机溶剂使用量大大减少,方法更适合于大量水样中有机污染物的现场取样处理.

作 者：朱文川 董铮 薛剑 Zhu Wenchuan Dong Zheng Xue Jian  作者单位：江苏省镇江市环境监测中心站,江苏,镇江,21 刊 名：环境科学与管理 英文刊名：ENVIRONMENTAL SCIENCE AND MANAGEMENT 年，卷(期)： 33(12) 分类号：X523 关键词：圆盘式固相微萃取(SPE)   高效液相色谱   饮用水   微囊藻毒素  

2.HPLC法测定纺织品中AP和APEO 篇二

1 仪器与试药

1.1 仪器

电子分析天平(Mettler Toledo,d=0.01 mg),超声清洗器(上海科导),高效液相色谱仪(岛津,LC-20A型),色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm,Agilent TC-C18)。

1.2 药品和试剂

水(娃哈哈纯净水),乙腈、甲醇(Tedia,色谱纯),其他试剂均为分析纯。对照品购自上海诗丹德生物技术有限公司(芦丁,批号:3920,纯度99.3%;槲皮素,批号:3467,纯度98.6%)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Agilent TC-C18色谱柱,流动相A为乙腈,B为0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱程序见表1,DAD检测波长200~400 nm,总流速1.0 m L/min,进样量10μL,柱温25℃。

2.2 溶液制备

2.2.1 供试品溶液制备

取地肤子过40目筛粉末2.0 g,称定,置于100 m L具塞锥形瓶中,精密加入80%乙醇20 m L,密封,称重,浸泡30 min,超声处理30 min,取出后放至室温后再次称定重量,加80%乙醇补足损失重量,摇匀,0.22μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。

2.2.2 对照品溶液制备

精密称取芦丁和槲皮素对照品各适量,分别置于25 m L容量瓶中,加色谱甲醇溶解并定容,摇匀,即得芦丁和槲皮素对照品贮备溶液。同法配制混合对照品溶液,使每毫升溶液中含芦丁0.0133 mg、槲皮素0.0085 mg。

2.3 系统适用性试验

取“2.2”项下溶液,按照“2.1”项下色谱条件进行HPLC分析。结果见图1。芦丁和槲皮素理论塔板数均大于5000、分离度大于1.5、拖尾因子在0.95~1.05之间,符合含量测定要求。

A.供试品;B.混合对照品

2.4 线性关系考察

配制系列浓度的对照品溶液进行HPLC测定,进样量10μL,得到芦丁和槲皮素的线性方程回归方程分别为:Y=2.256×107X-1108,r2=0.9999,线性范围为0.0017~0.0532 mg/m L;Y=6.783×106X-808.2,r2=0.9996,线性范围为0.0011~0.0340 mg/m L。

2.5 精密度试验

取“2.2.2”项下所制备的对照品溶液,适当稀释,按“2.1”项下条件分别重复进样6次,进样量10μL,测得芦丁峰面积RSD=0.6%,槲皮素峰面积RSD=0.7%,表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

取同一批次地肤子粉末,按“2.2.1”项下方法平行制备,分别按“2.1”项下条件进行HPLC分析,进样量10μL,结果测得芦丁峰面积RSD=1.9%,槲皮素峰面积RSD=1.5%,表明方法重复性良好。

2.7 稳定性试验

取地肤子粉末,按“2.2.1”项下方法平行制备,按“2.1”项下条件分别于0、2、4、8、12、24 h进行HPLC分析,进样量10μL,结果测得芦丁峰面积RSD=1.8%,槲皮素峰面积RSD=1.6%,表明供试品在24 h内稳定性良好。

2.8 加样回收率试验

按表2取样,进样量10μL,记录峰面积,计算芦丁和槲皮素的加样回收率,结果见表2,结果符合含量测定要求。

2.9 样品含量测定

精密称取不同产地和批号的地肤子样品粉末各2.0 g,进行HPLC分析,进样量10μL,记录峰面积,计算芦丁和槲皮素含量。见表3。

3 讨论

本研究考察了不同提取溶剂对地肤子中芦丁和槲皮素提取的影响,发现80%乙醇溶液具有最高的提取率。同时,优化了超声提取时间,发现30 min能将芦丁和槲皮素提取完全。200~300 nm之间色谱图中其他组分对芦丁和槲皮素的测定干扰严重;300~400 nm之间,370 nm的HPLC图谱无干扰,所以选择370 nm为检测波长。

3.HPLC法测定纺织品中AP和APEO 篇三

RP-HPLC法测定落叶松中二氢槲皮素的含量

采用反相高效液相色谱法测定落叶松中二氢槲皮素的含量.确定色谱条件为:色谱柱Hypemil ODS-C18(4.6mmx200mm,5μm);流动相为V(甲醇):V(水):V(冰醋酸)=40:59:1;流速为1.0mL・min-1;检测波长为288nm;柱温为28℃.在此条件下,二氢槲皮素与其它组分得到良好的.分离.线性范围为0.02～0.2μg・μL-1(r=0.9998),精密度RSD为0.96%(n=5),平均回收率为100.4%.

作 者：王宇 王遂 WANG Yu WANG Sui 作者单位：哈尔滨师范大学,黑龙江,哈尔滨,150025刊 名：化学工程师 ISTIC英文刊名：CHEMICAL ENGINEER年，卷(期)：“”(2)分类号：O657.7关键词：落叶松 二氢槲皮素 反相高效液相色谱法

4.HPLC法测定纺织品中AP和APEO 篇四

本帖仅仅针对于HPLC方法进行讨论

方法开发的内容不在本帖讨论范围内

1．有关物质（适用于API，制剂，也适用于起始物料，中间体）

有关物质方法验证的前提条件：

1.各杂质与主峰的混合溶液能用拟定的分析方法有效分离

2.根据混合溶液中各峰的紫外吸收波长（或单独测定各组分紫外吸收），选择合适的检测波长。多波长检测（如有）则分别考察。

3.在检测波长下，选择峰高最小的，计算S/N，预估主成分浓度 4.各杂质纯度已知

5.根据合成跟踪检测，合理制定各杂质的限度 6.供试品溶解方法和提取方法得到合理证明

1.1专属性： 1.1.1概念

在其他成分（如其他杂质，辅料，溶剂）可能存在的情况下，拟定的分析方法能正确测定被检测物的能力。1.1.2试验方法 1.1.2.1定位试验： A.目的

对各已知杂质和主峰进行定位 B.试验方法：

a．配制一定浓度（能够显示出峰纯度，一般为0.1mg/ml）的各已知杂质溶液、拟检测浓度的主成分作为定位溶液

b．配制限度浓度各已知杂质与检测浓度的主成分的混合溶液作为分离度试验溶液 c．使用拟定分析方法分别进行定位。C.试验要求：

a．空白应不干扰各杂质的测定：如杂质附近有空白峰，二者分离度应大于1.5；杂质峰保留时间处不得为梯度峰拐点

b．定位溶液中，已知杂质与主峰的峰纯度应符合规定

c．分离度试验溶液中，主峰与相邻杂质的分离度应大于2.0（至少1.5）；各已知杂质之间的分离度应大于1.5（至少1.2）； 1.1.2.2强制降解试验 A.目的

一是通过考察药品在一系列剧烈条件下的稳定性，了解该药品内在的稳定特性及其降解途径与降解产物。其二，这些试验也能在一定程度上对有关物质分析方法用于检查降解产物的专属性进行验证。B.试验方法

