常用细胞凋亡检测方法

2024-09-21|版权声明|我要投稿

常用细胞凋亡检测方法(精选15篇)

1.常用细胞凋亡检测方法 篇一

1 材料及方法

1.1 材料

组织标本选自广西壮族自治区人民医院及广西医科大学第一、九附属医院2003~2006年临床诊断及手术切除、经病理证实的甲状腺肿瘤组织(87例)的石蜡包埋标本。其中,甲状腺腺癌64例,包含甲状腺乳头状腺癌38例,滤泡状腺癌21例,未分化癌5例。男性为26例,女性38例;平均年龄(47.1±9.3)岁;甲状腺腺瘤23例,男8例,女15例,平均年龄(43.2±6.5)岁。其中诊断甲状腺腺癌的患者术前均未接受任何抗癌治疗。

1.2 试剂及方法

原位细胞凋亡(TuNEL)试剂盒(天津灏洋生物技术公司),鼠抗人即用型hTERT单克隆抗体(福州迈新生物技术公司)。免疫组织化学SP方法按说明书进行。应用德国徕卡病理图像分析仪(型号:DMR+Q550)进行观察和显微照相。根据文献[1]的判断方法对结果进行判断。原位凋亡细胞定位于细胞核,在高倍镜下随机选择10个视野,计数1 000个肿瘤细胞,计算阳性细胞百分率,即为凋亡指数(AI);hTERT定位于细胞核,以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性,其免疫组织化学结果计算面积灰度值,免疫组织化学的反应强弱与灰度值呈反比,其灰度值愈大则阳性反应物的阳性强度愈小。

1.3 统计学处理

所有数据均用SPSS 13.0统计学软件包进行统计学处理。所有数据均用SPSS13统计学软件包进行统计学处理。腺癌组与腺瘤组组间比较采用t检验,各癌亚组组间比较采用方差分析。相关性分析应用spearman相关分析。P<0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 原发性甲状腺肿瘤AI表达免疫组织化学结果

在所有甲状腺肿瘤组织中均能观测到不同程度棕黄着色细胞颗粒,即为凋亡细胞,腺瘤组着色细胞多为棕红色,分布局限,其AI值为(27.39±16.13);而甲状腺癌组中,AI=40.81±12.59。着色细胞颗粒在各种癌变病理类型中分布存在差异:乳头状癌变细胞主要以棕黄色表达为主,而且分布弥漫,其AI值为(41.15±21.26);滤泡状癌主要以核膜表达为主,而分布局限于滤泡周边,其AI值为(37.82±19.34);未分化腺癌组织表达多为浅黄色,分布弥漫,其AI值为(39.15±14.02)。各组间经t检验及方差分析:腺癌组与腺瘤组相比差异有统计学意义(t=4.0604,P=0.001),各癌亚组组间差异无统计学意义(乳头状癌vs滤泡状癌,t=0.5943,P=0.5547;乳头状癌vs未分化癌,t=0.2034,P=0.8398;滤泡状癌vs未分化癌,t=0.144,P=0.8867)。

2.2 原发性甲状腺肿瘤hTERT及表达情况

hTERT表达在腺瘤组着色细胞多为浅黄色,分布零散,多数标本缺如,其灰度值为(137.48±8.29);而甲状腺癌组中,其灰度值为(132.99±6.37)。着色细胞颗粒在各种癌变病理类型中分布存在差异:乳头状癌变以浅黄色表达为主,而且分布较弥漫,其灰度值为(133.39±5.22);滤泡状癌及未分化癌主要以褐色表达为主,而且分布呈片状,其灰度值为(132.75±10.48)及(132.61±6.34)。腺癌组及腺瘤组相比差异均有统计学意义(t=2.6696,P=0.0045),各腺癌组组间比较无统计学意义(乳头状癌vs滤泡状癌,t=0.3139,P=0.7547;乳头状癌vs未分化癌,t=0.3071,P=0.7604;滤泡状癌vs未分化癌,t=0.0284,P=0.9776)。

2.3 原发性甲状腺肿瘤AI及hTERT表达相关性分析

原发性甲状腺肿瘤中AI及hTERT的灰度值相关性应用Pearson相关分析后,提示两者呈负相关性(r=-0.38,P=0.0012)。

3 讨论

目前甲状腺癌发病机制研究认为,甲状腺癌不仅是一种增殖和分化异常的疾病,同时也是凋亡异常的疾病。在本研究中发现原发性甲状腺癌AI值显著升高,该结果与林哲等[2]研究相似,故而推断肿瘤生长至一定程度,肿瘤细胞增殖和死亡维持相对平衡,增殖快,恶性程度高的肿瘤细胞凋亡也会增加;相反,细胞增殖越慢,则细胞凋亡越少。在肿瘤组织中,机体的正常生长调节机制障碍,肿瘤细胞增殖加快,凋亡势必增加[3]。

在调控肿瘤细胞凋亡进程中,癌基因激活或突变在该病变中常起关键作用。很多资料发现hTERT相关蛋白的激活是甲状腺癌最重要的易感因素[4,5]。ITO等[6]应用免疫组织化学法观测甲状腺肿瘤的hTERT表达,发现恶性甲状腺肿瘤组织hTERT表达显著升高。本研究结果提示,hTERT在甲状腺癌中表达显著高于腺瘤,与上述研究相似,这提示hTERT在良恶性甲状腺癌中表达差异是鉴别甲状腺生物学行为的重要参考指标。

本研究还发现在甲状腺肿瘤病变中AI与hTERT呈显著负相关性(r=-0.38,P=0.0012)。既往研究发现端粒酶与细胞周期调控、细胞增殖和分化密切相关。当细胞终末分化受可逆性抑制而退出细胞周期时端粒酶活性下调,且分化程度与酶活性呈反向关系;反之,端粒酶被激活,且S期端粒酶活性高于G1及G2/M期[1,7]。故可作以下猜想:hTERT可能参与抑制甲状腺肿瘤细胞凋亡进程,由于在甲状腺恶性组织中hTERT表达的上调,其参与诱导甲状腺肿瘤细胞凋亡功能激活,癌细胞得以存活。

综上所述,hTERT作为调控细胞凋亡重要蛋白,可能参与抑制甲状腺肿瘤组织凋亡的进程,其与AI表达差异可以作为鉴别甲状腺良恶性肿瘤指标之一。

摘要:目的研究原位细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)及端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)在原发性甲状腺肿瘤中表达及其与病变的关系。方法对87例原发性甲状腺肿瘤(乳头状腺癌38例,滤泡状腺癌21例,未分化癌5例,腺瘤23例)分别应用原位细胞凋亡检测(TuNEL)试剂盒测定AI及应用免疫组织化学方法检测hTERT表达情况。结果AI及hTERT在腺癌表达显著高于腺瘤组(P<0.01);AI及hTERT灰度值呈负相关性(r=-0.38,P<0.05)。结论AI及hTERT的表达与甲状腺肿瘤显著相关,检测AI及hTERT水平对鉴别甲状腺肿瘤性质具有重要参考意义。

关键词:甲状腺癌,细胞凋亡,端粒酶逆转录酶,鉴别诊断

参考文献

[1]YAN P,BENHATTAR J,SEELENTAG W,et al.Immunohisto-chemical localization of hTERT protein in human tissues[J].His-tochemistry and Cell Biology,2004,211(5):391-397.

[2]林哲,王庆国,曲姗姗,等.甲状腺癌中细胞凋亡指数的检测及其意义[J].中国实验诊断学,2006,10(1):42-44.[2]LIN Z,WANG QG,QU SS,et al.Detection and significance of apoptosis index in patients with thyroid carcinoma[J].Chinese Journal of Laboratory Diagnosis,2006,10(1):42-44.Chinese

[3]高虹,丛琦,全成实,等.甲状腺癌组织中凋亡相关蛋白Fas,FasL,Bcl-2和Bax的表达及意义[J].实用肿瘤学杂志2005,19(4):273-276.[3]GAO H,CONG Q,QUAN CH,et al.Expression and clininal significance of apoptosis related proteins Fas,FasL,Bcl-2and Bax in thyroid cancer[J].Journal of Practical Oncology,2005,19(4):273-276.Chinese

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[5]WANG SL,CHEN WT,WU MT,et al.Expression of human telomerase reverse transcriptase in thyroid follicular neoplasms:an immunohistochemical study[J].Endocr Pathol2005,16(3):211-218.

[6]ITO Y,YOSHIDA H,TOMODA C,et al.Telomerase activity in thyroid neoplasms evaluated by the expression of human telom-erase reverse transcriptase(hTERT).Anticancer Res,2005,25(1B):509-514.