对于高温、光照、强酸、强碱及强氧化剂的浓度及时间、取样方式等没有明确的规定。具体品种具体模索，初步试验了解样品对影响的因素（高温、光照、酸、碱、氧化）等条件基本稳定情况后，进一步调整破坏试验条件，只要使主药有一定量的降解，并对可能的降解途径和降解机制进行分析，保证实验的意义即可。试验一般的范围为：

强酸：0.1~5.0mol/L HCl溶液或视情况调节时间，温度，体积 强碱：0.1~5.0mol/L NaOH溶液或视情况调节时间，温度，体积

强氧化剂：30%的H2O2或视情况配制不同浓度的溶液或视情况调节时间，温度 高温：固体状态下稳定的主药，可以考虑溶解后以液体状态进行试验 光照：固体状态下稳定的主药，可以考虑溶解后以液体状态进行试验 C.试验要求

a.一般样品含量控制在85%—90%范围（归一化法），不一定要求每个条件都能降解出来。

b.在进行酸、碱、强氧化破坏试验时，每个试验最好都要做相应的空白（溶剂，空白辅料，复方制剂还包括除去某一主药的其他组分）破坏试验作为辅助。

c.主峰纯度符合规定，与相邻杂质分离度大于2.0（至少1.5），已知杂质与相邻杂质分离度大于1.2 d.物料守恒，即未破坏主药的C/A与破坏后的C/A值相比，结果在0.9~1.1之间

e.关于破坏试验，更多内容请参阅lyslinjiu版主在帖子【讨论】2013-专属性实验（强制降解试验）2013-专属性实验（强制降解试验）-丁香园论坛

f.在此处做梯度时间（如有）延长验证试验。即将分析方法的梯度中，有机相比例最大的时长延长（建议延长时间为主峰保留时间或10~20min），考察是否降解出难以洗脱的物质在拟定方法的梯度周期内能有效检出。进一步考察分析方法的合理性

1.2定量限 1.2.1概念

样品中能被定量测定的最低量，有定量意义。1.2.2验证方法 A.目的

考察杂质的能被定量的最低量，同时评判供试品浓度的选择是否合理 B.试验方法

配制限度浓度的各已知杂质与主成分的混合溶液作为贮备液，进样，逐步稀释至S/N约为10时，得定量限。C.试验要求

定量限浓度不得高（修正，原为低）于限度浓度的1/5

1.3检测限 1.3.1概念

样品中能被检测出的最低量，仅作为限度试验指标和定性鉴别的依据，没有定量意义。1.3.2验证方法 A.目的

考察杂质的最低检出量，同时评判供试品浓度的选择是否合理 B.试验方法

配制限度浓度的各已知杂质与主成分的混合溶液作为贮备液，进样，逐步稀释至S/N约为3时，得检测限。C.试验要求

检测限浓度不得高（修正，原为低）于限度浓度的1/10

1.4溶液稳定性 1.4.1目的

考察被测各溶液在特定时间周期内的稳定性 1.4.2试验方法

a.配制系统适应性溶液、供试品溶液、对照品溶液，在室温条件下，分别在各时间点进样 b.如不稳定，需考察在低温条件下的溶液稳定性

c.时间范围根据试验需要来确定。比如做回收率中需要至少连续测定9份供试品，是所有单个验证项目中最长的，选择这个时间点是可以的。也有考虑到以后需要测定更多的样品，选择更长的时间范围。1.4.3试验要求

a.系统适应性溶液，各峰之间分离度应符合要求。b.对照品溶液峰面积RSD应小于2.0% c.供试品溶液，杂质个数和杂质量应一致，峰面积RSD应小于5.0%；不得检出新增杂质 d.如不稳定，需临用现配或低温保存

1.5仪器精密度 1.5.1概念

同一溶液，连续进样6次，其tR和峰面积的精密度，考察仪器的进样精密度 1.5.2试验方法

配制限度浓度的各杂质和主成分的混合溶液，连续进样6次 1.5.3试验要求 a.tR的RSD小于2.0% b.各峰面积RSD小于2.0%

1.6线性与校正因子 1.6.1概念

在设计的范围内，被测物浓度与峰面积的线性关系 1.6.2试验方法

配制各杂质和主成分的混合溶液，逐步稀释，浓度范围从定量限至限度浓度的120%以上，至少配制5份以上溶液。由2人分别进行。1.6..3试验要求

a.线性关系系数r大于0.990 b.Y轴截距应在100％响应值的25％以内 c.响应因子的相对标准差应不大于10% d.2人测得斜率之比在0.98~1.02之间

e.计算出来的校正因子应进行修约，在0.9~1.1范围内的，修约为1.0进行计算；0.2~5.0范围内的，按校正因子计算；0.2~5.0范围外的，按外标法计算。

1.7精密度 1.7.1概念

同一个均匀供试品，经多次取样测定结果之间的接近程度。1.7.2重复性 1.7.2.1试验方法

由同一试验人员，取同一均匀供试品，平行配制6份供试品溶液，测定杂质百分含量。1.7.2.2试验要求

a.检出杂质个数，杂质相对保留时间，各杂质百分含量均应一致 b.单个杂质的百分含量的极差应在其含量±10%以内 c.杂质总量的RSD应小于5.0% 1.7.3中间精密度 1.7.3.1试验方法 同一实验室，由不同试验人员在不同时间使用不同设备，平行配制6份供试品溶液，测定杂质百分含量。1.7.3.2试验要求 a.同1.7.2.2-a和b b.单个杂质和杂质总量的RSD应小于10.0%

1.8回收率 1.8.1概念

用拟定分析方法所测得结果与真实值接近的程度。1.8.2试验方法

a.配制各杂质的混合贮备液

b.称取供试品适量，精密加入混合杂质贮备液适量，配制成溶液，使供试品浓度为测定浓度，杂质浓度分别为限度浓度的50%，100%，150%。各浓度均平行配制3份 c.配制混合杂质对照品溶液和自身对照溶液 1.8.3试验要求

a.各浓度下的回收率应在90%~110%之间 b.回收率（N=9）的RSD应小于10.0% c.用加校正因子的自身对照法计算结果应与杂质外标法计算结果一致

1.9耐用性 1.9.1概念

在拟定的分析方法有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为所建立的分析方法用于常规检测提供依据