2.浅析常用建筑钢材检测方法 篇二

摘要:建筑钢材的质量是整个工程能否安全顺利的完成重要保证,它不仅仅影响着整个建筑工程的总体质量,而且影响着居民的财产安全与生命安全。并且近些年来,各种因为建筑钢材的质量出现问题,而导致发生重大的事故的新闻屡见不鲜,受到了群众的广泛关注,所以建筑钢材的质量是不容忽视并且不可马虎的。所以本文就重点浅析了几种常用的建筑钢材的检测方法,从而为建筑钢材的质量检测提供参考。

关键词:建筑钢材;检测方法;质量

几乎所有的土木工程施工项目中都需要用到建筑钢材,并且钢材是施工中基础的材料,钢材的质量从根本上影响着整个项目的质量,所以,建筑人员要学会如何检测建筑钢材质量的基本方法,保证施工时使用的钢材的质量,从而保障建筑物的质量。下面,作者就结合近几年来先进的检测技术,从钢料、钢材结构还有焊缝等三个方面进行分析,浅析施工中常用的建筑钢材检测的方法。

一、常见建筑钢材出现的问题

造成建筑钢材出现问题的原因有许多种,其中最常见的三种是窄带钢、角钢以及螺纹钢。下面,作者就重点通过这三个方面的原因进行讨论。

1、螺纹钢常见的质量问题

螺纹钢是建筑钢材的骨架钢筋,是商业大厦、桥梁、房屋等建筑物核心的部位,所以螺纹钢的质量安全尤为重要,它关乎整个建筑的质量安全以及人们的自身安全与财产安全。螺纹钢常见的质量问题包括两类,螺纹钢坯的断裂以及螺纹钢的脆断。

(1)螺纹钢坯出现断裂现象。螺纹钢坯是施工建筑过程中经常会用到的建筑钢材之一,螺纹钢的钢坯在使用过程中经常会出现脆性断裂的现象,而在钢坯的断层处有许多肉眼可见的颗粒状杂质,正是因为这些杂质,才导致钢坯断裂现象的出现,从而极大的影响了整个施工的质量。研究人员在对钢坯断层处进行低倍分析之后发现,钢坯断裂处钢材的质量很差,严重的影响了钢坯以及螺纹钢的质量。并且对一些内部已经出现细微裂纹的钢坯进行低倍分析后发现,这些表面看似完好但是内部已经出现裂纹的钢坯,其质量已经令人堪忧。所以,如果螺纹钢内部出现断裂,会导致螺纹钢内部的钢坯变得异常脆弱,特别是如果当螺纹钢遭受到外部的阻力的时候,螺纹钢内部的裂纹以及杂质现象就会变得更加严重,长期以往,钢坯内部的就会出现突破口,最终将会导致螺纹钢坯出现断裂现象。

(2)螺纹钢出现脆断现象。螺纹钢出现脆断现象的主要原因是因为螺纹钢内部钢材的非金属杂质超标,使其钢材的硬度过低,在施工中容易出现脆断现象。还有一种原因是因为在施工的过程中,建筑人员的技术水平不达标,再对螺纹钢使用时的操作方法不当,也容易使螺纹钢出现脆断现象。

2、角钢常见的质量问题

角钢是由碳素结构组成的钢,是一种断面型钢材,这种钢所需要的技术含量不高,一般用于船舶、输电塔、起重运输装置、桥梁以及房梁等建筑中,是建筑工程中经常使用到的一种钢材。角钢的生产比较严格,需要生产单位具有良好的机械强度、塑性可变形性能以及可焊性,所以很多生产单位的技术水平未能达标,也导致生产的角钢出现了许多质量问题。例如许多生产钢铁的企业在生产角钢时因为设备的技术水平不达标,导致在生产高强度的角钢时会导致生产出来的角钢轧制压缩的整体比例较小,使角钢的性能以及质量不能得到保障。除此之外,这样也会导致生产的角钢的厚度不能统一,提高了控制钢料的难度,最终会使轧制的精准度出现严重的偏差,并且难以统一,给建筑施工带来了很大的难度,也对整体施工的安全质量造成了很大的影响。

3、窄带钢常见的质量问题

在建筑学中,窄带钢是一种宽度小于600mm的热扎窄带钢,其主要的提供形式是卷状,它主要是金属构件、焊管等建筑钢材的材料。因为窄带钢是一种热扎窄带钢,所以其生产的方法与热扎窄带钢一致,其唯一的要求就是要求边缘要足够平滑,不能存在毛刺,进而能够保证整个窄带钢的质量。因为窄带钢的质量要求比较低,所以一般很难出现什么重大的质量问题。

二、常见的建筑钢材检测方法

建筑材料的质量关乎整个工程的质量与安全,所以在施工之前,技术人员一定要对建筑材料的质量进行检测,特别是建筑钢材的质量,因为建筑钢材是建筑工程中最关键的材料之一,一般用于民用房以及工业的房屋建筑、道路、桥梁、国防建设等工程中。检测钢材硬度的方法有很多种,如洛氏硬度法、布氏硬度法、维氏硬度法等等。下面就具体分析几种常见的建筑钢材检测方法,以及检测过程中经常出现的问题以及解决方法。