1.9.2试验方法

a.分析方法中可变动的因素有：流动相组成比例，水相pH，柱温，色谱柱（同一品牌不同批次，不同品牌的常用色谱柱），流速，检测波长

b.配制系统适应性溶液，供试品溶液，对照品溶液进行测定 1.9.3试验要求

a.系统适应性溶液应符合规定；如不符合规定，则需更严格控制所变化的因素，直至找到一个合适的范围；如指定色谱柱，严格控制pH等等

b.检测杂质个数，杂质的相对保留时间应与精密度结果一致 c.测得杂质量应与精密度结果一致

2．含量测定（适用于API，制剂，也适用于单个杂质控制）含量测定方法验证的前提条件：

1.空白（溶剂和辅料）和各杂质不干扰主峰的测定

2.根据主成分的紫外吸收波长（复方需分别单独测定各组分紫外吸收），选择合适的检测波长。多波长检测（如有）则分别考察。

3.在检测波长下，计算S/N，预估主成分浓度 4.供试品溶解方法和提取方法得到合理证明

2.1专属性： 2.1.1概念

在其他成分（如其他杂质，辅料，溶剂）可能存在的情况下，拟定的分析方法能正确测定主成分的能力。2.1.2试验方法 2.1.2.1定位试验： A.目的同1.1.2.1-A B.试验方法同1.1.2.1-B C.试验要求：

a．空白应和各杂质不得干扰主成分的测定，主峰保留时间处不得为梯度峰拐点（如有）b．定位溶液中，主峰的峰纯度应符合规定

c．分离度试验溶液中，主峰与相邻杂质的分离度应大于2.0 2.1.2.2强制降解试验 A.目的

一是通过考察药品在一系列剧烈条件下的稳定性，了解该药品内在的稳定特性及其降解途径与降解产物。其二，这些试验也能在一定程度上对含量测定分析方法用于检查主成分的专属性进行验证。B.试验方法 同1.1.2.2-B C.试验要求

a.主峰纯度符合规定，与相邻杂质分离度大于2.0 其他同1.1.2.2-C

2.2定量限 2.2.1概念

样品中能被定量测定的最低量，有定量意义。2.3.2验证方法 A.目的

考察主成分的能被定量的最低量，同时评判供试品浓度的选择是否合理 B.试验方法

配制检测浓度的主成分溶液，进样，逐步稀释至S/N约为10时，得定量限。C.试验要求

定量限浓度不得高（修正，原为低）于检测浓度的1/10

2.3溶液稳定性

试验要求为主成分峰面积RSD小于2.0% 如溶出检测方法同含量，建议考察一个溶出曲线周期内的溶液稳定性 其他同1.4项下 2.4仪器精密度

试验要求为主成分峰面积RSD小于2.0% 其他同1.5项下

2.5线性与校正因子 2.5.1概念

在设计的范围内，被测物浓度与峰面积的线性关系 2.5.2试验方法

配制主成分贮备液，逐步稀释，浓度范围从检测浓度80%至120%，至少配制5份以上溶液。由2人分别进行。2.5.3试验要求 同1.6.3

2.6精密度 2.6.1概念

同一个均匀供试品，经多次取样测定结果之间的接近程度。2.6.2重复性 2.6.2.1试验方法

由同一试验人员，取同一均匀供试品，平行配制6份供试品溶液，测定主成分百分含量。2.6.2.2试验要求

6份供试品含量结果RSD应小于2.0% 2.6.3中间精密度 2.6.3.1试验方法

同一实验室，由不同试验人员在不同时间使用不同设备，平行配制6份供试品溶液，测定主成分百分含量。2.6.3.2试验要求

a.6份供试品含量结果RSD应小于2.0% b.12份供试品含量结果RSD应小于2.0%

2.7回收率 2.7.1概念

用拟定分析方法所测得结果与真实值接近的程度。2.7.2试验方法

a.API在精密度，线性和专属性推算出来的情况下可豁免验证

b.制剂：称取空白辅料适量（相当于100%检测浓度的主药），精密加入对照品（或已知含量的主药）适量，配制成溶液，使供试品浓度分别为测定浓度80%，100%，120%。各浓度均平行配制3份 c.配制对照品溶液 2.7.3试验要求

a.各浓度下的回收率应在99%~101%之间 b.回收率（N=9）的RSD应小于2.0%

2.8耐用性 2.8.1概念

5.HPLC法测定纺织品中AP和APEO 篇五

建立了尿液中克伦特罗和沙丁胺醇同时测定的GC-MS方法. 尿液在碱性条件下以异丁醇提取后, 用Waters Oasis MCX小柱净化, 吹干后用BSTFA进行硅烷化衍生, 采用GC-EI-MS法, 选择离子方式采集数据. 结果表明, 克伦特罗和沙丁胺醇的线性范围为0.002～1.00 mg/L, 相关系数分别为0.9993和0.9985, 方法检出限可达0.5 μg/L (S/N=10). 尿液中克伦特罗和沙丁胺醇的回收率分别为75.9%～89.2%和73.6%～89.5%, 相对标准偏差(RSD)均不大于10%.

作 者：张雪曼 程雪梅 苏青云 ZHANG Xue-man CHENG Xue-mei SU Qing-yun  作者单位：东莞市农业检验监测所,东莞,523007 刊 名：分析试验室  ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF ANALYSIS LABORATORY 年，卷(期)：2007 26(2) 分类号：O657.6 关键词：克伦特罗   沙丁胺醇   GC-MS   动物尿液  

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6.HPLC法测定纺织品中AP和APEO 篇六

1 仪器与试药

美国Agilent 1100 系列高效液相色谱仪、G1313A自动进样器、DAD二极管阵列检测器、Agilent Chemstation色谱工作站;KUDOS超声波 (上海科导超声仪器有限公司) 、Millipore超纯水系统。

乙腈 (色谱纯, Fisher公司) 、甲醇和冰醋酸 (分析纯, 北京化工厂) ;超纯水, 自制。

绿原酸 (批号为110753-200413) 和黄芩苷对照品 (批号为110715-200514) , 购自中国药品生物制品检定所;银黄颗粒为不同厂家的市售样品;阴性样品为自制。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统试用性试验

色谱柱:Zorbax SB C18柱 (4.6 mm×200 mm, 5 μm) ;流动相:乙腈 (A) -2%醋酸溶液 (B) , 梯度洗脱 (0～10 min:12%A;10～20 min:12% A→32% A;20～30 min:32%B) , 流速:1.0 mL/min;测定波长327 nm, 柱温30 ℃, 进样量10 μL。结果表明, 在此色谱条件下, 样品分离效果好, 其他成分对绿原酸和黄芩苷的测定无干扰。理论塔板数按绿原酸计, 不低于2 000。色谱图见图1。

1.绿原酸 (chlorogenic acid) 2.黄芩苷 (baicalin)

2.2 溶液的制备

2.2.1 混合对照品储备液

精密称取干燥至恒重的绿原酸和黄芩苷对照品适量, 加50%甲醇溶解并稀释制成含绿原酸对照品0.13 mg/mL、黄芩苷1.57 mg/mL溶液。

2.2.2 供试品溶液及阴性样品溶液

精密称取银黄颗粒0.2 g, 置具塞100 mL锥形瓶中, 加入50 mL 50%甲醇, 密塞, 称定质量, 超声处理15 min, 放冷, 称定, 用50%甲醇补足减失的质量, 摇匀, 0.45 μm微孔滤膜滤过, 取续滤液备用。同法制备不含金银花和黄芩的阴性样品溶液。