1、钢材伸长率以及抗拉强度。技术人员在检测钢材伸长率以及抗拉强度时,需要对钢材的伸长率、抗拉强度以及屈服点进行测量,从而根据测量结果,判断钢材的质量是否合格。测试時需要使用到的方法包括弹性极限应力的测定、屈服点、试样最初标记以及横街面积的测量等等。

2、钢材的冲击韧性。钢材的冲击韧性是指钢材在塑形以及发生断裂的时候能够吸取能力的一种能量。在进行冲击韧性检测的时候,将具备相应尺寸以及相应形状的样式放置在测试仪器的支座上,使其调整至简支梁的平衡状态之下,之后在慢慢升至一定高度,然后摆锤降落,使其产生一定的中立势能将测试样品炸断,从而测试其所吸收的能。

3、确定检测项目。目前我国建筑工程项目需要用到的建筑材料种类十分丰富,并且每一种材料在进入施工场地时都需要经行严格细致的检查,检查的标准就必须符合我国相关建筑部门以及建筑行业制定的规定。例如建筑中用到的水泥,施工人员应该抽样检查相同批次水泥的凝固时间、细度、安定性以及强度等等,从而保证整个建筑工程的质量安全。

4、科学取样。对建筑钢材进行检测,第一步就是如果取样,取样的钢材要具有代表性和针对性。一般都是在相同钢材的不同部分中随机抽取一定比例的钢材作为样品进行检测,在选取样品时,不仅要保证抽取样品的数量不能太多或者过少,还要保证抽样的方式要符合国家或者相关部门的条例。这是因为样品的数量关乎整个检测的结果,太多会导致检测时间过长,耽误施工;数量过少会导致抽样结果不够准确,容易出现偏差,从而大大影响检测的结果。除此之外,检测人员还要注意抽样方式、抽样数据以及重复抽样方面的错误。

5、外部环境。检测时其周围环境的不同也将影响检测的结果,所以检测人员应该对检测钢材进行保护,保证建筑钢材的性能不受破坏。并且在进行检测的时候,要对外部环境制定一定的规定,保证建筑钢材周围环境的湿度以及温度,从而提高钢材检测的准确性。

6、实验误差。检测中存在的误差有很多种,类似人为原因、湿度温度的误差、操作方式不当等等。特别是检测人员操作方式不当,不仅仅会导致检测数据有误,而且会发生许多错误,出现许多安全隐患。

7、数据处理。如果一组建筑钢材的测试数据的离散性较大时,检测人员需要重新对这组钢材进行检测以及整合,从而保证数据以及结论的正确性。比如在进行钢筋拉伸测试的时候,同一组样品的伸长率的平均值超过了10%,这说明这组数据一定存在这错误,需要重新对其进行整合。

【总结】总之,建筑钢材的质量不仅仅关乎整个施工项目的质量,而且还关乎人民的自身安全与财产安全。所以,我们要积极做好建筑钢材的检测工作,加强检测人员的技术水平,不断结合先进技术优化检测方法,从根本上抑制劣质钢材进入施工,从而保证整个项目的施工安全。

参考文献:

[1]冷炯.浅析常用建筑钢材检测方法[J].电子测试,2014,08:148-149.

[2]赵小珍.浅析常用建筑钢材检测方法[J].科学之友,2011,04:28-29.

[3]王鑫,王明星.浅析建筑结构常用检测方法与加固技术[J].民营科技,2011,05:316.

[4]靳萍,刘春晓.浅析建筑钢材检测及试验[J].黑龙江科技信息,2010,12:24.

[5]苗静.常用建筑钢材试验检测方法[J].黑龙江科技信息,2010,19:248.

3.细胞凋亡实验技术总结 篇三

1、光学显微镜和倒置显微镜观察法

未染色细胞:凋亡细胞体积变小、变形,膜完整但出现发泡现象,晚期出现凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩,变圆,脱落。染色细胞:姬姆萨染色,瑞氏染色等。凋亡细胞染色质浓缩,边缘化,核膜裂解,染色质分割成块状,形成凋亡小体。

2、荧光显微镜检测法-荧光染料

例如,碘化丙啶(PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI 能够透过细胞膜而使细胞核红染。选用536nm 激发光,细胞核呈红色荧光。