2.3 线性关系试验

精密吸取混合对照品储备液1.0, 2.0, 4.0, 6.0, 8.0, 10.0 mL置于10 mL量瓶中, 用50%甲醇稀释至刻度, 摇匀, 进样, 测定峰面积。以对照品质量浓度为横坐标, 相应的峰面积为纵坐标, 绘制标准曲线, 计算回归方程。绿原酸:Y= 26.81X-7.627 1, r=0.999 6, 线性范围为13～130 μg/mL;黄芩苷:Y= 99.715 X+8.763 6, r=0.999 9, 线性范围为157～1 570 μg/mL。结果表明, 线性关系良好。

2.4 精密度试验

取同一对照品溶液, 按2.1项下色谱条件测定, 连续进样6次, 绿原酸和黄芩苷色谱峰面积的RSD分别为0.49%和0.75% (n=6) 。

2.5 重复性试验

取同一批号银黄颗粒5份, 每份约0.2 g, 精密称定, 按2.2.2的方法操作, 在上述色谱条件下进行测定, 计算绿原酸和黄芩苷平均含量分别为5.18 mg/g和44.11 mg/g。

2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液在室温下避光放置, 分别于0, 2, 4, 8, 12 小时进样测定峰面积。测得绿原酸和黄芩苷的峰面积的RSD分别为0.18%和1.20%。表明供试品溶液在12 h 内稳定。

2.7 回收率试验

取已知含量 (绿原酸含量为5.10 mg/g, 黄芩苷含量为44.24 mg/g) 的样品6份, 每份约0.1 g (精密称定) 置具塞锥形瓶中, 分别精密加入绿原酸和黄芩苷的混合对照品溶液 (取绿原酸对照品1.0 mg及黄芩苷对照品8.1 mg, 置10 mL棕色量瓶中, 加入50%甲醇定容) 5 mL, 再分别精密加入50%甲醇45 mL, 称定质量, 按2.2.2方法操作, 按上述色谱条件下进行测定, 计算加样回收率 (n=6) , 绿原酸为99.15% (RSD=0.82%) , 黄芩苷为102.78% (RSD=1.08%) 。

2.8 样品测定

分别取不同厂家的样品, 按2.2.2的方法操作, 在上述色谱条件下进行测定, 计算含量, 结果见表1。

3 讨论

3.1 测定波长的选择

在200～400 nm波长范围内扫描, 结果绿原酸在327, 268, 260 nm处及黄芩苷在317, 275, 248 nm 处有最大吸收值。由于样品中绿原酸的含量较低, 为保证各成分都具有适宜的灵敏度, 经过双波长验证, 选择327 nm作为测定波长, 在此条件下可同时对绿原酸和黄芩苷进行测定。

3.2 流动相的选择

在试验中曾试过以甲醇-水、乙腈-水溶液等为流动相, 发现对银黄颗粒的分离效果均不理想, 而采用乙腈-醋酸水溶液后分离效果有明显的改善, 且峰形很好, 故最后选择乙腈-醋酸水溶液作为流动相。

3.3 提取条件的选择

分别以乙醇、无水甲醇、70%甲醇、50%甲醇、30%甲醇作为提取溶剂, 采用超声振荡法对供试品进行提取, 并对超声振荡时间进行考察。结果表明, 以50%甲醇超声提取15 min效果最好。

3.4 探讨

银黄颗粒中金银花提取物与黄芩提取物的比例为2.5∶1, 然而经测定各厂家样品中绿原酸和黄芩苷的含量各异, 因此控制原料提取物的质量也很重要。在参考文献[2,3]中, 采用HPLC法分别测定了银黄颗粒中绿原酸和黄芩苷的含量, 其方法较为复杂。本试验建立的HPLC梯度洗脱法将二者分别测定改为同时测定, 既省时便捷, 又准确稳定, 建议推广应用。

参考文献

[1]卫生部药品标准.中药成方制剂第六册[S].WS3-B-1234-92.

[2]胡春湘, 陈忠梁, 张正光.HPLC测定银黄片中绿原酸和黄芩苷的含量[J].中成药, 2003, 25 (5) :418-419.

7.HPLC法测定纺织品中AP和APEO 篇七

目的 建立测定小麦胚芽油营养胶囊中维生素E含量的方法。方法 采用HPLC法，色谱柱为Agilent ZORBAX ODS柱，甲醇?乙腈（体积比25∶75）为流动相，流速1.0 mL/min, 检测波长290 nm，柱温为40 ℃。结果 维生素E在32.9~291.1 μg/mL范围内呈良好的`线性关系，平均回收率为99.9%，RSD为1.0%（n=6）。结论 本文方法简便、准确，能有效地控制该制剂的质量。

Abstract:Objective To establish an HPLC method for determining the content of vitamin E in wheat germ oil. Methods  An Agilent ZORBAX ODS column was used to analysis the sample by using methanol?acetontril (25∶75) as mobile phase. The flow rate was 1.0 mL·min-1 and detective wavelength 290 nm.Results  The standard curve for vitamin E was linear in the concentration range of 32.9~291.1 μg/mL. The average recovery was 99.9% with RSD 1.0% (n=6). Conclusion This method is simple, accurate and reliable for the quality control of wheat germ oil.

Key words:wheat germ oil  vitamin E;  HPLC

小麦胚芽油营养胶囊是中美合作安利（中国）日用品有限公司的产品，其主要成分为不饱和脂肪酸、维生素E、胆碱、植物固醇，还有谷胱甘肽等多种微量元素，具有抗不育、抗衰老、促进人体新陈代谢、增强体力和记忆力、降低胆固醇、防治动脉硬化、改善血液循环、增强人体免疫力的功能。其主要有效成分为维生素E，测定维生素E需要将样品经过皂化、提取、洗涤、浓缩等步骤后再进行测定，操作繁琐［1］，本文参照文献［2,3］对该制剂中维生素E含量测定方法进行研究，建立了一种简便、准确的测定方法。

1  仪器与试剂

岛津LC?10ATVP泵；SPD?M10AVP 检测器；CTO?10AVP柱温箱；SCL?10AVP 自动进样器；SIL?10ADVP系统控制器；CLASS?VP工作站；dl?α?维生素E（Dr.Ehrenstorfer CA17924300，纯度98.6%）；小麦胚芽油营养胶囊（由中美合作安利（中国）日用品有限公司提供，批号： 0217；2005 0312；2005 0326），甲醇、乙腈为色谱纯。

2  实验部分

2.1  溶液的制备

2.1.1  对照品溶液的制备  精密称取dl?α?维生素E对照品适量，加甲醇制成每1 mL含100 μg溶液，即得。

2.1.2  供试品溶液的制备  取小麦胚芽油营养胶囊装量差异项下的内容物，混匀，取0.2 g，精密称定，置20 mL棕色容量瓶中，加甲醇置刻度，摇匀，精密吸取2 mL至10 mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过（0.45 μm），即得。

2.2  色谱条件及系统适应性试验色谱柱为ODS柱（Agilent ZORBA，250 mm×4?6 mm，5 μm），流动相为甲醇?乙腈（体积比25∶75），流速为1 mL/min ；检测波长为 290 nm；柱温为40 ℃。分别取对照品溶液、供试品溶液各10 μL注入色谱仪，见图1。

A.对照品; B.样品; C.阴性对照

图1  HPLC色谱图（略）

Fig.1  HPLC Chromatograms

2.3  线性关系考察以维生素E对照品溶液（109.5446 μg/mL）各分别进样3、5、10、15和20 μL进行测定，以质量浓度（ρ）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线得回归方程：A=4 042.79ρ-19 368.6,r=0.999 9。结果表明，维生素E在32.9~219.1 μg/ mL范围内，其进样量与峰面积呈良好的线性关系。

2.4  精密度试验取同一对照品溶液（109.5446 μg/mL），重复进样6次，结果维生素E平均峰面积为423 530，RSD为0.39%。

8.HPLC法测定纺织品中AP和APEO 篇八

高效液相色谱法同时测定长春花中的文多灵、长春质碱和脱水长春碱

运用高效液相色谱(HPLC)梯度洗脱同时测定了长春花中的文多灵、长春质碱和脱水长春碱等3种生物碱.色谱柱为Waters 5C18-MS-Ⅱ(4.6 mm×250 mm),流动相为甲醇-1%二乙胺(磷酸调pH至7.3)系统,梯度洗脱,检测波长220 nm,柱温25 ℃.实验结果表明,文多灵、长春质碱和脱水长春碱等3种生物碱分别在0.03～1 mg/mL,0.03～1 mg/mL和0.01～0.5 mg/mL时线性关系良好,平均加样回收率分别为96.8%,97.0%和96.4%,相对标准偏差(RSD)分别为1.53%,1.37%和1.96%.用该法同时检测了不同干旱条件处理下长春花样品中的.文多灵、长春质碱和脱水长春碱,方法准确、快速、简便.

作 者：杨蕾 唐中华 祖元刚 YANG Lei TANG Zhonghua ZU Yuangang  作者单位：东北林业大学,森林植物生态学教育部重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150040 刊 名：色谱  ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY 年，卷(期)： 25(4) 分类号：O658 关键词：高效液相色谱法   文多灵   长春质碱   脱水长春碱   长春花  

9.HPLC法测定纺织品中AP和APEO 篇九

1材料

1. 1主要试剂

银黄注射液、金银花阴性样品、黄芩阴性样品,由爱迪森( 北京) 生物科技有限公司生产; 绿原酸对照品( 批号为110753 - 201314,含量为96. 6% ) ,由中国食品药品研究院提供; 黄芩苷对照品( 批号为Z0271109,含量为98. 8% ) ,中国兽医药品监察所生产; 乙腈( HPLC级) 、磷酸等试剂均为分析纯。

1. 2主要仪器

高效液相色谱仪( 型号为1525) 、UV/VISIBLE检测器( 型号为2489) ,美国Waters公司生产; C18色谱柱( 250. 0 mm × 4. 6 mm,5 μm) ,华谱新创科技有限公司生产; 十万分之一分析天平( 型号为XS - 205) , METTLER TOLEDO公司生产; 超声波清洗器( 型号为KQ - 250) ,合肥金尼克机械制造有限公司生产。

2方法与结果

2. 1色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂、0. 4% 磷酸溶液为流动相A、乙腈为流动相B,按照表1中的方法进行梯度洗脱; 流速为1 m L/min; 检测波长为327 nm; 进样量为20 μL; 理论塔板数按照绿原酸峰计算应不低于2 000,按照黄芩苷峰计算应不低于2 500。

2. 2溶液的制备

2. 2. 1对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品10. 04 mg,置100 m L棕色量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,作为绿原酸储备液; 精密称取黄芩苷对照品18. 24 mg,置100 m L量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为黄芩苷储备液; 分别精密量取绿原酸储备液1 m L、黄芩苷储备液5 m L,置同一10 m L棕色量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得对照品溶液。

2. 2. 2供试品溶液的制备精密量取银黄注射液1 m L,置50 m L棕色量瓶中,加入50% 甲醇稀释至刻度,摇匀,精密量取5 m L,置10 m L棕色量瓶中,加50% 甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得供试品溶液。

2. 2. 3阴性供试品溶液的制备取金银花阴性样品和黄芩阴性样品各1 m L,按照2. 2. 2中供试品溶液的处理方法,制备金银花阴性和黄芩阴性供试品溶液。

2. 3专属性考察

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性供试品溶液20 μL,注入高效液相色谱仪,记录色谱图, 结果见图1 ~ 4。

由图1 ~ 4可知,绿原酸和黄芩苷峰型对称,分离度良好,2个阴性供试品在对照品相应的保留时间处均无干扰。

2. 4线性关系考察

取绿原酸对照品溶液20 m L,置50 m L棕色量瓶中,加入浓度为918. 885 μg /m L的黄芩苷对照品溶液20 m L( 甲醇溶解) ,用50% 甲醇稀释至刻度,摇匀,作为混合对照品母液; 分别精密量取混合对照品母液1,2,4,6,8 m L,置10 m L棕色量瓶中,用50% 甲醇稀释至刻度,摇匀,即得各浓度稀释液。分别精密吸取上述混合对照品稀释液和母液各20 μL,注入高效液相色谱仪测定峰面积,分别以绿原酸或黄芩苷浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。结果表明: 进样量为20 μL时,绿原酸在3. 88 ~ 38. 75 μg / m L浓度范围内与峰面积呈良好线性关系,线性回归方程为Y1= 68 979X1- 1 394. 4,R2= 0. 999 7; 黄芩苷在36. 76 ~ 367. 55 μg / m L浓度范围内与峰面积呈良好线性关系,线性回归方程为Y2= 54 048X2- 243 333,R2= 0. 999 8。

2. 5精密度考察

精密吸取对照品溶液20 μL,按照2. 1中的色谱条件连续进样6次,结果绿原酸、黄芩苷的平均峰面积分别为667 139,4 631 306,RSD分别为0. 49% 、 0. 45% ,说明精密度良好。

2. 6稳定性考察

精密吸取供试品溶液,按照2. 1中的色谱条件测定,分别于0,2,4,6,8,10,12小时时各进样20 μL, 结果绿原酸和黄芩苷的平均含量分别为0. 92 mg / m L、10. 16 mg / m L,RSD分别为0. 83% 、 0. 65% ,说明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2. 7重复性考察

取同一批次银黄注射液6份,分别按照2. 2. 2中的方法进行处理,并参照2. 1中的色谱条件进行测定,结果绿原酸和黄芩苷的平均含量分别为0. 910 4 mg / m L、10. 147 0 mg / m L,RSD分别为1. 29% 、1. 78% ,说明该方法重复性良好。

2. 8加样回收率考察

取已知含量( 绿原酸和黄芩苷的含量分别为0. 910 4 mg / m L、10. 147 mg / m L) 的样品6份,每份1 m L,置100 m L棕色量瓶中,加入浓度为0. 184 4 mg / m L绿原酸对照品溶液5 m L、浓度为1. 012 mg / m L的黄芩苷对照品溶液10 m L,用50% 甲醇稀释至刻度,摇匀; 精密量取5 m L,置10 m L棕色量瓶中,用50% 甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液备用; 按照2. 1中的色谱条件进行测定,结果绿原酸和黄芩苷的平均回收率分别为100. 43% 、 98. 65% ,RSD分别为1. 43% 、1. 68% ,说明该方法的回收率良好,结果见表2、表3。