3、电子显微镜

收集细胞,2.5%戊二醛4°C 固定24h,1%四氧化锇后固定,丙酮梯度脱水,经包埋剂浸透后环氧树脂包埋,超薄切片,醋酸铀和枸橼酸铅双重染色,透射电镜观察。凋亡Ⅰ期的细胞核内染色质高度盘绕,出现许多称为气穴现象的空泡结构。Ⅱa 期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期,细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。

4、激光扫描共焦显微镜技术

FITC-AnnexinV+PI双染,观察凋亡过程中细胞膜PS表面的变化,并区分正常细胞(An-PI-),早期凋亡细胞(An+PI-),晚期凋亡细胞及坏死细胞(An+PI+),细胞收集过程中出现的损伤细胞(An-PI+)。

二、细胞凋亡的生化及分子生物学检测

1、DNA 断裂检测法

如使用琼脂糖凝胶电泳检测,细胞凋亡时,核染色质凝聚,染色质DNA 在核小体单位之间的连接处断裂。凋亡早期可形成50~300kbp 的DNA 大片段,晚期核酸内切酶在核小体之间剪切核DNA,产生大量长度在180~200bp 整数倍的寡核苷酸片段。

2、膜联蛋白V 法

磷脂酰丝氨酸(PS)位于正常细胞膜的内侧,但在细胞凋亡的早期,PS 可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜表面。Annexin-Ⅴ(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD 的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白,与PS高亲和力。将Annexin-Ⅴ进行荧光素或生物素标记,以标记了的Annexin-Ⅴ作为探针,利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。

3、细胞凋亡的酶Caspase检测

检测Caspase活力可用免疫杂交技术分析酶原的加工和底物水解的产物,或用人工底物检测酶活力,也可对活化的Caspase做亲和标记。例如分析底物的水解产物,PARP(多聚ADP-核糖聚合酶)第一个被认识的caspase-3底物,它的相对分子质量为116000,水解后形成相对分子质量为85000 及相对分子质量为25000 的两个片段,用抗相对分子质量为85000 片段的抗体检测细胞是否发生凋亡。

4、线粒体膜势能变化的检测

4.细胞凋亡概念教学设计 篇四

人的一生要经历出生、生长、成熟、繁殖、衰老直至最后的死亡的生命历程。活细胞也一样,细胞总是会死亡的。细胞是怎么死亡的呢?科学家在显微镜下观察到图1所示的两种细胞死亡的途径,1→2→3→4为甲途径,1→5→6为乙途径。请分析:(1)两种细胞死亡的途径中,细胞膜的变化是否相同?(2)两种细胞死亡的途径,那一种更为有序?(3)那种死亡途径对周围细胞影响较小?(4)你觉得机体内,细胞的正常死亡应该是那种途径?

通过对以上问题的思考和教师的引导,学生能够抓住两种细胞死亡方式的主要区别:

甲种途径,细胞膜始终保持完整,细胞内容物没有逸散,细胞是很“卫生”的死,死的“干干净净”

乙种途径,细胞膜破裂,细胞内容物释放到组织液,会对周围细胞造成影响,会引起炎症反应。

此时,介绍细胞凋亡和细胞坏死的的概念,水到渠成。细胞凋亡是指由基因决定的细胞自动结束生命的过程,主动而有序。由于细胞凋亡受到严格的由遗传机制决定的程序性调控,也被称做细胞程序性死亡。细胞坏死是指极端的物理化学因素刺激引起的细胞损伤和死亡,被动而无序。现在,同学们能体会细胞凋亡中“凋”的含义吗?“凋”有凋落、凋零的意思,如花瓣凋零,树叶凋落,强调这是一种自然的生理过程。如果把细胞坏死比喻为“他杀”,把细胞凋亡比喻为“自杀”,你觉得有道理吗? 2 细胞凋亡的实例

明确细胞凋亡的概念和特点之后,补充一些实例,可以进一步加深学生对概念的理解,并为总结细胞凋亡的意义做准备。以下资料用PPT展示。

资料1:蝌蚪有尾巴,而发育成青蛙后,尾巴消失;人的胚胎发育时期,要经历有尾的阶段;鸡的胚胎发育中过程中,趾间存在蹼状物,但破壳而出的小鸡却没有蹼状物。

资料2:在脊椎动物的胚胎发育过程中产生了过量的神经细胞,这些神经细胞竞争肌肉细胞产生的神经生长因子,只有接受了足够量神经生长因子的神经细胞才能生存,其他的都发生凋亡。有机体通过这种方式来调节神经细胞的数量,建立正确的神经网络联系。神经系统在发育过程中,约有50%的细胞凋亡。如果用基因敲除术将小鼠有关基因敲除后,神经元不发生凋亡,小鼠大脑发育异常,胎死腹中。

资料3:用某种药物处理大鼠,其肝细胞收到刺激开始分裂,导致肝体积增大。当药物作用停止后,发生凋亡的肝细胞数量会明显增加,使得一周之内大鼠的肝就恢复到原来的大小。健康成人的骨髓和肠中,每小时约有10亿个细胞凋亡。

资料4:机体内的正常细胞被病毒感染后,免疫系统中的一种杀伤性T淋巴细胞能分泌一种细胞因子—Fas配体作为死亡信号,与被感染细胞表面的受体结合,启动被感染细胞内的凋亡程序,致使被感染细胞发生凋亡。一些细胞在受损伤或受胁迫的情况下能够同时产生Fas配体和相关受体,结果导致自身的凋亡。3 细胞凋亡的意义 学生阅读完上述资料后,可让学生尝试总结细胞凋亡的意义,如资料1和2说明细胞凋亡有何意义?资料

3、资料4又能说明什么问题?当然,直接让学生总结是比较困难的,如果学生有困难,则可用下面的提问形式来降低难度。

细胞凋亡有以下三种意义,请分析上述的那些资料与之相对应。(1)细胞凋亡保证生物体的正常发育和器官的形态建成;(2)细胞凋亡能维持正常组织中细胞数目的相对稳定;(3)细胞凋亡是细胞的自我保护机制。

5.细胞凋亡中的Caspase家族 篇五

细胞凋亡中的Caspase家族

保守的Asp特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)家族是哺乳动物细胞中程序性死亡(PCD)的介导者和执行者. 原凋亡信号首先活化不同的Caspase启始因子,再由启始因子激活级联下游的Caspase效应分子,最终由效应分子特异地水解细胞中的一系列底物而导致细胞解体.Caspase家族是整个PCD过程的.关键元件,它们通过与众多蛋白质(激活因子或抑制因子)的相互作用来调控细胞的生死存亡.

作 者:朱国萍 程阳 廖军 徐冲 ZHU Guo-Ping CHENG Yang LIAO Jun XU Chong  作者单位:中国科学技术大学生命科学学院,合肥,230026 刊 名:生物化学与生物物理进展  ISTIC SCI PKU英文刊名:PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS 年,卷(期): 27(2) 分类号:Q2 Q55 关键词:Caspase   启始因子   效应分子   激活因子   抑制因子   细胞凋亡  

6.常用细胞凋亡检测方法 篇六

加固房屋是一栋两层烂尾办公楼,分为A、B两个区的”回字形”结构,其中A区为砖混结构,B区为框架结构,由于此楼已建成十多年,一直未曾使用,我了解到當时建设期间,商品混凝土搅拌站较少,以人工现场搅拌为主,再加上浇筑主体时气候为冬季施工,未采取相应措施,风化严重,二楼屋顶经雨水渗透腐蚀,室内屋顶出现较大面积露筋,柱、梁、板框架部分混凝土感观质量较差,我们邀请有资质的房屋检测单位对A区承重墙、B区框架柱、梁进行检测,其中A区承重墙主要采取回弹法检测,此种方法简单、方便、快捷、可进行大范围检测,耗费劳动力较多,使用工具主要有砂浆回弹仪(HT-20)、砖回弹仪(HT-75)、碳化尺等,共抽取六道墙检测砂浆和烧结普通砖强度,检测结果表明砂浆强度值为2.0MPa——4.2MPa,烧结普通砖强度为12.4MPa——14.8MPa,经房屋鉴定机构鉴定,该区砂浆标号较低,需要进行房屋加固。B区框架结构混凝土主要采取钻芯法、拔出法检测,其中钻芯法检测,准确度高,但损坏建筑物,成本高,检测速度慢,拔出法检测,准确度高,但费用高,检测速度慢;钢筋检测方法主要是用钢筋探测仪测定钢筋位置和保护层的厚度。经房屋鉴定机构鉴定,B区混凝土构件不满足承载力要求,部分构件混凝土强度较低,故必须对该区域整体采取加固措施。

我们请具有加固设计相关资质的设计单位的工程师现场查看后,和施工单位协商,分别对A区和B区制定了如下加固方案:

即A区加固方案对于砌筑砂浆等级强度低的墙体,采用耕缝方式置换局部砂浆的加固办法,现场具体施工流程:检查→技术交底→凿缝→监理验收→浇水清理→涂刷901胶水→嵌入@6钢筋→M10混合砂浆分批嵌缝→验收→保养→检查验收。具体做法为拆除原建筑抹灰层直到露出砖面和砖缝,由于原有砖缝松散,因此设计单位要求耕缝深度不小于10mm,浇水清理干净后涂刷901胶水,然后嵌入@6钢筋,用L形@4钢筋使其与墙面固定,接着用M10混合砂浆分批嵌缝,最后用M10水泥砂浆进行墙面抹灰。