2. 9样品含量的测定

取3批样品,按照2. 2. 2中的方法分别制备供试品溶液,再参照2. 1中的色谱条件进行测定,计算样品中绿原酸、黄芩苷的含量,结果见表4。

由表4可知,本试验所建立的方法测得的银黄注射液中绿原酸平均含量为0. 92 mg /g,黄芩苷平均含量为10. 15 mg /g。与现行方法进行比较,测定结果一致,差异不显著,说明新建立的方法准确可靠、稳定性和重复性良好,适用于银黄注射液中绿原酸和黄芩苷含量的测定。

3结论

银黄注射液具有清热解毒、宣肺燥湿等功效,其主要成分为绿原酸和黄芩苷,在现行银黄注射液质量标准中,采用不同的液相色谱条件对这两种成分的含量分别进行测定,检测耗时较长,影响生产和质量控制的效率。

用现行方法测定黄芩苷和绿原酸供试品溶液的制备方法、流动相组成及比例、检测波长具有相似性, 流动相均为甲醇- 0. 4% 磷酸系统,黄芩苷和绿原酸的检测波长分别为278 nm和327 nm,通过对比发现,黄芩苷在327 nm处也具有较大的吸光度值,这为采用同一色谱条件对二者进行同时检测提供了前期基础。研究发现,黄芩苷和绿原酸高效液相色谱含量测定方法主要使用的流动相系统为乙腈- 水- 磷酸［1 － 3］、甲醇- 水- 磷酸［4 － 6］、甲醇- 水- 醋酸［7］,甲醇- 水- 磷酸二氢钾缓冲盐系统,经系统对比研究确定了乙腈- 水- 磷酸流动相系统、优化梯度洗脱参数( 检测波长为327 nm) ,实现了对绿原酸和黄芩苷的同时测定。本试验结果表明,新建方法的检测时间为35 min,目标成分分离度好、理论塔板数高、重复性好,方法稳定可靠,操作简单、快捷,节约了检测时间, 提高了检测效率,可作为银黄注射液含量的测定方法。

参考文献

[1]刘刚,王海涛,赵淼,等.HPLC法测定双黄连口服液中绿原酸和黄芩苷的含量[J].解放军药学学报,2007,23(4):299-301.

[2]邹小燕,李金华,葛发欢,等.高效液相色谱法测定不同产地杜仲叶的绿原酸含量[J].中外医疗,2008(76):10-11.

[3]杨刚,杜守颖,吴清,等.HPLC法测定忍冬藤中绿原酸及咖啡酸含量[J].中国药品标准,2004,5(4):47-50.

[4]王野.小儿感冒宁糖浆的薄层鉴别及黄芩苷的含量测定[J].成都中医药大学学报,2006,29(2):59-60,64.

[5]苏强,倪艳,王瑞明,等.祛斑洁颜胶囊的薄层鉴别和黄芩苷的含量测定[J].中成药,2003,25(1):30-32.

[6]杨柳,吴金雄,许舜军,等.苍耳子中酚酸类化合物的鉴别及绿原酸的含量测定[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(19):85-88.

10.HPLC法测定纺织品中AP和APEO 篇十

乙基曙红和曙红Y褪色光度法测定阳离子表面活性剂

在HOAc-NaOAc缓冲介质中,阳离子表面活性剂(CS)与曙红Y(EY)或乙基曙红(EE)反应,形成离子缔合物,溶液颜色褪色明显,最大褪色波长分别在514 nm和516 nm处,同时在548 nm和544 nm处有吸收峰.在最大褪色波长处阳离子表面活性剂的`浓度与褪色程度呈良好线性关系,从而建立测定阳离子表面活性剂的光度法.在最大褪色波长处,CS的浓度在0～4.79 × 10-5 mol/L范围内遵守比尔定律,表观摩尔吸光系数在2.75×104～3.41×104 L/(mol・cm)之间,检出限在7.87×10-7～8.97×10-7 mol/L之间.方法具有较高的灵敏度和良好的选择性,用于水样中CS的测定,结果满意.

作 者：谢兵 XIE Bing 作者单位：涪陵师范学院,化学及环境科学系,重庆,408003刊 名：江西师范大学学报(自然科学版) ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF JIANGXI NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCES EDITION)年，卷(期)：200731(2)分类号：O657.32关键词：分光光度法 曙红Y 乙基曙红 溴化十六烷基吡啶 溴化十六烷基三甲基铵 溴化四乙基铵 溴化四丁基铵

11.HPLC法测定纺织品中AP和APEO 篇十一

摘要：试验了家用微波炉消解、快速测定污水中COD的方法,讨论了消解功率、消解时间、Cl-干扰等因素对测定的影响,确定了最佳试验条件.当消解功率为850 W、消解时间为5 min时,方法精密度和准确度良好,RSD≤5.3%,加标回收率为100%～102%,与标准回流法测定结果的相对误差<5%.

作 者： 吴敏 邱忠平王艳捷 杨立中

作者单位： 西南交通大学生物工程学院,四川,成都,610031

刊 名： 环境监测管理与技术 ISTIC PKU

英文刊名： THE ADMINISTRATION AND TECHNIQUE OF ENVIRONMENTAL MONITORING

年，卷(期)： 19(6)

分类号： O655.2

12.HPLC法测定纺织品中AP和APEO 篇十二

1仪器与试药

1.1仪器

岛津LC-2010 HPLC;日本AND GR-202电子分析天平。

1.2试药

穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品购于中国药品生物制品检定所;水为高纯水;甲醇 (色谱纯Fisher Scientific) ;其它化学试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱为岛津VP-ODS柱 (250mm×4.6mm, 5μm) ;流动相:以甲醇―水 (50∶50) 为流动相;流速:1.0mL/min;检测波长:250nm;柱温为室温;进样:10μL。

2.2溶液的配制

2.2.1 对照品溶液的制备

精密称取穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品适量, 分别加甲醇制成每1mL含穿心莲内酯50μg、脱水穿心莲内酯100μg的溶液, 即得。

2.2.2 供试品溶液的制备

取本品内容物, 研细, 取约1.5g, 精密称定, 精密加入甲醇50mL, 称定重量, 超声处理30min, 放冷, 再称定重量, 用甲醇补足减失的重量, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 即得。

2.2.3 阴性对照溶液

按处方比例称取除穿心莲以外的其余味药, 按玉叶清火胶囊制备工艺制成缺穿心莲阴性样品;按2.2.2项下操作, 制成缺穿心莲的阴性对照溶液。

2.3系统适用性试验

在上述色谱条件下, 穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的保留时间分别为8.42min和23.38min, 与相邻色谱峰的分离度均大于1.5, 对称因子在0.95～1.05之间, 理论塔板数按穿心莲内酯计算不低于4000, 按脱水穿心莲内酯计算不低于8000。阴性对照对样品测定无干扰。结果见图1、图2。