B区加固方案为梁、柱、板大部分采取碳纤维加固,局部梁采取增大截面加固,部分框架梁采取包钢加固,板裂缝采取灌浆加固。

碳纤维加固

碳纤维布加固修复混凝土结构技术近些年国内较为流行的加固新方法,是采用配套粘结树脂将碳纤维布粘贴于混凝土表面,使碳纤维片材承受拉应力,并与混凝土变形协调,共同受力,达到提高构件承载能力的目的,起到结构补强和抗震加固的作用。采用碳纤维复合材料对混凝土进行加固,可以在基本不增加截面尺寸及自重的前提下提高承载力的效果,且施工不受场地大小、构件形状的影响。加固后的房屋在使用过程中未见异常现象,结构完好无损,碳纤维复合材料及架梁均处于正常工作状态。

粘结外包型钢加固法

对于部分的框架梁采取了粘结外包型钢加固法,原理是把型钢(钢板)包在被加固构件的外边,即采用环氧树脂化灌浆等方法把被加固钢筋混凝土构件与型钢粘结成一整体,使原构件与型钢整体工作共同受力。加固后的框架梁,由于受拉、受压区钢材截面积增大,从而正截面承载力和刚度都有大幅度提高。该方法常用作框架、柱、桁架、梁和普通钢筋混凝土结构物的加固,特别是构件加固后不允许显著增大原构件截面尺寸,但又要求大幅度提高构件承载能力的钢筋混凝土构件。此种加固方法需要着重注意混凝土和钢板的表面处理,对于旧、脏严重的混凝土构件的粘合面,应先用硬毛刷沾高效洗涤剂,刷除表面油垢、污物后用水冲洗,在对粘合面进行打磨,除去2-3mm厚表层,露出新面和平整,将粉尘清除干净;对于混凝土表面较好的,则可直接对粘合面进行打磨,去除1-2mm厚表层,使之平整,清去粉尘,再用丙酮擦拭表面即可;钢板表面处理应根据其锈蚀情况,可用喷砂、砂布、砂轮机打磨,使钢板出现金属光泽。打磨纹路尽量与受力方向垂直,然后用丙酮擦拭干净。其次要注意对胶粘剂的选择,目前国内市场建筑结构胶粘剂鱼龙混杂,对胶粘剂的选择一定要慎重。第三要注意在配胶、粘贴过程中的细节,胶粘剂要严格按照说明书要求的比例配制,尤其是要掌握好固化剂的用量,搅拌要均匀,同时要在粘贴时要保证粘贴面的饱满、密实。最后要注意在固化阶段不能对钢板有任何扰动。

加大截面加固法

在钢筋混凝土受弯构件受压区加混凝土现浇层,可增加截面有效高度,扩大截面面积,从而提高构件正截面抗弯,斜截面抗剪能力和截面刚度,起到加固补强的作用。在适筋范围内,混凝土弯变构件正截面承载力随钢筋面积和强度的增大而提高。在原构件正截面配筋率不太高的情况下,增大主筋面积可有效地提高原构件正截面抗弯承载力。在截面的受拉区加现浇混凝土围套增加构件截面,通过新加部分和原构件共同工作,可有效地提高构件承载力,改善正常使用性能。

加大截面加固法施工工艺简单、适应性强,并具有成熟的设计和施工经验;适用于梁、板、柱、墙和一般构造物的混凝土的加固;但现场施工的湿作业时间长,对生产和生活有一定的影响,且加固后的建筑物净空有一定的减小。

7.常用细胞凋亡检测方法 篇七

合理利用多媒体辅助教学,帮助学生更好地理解抽象、微观的教学内容,能突出重点、突破难点。

2.主体教育,注重对学生能力的培养

在教学过程中,我注重学生多种能力的培养。如:在教学过程中,我采用让学生自学细胞衰老的特征、对比学习细胞凋亡和细胞坏死等内容,通过学生自主学习、分析讨论教师设置的问题,培养了学生的创新能力、自学能力、分析理解能力、理论联系实际的能力等。

3.注重情感、态度与价值观的渗透

在教学中我有效地落实了三维教学目标,除了知识和能力目标外,我还有意识地注重了对学生情感、态度、价值观的教育。如:可采取哪些措施延缓衰老?科学家诺贝尔奖的获得对于我们有哪些启示?怎样关爱老人?引导学生关注健康的生活方式、关爱他人。

几个缺点:

1.作课经验少,导致的课上随机应变能力比较欠缺,也说明了没有充分地备学生,没有预想到学生课上可能发生的种种情况。

2.授课内容不够深入,比较浅,注重关注课本,挖掘深层次的内容比较少。

3.部分环节时间安排的不够合理,给学生讨论、思考的时间不够充分。

4.本课的各个环节、维度该有的都有,但是很多点还是不很到位,没有深度。

8.常用细胞凋亡检测方法 篇八

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综!述!