2.4专属性考察

取缺穿心莲阴性样品按供试品溶液制备方法制备, 进样, 测定。图谱表明在该色谱条件下, 阴性对照无干扰, 结果见图3。

1-穿心莲内脂;2-脱水穿心莲内脂

2.5供试品测定

按上述色谱条件, 取供试品溶液, 进样, 测定。图谱中供试品溶液与对照品溶液有相同的色谱峰, 表明供试品为穿心莲内脂和脱水穿心莲内脂, 如图4。

2.6标准曲线的制备

精密称取穿心莲内酯13.52mg, 脱水穿心莲内酯对照品25.76mg置100mL量瓶中, 摇匀, 作为对照品储备溶液 (浓度分别为0.1352, 0.2576mg/mL) 。精密量取对照品储备溶液0.5、1、2、4、8mL, 分别置10mL量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 分别精密吸取上述6个对照品溶液各10mL, 按正文拟定的色谱条件测定。以穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品进样量 (g) 为横坐标 (X) , 峰面积积分值为纵坐标 (Y) 绘制标准曲线, 得回归方程为:

穿心莲内酯:Y=823520X+4333.3 (r=0.9998)

脱水穿心莲内酯:Y=1762866X-5264 (r=0.9997)

结果表明:当穿心莲内酯在0.00676～0.1082g范围内, 脱水穿心莲内酯在0.01288～0.2061g时, 进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.7精密度实验

取同一份供试品溶液, 按上述色谱条件, 连续进样6次, 测定峰面积积分值, 穿心莲内酯的RSD为0.36%, 脱水穿心莲内酯的RSD为0.29%。

2.8稳定性实验

取同一份样品溶液, 放置0, 1, 2, 4, 8, 12h, 按上述色谱条件, 分别测定峰面积积分值, RSD为0.82%。

2.9重复性实验

精密称取同一批的样品6份, 按上述方法试验, 结果穿心莲内酯的平均含量为0.912mg/g, RSD=1.47%, 脱水穿心莲内酯平均含量为2.024mg/g, RSD=1.06%。

2.10加样回收率实验

精密量取线性关系项下穿心莲内酯对照品储备溶液 (浓度为0.1352mg/mL) 50mL, 置500mL量瓶中, 精密称取脱水穿心莲内酯对照品12.46mg置同一量瓶中, 加甲醇使溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为对照品溶液 (穿心莲内酯浓度为13.52g/mL, 脱水穿心莲内酯浓度为24.92g/mL) 。精密称取重复性试验项下的玉叶清火胶囊 (穿心莲内酯含量0.912mg/g, 脱水穿心莲内酯含量2.068mg/g) 约0.75g, 平行取6份样, 分别精密加入上述对照品溶液各50mL, 按正文拟订的方法提取、测定, 计算回收率, 结果详见表1, 表2。

3讨论

尝试了乙腈-水以及甲醇-水等不同的浓度比, 发现甲醇-水 (50∶50) 峰形对称, 无干扰, 故选择为流动相。

摘要：目的:建立测定玉叶清火胶囊中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量的高效液相色谱法。方法:采用VP-ODS柱C18 (250mm×4.6mm, 5μm) 柱分离, 以甲醇?水 (55∶45) 为流动相, 在250nm处检测。结果:穿心莲内酯在0.006760.1082g范围内线性关系良好 (r=0.9998) , 平均回收率为98.82%, RSD=0.8% (n=6) ;脱水穿心莲内酯在0.012880.2061g范围内线性关系良好 (r=0.9997) , 平均回收率为98.95%, RSD=1.6% (n=6) 。结论:该法操作简便, 方法稳定, 专属性强, 可作为该制剂的质量控制方法。

关键词：玉叶清火胶囊,HPLC,穿心莲内酯,脱水穿心莲内酯

参考文献

13.HPLC法测定纺织品中AP和APEO 篇十三

建立了气相色谱测定废水中5种苯胺类化合物的方法,优化了试验条件.方法在0 mg/L～100 mg/L之间线性关系良好,N,N-二甲苯胺、苯胺、对甲苯胺、间甲苯胺、邻甲苯胺的检出限分别为0.004 mg/L、0.002 mg/L、0.013 mg/L、0.008 mg/L、0.007 mg/L,实际废水样品测定的RSD≤1.5%,加标回收率为93.8%～99.5%.

作 者：邓延慧 夏明芳 王志良 王建秋 邱阳 DENG Yan-hui XIA Ming-fang WANG Zhi-liang WANG Jian-qiu QIU Yang 作者单位：邓延慧,夏明芳,王志良,邱阳,DENG Yan-hui,XIA Ming-fang,WANG Zhi-liang,QIU Yang(江苏省环境科学研究院,江苏省环境工程重点实验室,江苏,南京,210036)

王建秋,WANG Jian-qiu(江苏省环境应急与事故调查中心,江苏,南京,210036)

14.HPLC法测定纺织品中AP和APEO 篇十四

反相高效液相色谱法同时测定生物转化液中苯乙酮和肉桂酸

建立RP-HPLC法测定生物转化液中苯乙酮和肉桂酸的.含量.色谱条件:采用Kromasil-100A C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);以甲醇-水-冰醋酸(体积比为75 ∶ 25 ∶ 0.05)为流动相;流速为1.0 mL/min;检测波长为246 nm;柱温为室温.结果表明,苯乙酮在1.60～320.0 μg/mL范围内呈良好线性关系(r=0.999 2);肉桂酸在2.00～400.0 μg/mL范围内呈良好线性关系(r=0.999 6).苯乙酮和肉桂酸的平均回收率分别为100.42%和101.75%,相对标准偏差(RSD)分别为1.3%和1.7%.

作 者：韦一萍 马丽 刘雄民 周海峰 WEI Yi-ping MA Li LIU Xiong-min ZHOU Hai-feng 作者单位：广西大学,化学化工学院,广西,南宁,530004刊 名：应用化工 ISTIC英文刊名：APPLIED CHEMICAL INDUSTRY年，卷(期)：200938(2)分类号：O657.7+2关键词：苯乙酮 肉桂酸 生物转化液 反相高效液相色谱法

15.HPLC法测定纺织品中AP和APEO 篇十五

1 仪器与试药

1.1 仪器

10A-vp高效液相色谱仪 (日本岛津制作社) , DAD检测器, ShimadzuCLAS VP色谱工作站, 离心分离机 (型号KUBOTA5400, 上海手术器械厂) , 电子天平 (Sartorius R200D型, 德国) , 小型粉碎机 (型号Y-308B) , TYPE-YUG101型全自动速控中药制丸机 (甘肃天水华圆制药设备有限公司) , 微波真空干燥仪 (甘肃天水华圆制药设备有限公司) 。

1.2 试药

芍药苷对照品 (110736-200702) , 供含量测定用;甘草酸铵对照品 (110731-200614) , 供含量测定用。均购自中国药品生物制品检定所。CH3-CN为色谱纯 (美国Tediagongs) , 甲醇为色谱纯, 水为蒸馏水 (自制, 临用前经0.45μm微孔滤膜抽滤) , 其他试剂均符合中国药典2010版标准。

2 材料与方法

2.1 血府逐瘀丸组方药材来源, 见表1。

上述11味药材经甘肃省中医院中药检测室鉴定, 均符合药典2010版中国药典各药材项下规定标准。

2.2 样品制备

2.2.1 药材细粉样品的制备

按照血府逐瘀丸处方中原料药物配比, 精确称取各药。当归6g、川芎3g、生地6g、桃仁8g、红花6g、枳实4g、赤芍4g、柴胡2g、甘草2g、桔梗3g、牛膝6g。混合粉碎, 通过100目筛。

2.2.2 药物流浸膏样品的制备

当归26.4g、川芎13.2g、生地26.4g、桃仁35.2g、红花26.4g、枳实17.6g、赤芍17.6g、柴胡8.8g、甘草8.8g、桔梗13.2g、牛膝26.4g。按处方比例称取中药饮片, 加8～10倍量的水煎煮2次, 每次煎煮1h。合并滤液, 减压浓缩成稠浸膏, 收膏116g, 干湿32.5%, 收率54%。

2.2.3 丸剂药粉样品的制备

取浸膏与药材细粉, 按2∶1比例混合, 制成半浸膏浓缩丸, 置于45℃恒温条件下微波干燥10min (所得丸剂含水量为6.2%) , 将丸剂粉碎, 备用。

3 含量测定

3.1 甘草酸的含量测定

3.1.1 色谱条件

色谱柱:Zorbax SB-C18 (250×4.6mm, 5μm) , 流动相为CH3CN∶H3PO4 (0.05%) =23∶77;流速1.0mL/min, 检测波长237nm, 柱温:30℃, 理论板数按甘草酸峰计不低于2000, 进样量10µL[1,2]。

3.1.2 对照品溶液的制备

精密称取甘草酸铵对照品10.65mg, 置于50mL容量瓶中, 加CH3CH2OH定容至刻度。C=0.213mg/mL (甘草酸重量=甘草酸铵/1.0207) 。

3.1.3 供试品溶液的制备

精密称取2.2.1、2.2.2、2.2.3项下的药粉样品10.0018g, 浸膏样品5.0002g, 丸剂粉末样品2.4993g, 分别置于锥形瓶中, 精密加入70%的CH3COOH 100mL, 称定重量, 超声处理 (250W, 40HZ) 30min, 放冷, 再称定重量, 补足减失的重量, 摇匀, 离心分离, 用0.45µm的水系微孔滤膜过滤, 取续滤液, 即得[3]。

3.1.4 标准曲线的绘制

精密称取甘草酸铵对照品, 加适量70%的乙醇配成浓度为2.07mg/mL的溶液, 精密量取0.2、0.5、1.0、1.5、2.0mL, 分别置于10mL棕色容量瓶中, 加70%的乙醇至刻度, 摇匀, 取10μL, 进样, 液相测定, 记录峰面积[4]。以浓度 (X) 为横坐标, 峰面积为纵坐标, 进行线性回归, 得回归方程:Y=157863X-40.377 (r=0.9995) 。

3.1.5 精密度试验

精密吸取3.1.2项下的对照品溶液10μL, 分别连续进样6次, 结果甘草酸峰面积的RSD=0.26%, n=6。

3.1.6 重现性考察

取2.2.3项下丸剂粉末样品3g, 精密称定, 按照3.1.3供试品溶液的制备方法, 平行制备6份样品, 用0.45μm微孔滤膜滤过, 分别进样10μL, 测定结果甘草酸平均含量为1.39mg/g, RSD=2.71%。

3.1.7 稳定性试验

取重复性试验中的样品溶液溶液, 照上述色谱条件在0、1、2、4、6、8 h分别进样10μL, 测定, 记录甘草酸峰面积。结果峰面积RSD为1.8%, 表明8h内结果稳定。

3.2 芍药苷的含量测定

3.2.1 色谱条件

色谱柱:Dikma Technologles (C18-250×4.6mm, 5μm) , 流动相CH3OH:0.05mol/L磷酸二磷酸二氢钾溶液 (40∶65) [3]。柱温25℃, 流速1mL/min, 检测波长230nm, 进样量10μL, 理论板数按芍药苷计不低于3000。

3.2.2 对照品溶液的制备

精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36h的芍药苷对照品12.53mg, 置25mL容量瓶中, 加甲醇溶解并定容至刻度, 制成0.5012mg/mL的对照品溶液[4]。

3.2.3 供试品溶液的制备

分别称取2.2.1、2.2.2、2.2.3项中的细粉样品2.0g、流浸膏样品5g, 丸剂粉末样品3g, 精密称定, 置锥形瓶中, 精密加入甲醇25mL, 称定重量, 放置4h, 超声处理20min, 放冷再称定重量, 补足减失的甲醇, 摇匀, 用0.45μm微孔滤膜滤过, 取续滤液, 即得。

3.2.4 线性关系考察

精密吸取3.2.2项下对照品溶液 (0.5012mg/mL) 4、8、10、1 2、1 6μL, 按上述条件分别进样测定, 以进样量对峰面积进行回归, 得回归方程Y=201400X-56300 (r=0.9998) , 表明芍药苷在2.048～10.024μg具有良好的线性关系。

3.2.5 精密度试验

精密吸取3.2.2项下的对照品溶液10μL, 分别连续进样6次, 结果芍药苷峰面积的RSD=0.62%, n=6;表明精密度良好。

3.2.6 重现性考察

取2.2.3项下丸剂粉末样品3.0g, 按照3.2.3项下供试品溶液的制备方法, 平行制备6份样品, 用0.45μm微孔滤膜滤过, 分别进样10μL测定含量, 结果芍药苷平均含量为2.57mg/g, RSD=3.8%。

3.2.7 稳定性试验

取3.2.6中的第1份溶液, 照上述色谱条件在0、1、2、4、6、8 h分别进样10μL, 测定, 记录峰面积.结果芍药苷峰面积RSD为2.6%, 表明8h内结果稳定。

4 结果

见表2。

5 讨论

采用HPLC法对血府逐瘀丸中Gly、Pae的转移率实验研究结果表明, 丸剂成品中的Gly含量为6.34mg/4.56g, Pae的含量为11.43mg4.56g, 而内控标准为Gly6～18mg/4.56g, Pae12～36mg/4.56g, 前者的Gly和Pae含量均在内控规定的下限范围。根据内控标准及本实验中甘草酸与芍药苷的转移率实验, 反推前体原料药材甘草和芍药中Gly、Pae的含量范围, 获得的实验数据为甘草中甘草酸的含量范围为:2.16%～6.48%;芍药中芍药苷的含量范围为3.84%～11.52%。结果表明, 血府逐瘀丸的内在质量优劣, 与组方中前体原料药材质量密切相关。实验研究证明, 要有效控制和提高制剂的内在质量, 其组方中前体药材应选择正品、道地、质优的原料, 并严格规范生产工艺, 方能保证产品内在质量。

参考文献

[1]Tian L, Gao XL.Study on the dissolution ofcompound Glycyrrhzin tablets[J].Chin JMAP, 2009, 26 (6) :471-474.

[2]Fu YH.Determination ofammonium glycyrrhizinate incompound glycyrrhizin injection by HPHC[J].Phin Tradit Patent Med, 2006, 28 (6) :913-914.

[3]冯俭.高效液相色谱法测定狼疮灵颗粒中芍药苷的含量[J].广州医药, 2010, 41 (5) :57.