”崔国辉

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综述#周克元

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审校

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通讯作者%周克元

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#摘

要$

!”#$%&’(信号通路作为细胞内重要信号转导通路之一“通过影响下

游多种效应分子的活化状态”在细胞内发挥着抑制凋亡!促进增殖的关键作用“它与人类多种肿瘤的发生发展密切相关$本文综述了!”#$%&’(信号通路的组成与功能!调节以及其抗肿瘤细胞凋亡作用机理等方面的研究进展“并就其抗细胞凋亡作用在肿瘤治疗中的应用作了评述”期待为以!“#$%&’(信号通路中关键分子为靶点的肿瘤治疗研究提供参考$

关键词%!”#$%&’(+信号转导+细胞凋亡+肿瘤+靶向治疗中图分类号%K0#L#

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文章编号%MHHHJ+-0N(IGG4)G#OH##)JH-

细胞凋亡是机体细胞在正常生理靶点的肿瘤治疗研究正在深入&4’$

或病理状态下发生的一种自发的!程序化的死亡过程“它的发生受到机体!”#$%&’()信号通路的组成与

的严密调控#目前认为“细胞内的基因功能

直接控制着细胞凋亡的发生和发展”#%磷酸肌醇激酶(56785679:789(9;

而细胞外部因素通过信号转导影响这#%’9:=8

些细胞内基因的表达或其表达产物的因“

是肌醇与磷脂酰肌醇

活化”从而间接地调控细胞凋亡$细胞(567856=(9;>?9:789(7?“!”)的重要激酶“凋亡异常与多种疾病的发生发展有着正常情况下”由其活化而产生的类脂直接的联系“包括肿瘤%病毒性疾病及产物有#”+%二磷酸磷脂酰肌醇&!“(#”

多种退行性病变$研究表明“组成性活+)!*’%#”,%二磷酸磷脂酰肌醇&!“(#”化的!“#$%&’(信号通路在广泛的人类,)!*’和#”+“,%三磷酸磷脂酰肌醇&!”

肿瘤谱中失调“如卵巢癌&)’”乳腺癌&)’“(#”+“,)!#’#!”(#“+”,)!#作为细胞恶性胶质瘤&*’“子宫内膜癌’”成神经内的第二信使“是&’((又名蛋白激酶

管细胞瘤&+’”鼻咽癌&,’“骨髓增生异常@”!$@)转位于胞膜并被活化所必需

综合征&-’等$其主要是由于!“$#.&基的#!”#$与&’(组成的!“#$%&’(信号因编码的!”#$扩增和/或其他多种因通路在细胞的增殖和存活中起着重要素导致的&’(的过度活化&0’“或者是该的作用&A’#

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导致的功能缺失&+’$目前“以!”#$%&’(基磷酸化的磷脂酰肌醇激酶#已发现信号通路中组成性活化的关键分子为

三种!“#$同工酶”其中研究最广泛的

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9.细胞自噬,不是凋亡是生存 篇九

生物学家通过对选定的生物物种进行科学研究,来揭示某种具有普遍规律的生命现象。此时,这种被选定的生物物种就是模式生物。例如果蝇,有谁会想到,这种红眼、双翅、羽状触角芒、身体分节、黄褐色的小昆虫,在近百年间竟然能够“成就”好几位获得诺贝尔奖的大科学家。

什么是自噬?

大隅良典研究的是酵母的细胞自噬机制。酿酒酵母是一种 模式生物 ,非常经典。经过20多年的研究,在酵母里已经发现了34种与自噬有关的基因。那么自噬到底是什么?当你真的了解它以后,你会发现,原来细胞这么“聪明”!

自噬,不就是自己吃自己吗?可以这样理解。自噬就是细胞自己降解自己结构的过程,即把一些暂时用不上的零件,拆解变成最小的模块,然后重新组装成自己需要的东西,这就是自噬。在植物细胞和酵母细胞里,自噬在液泡中发生。而在动物细胞里,自噬在溶酶体里发生。从一个蛋白质到整个细胞器,都是可以降解的。

自噬是细胞内分解代谢的一种途径。除此之外还有一种途径,称之为泛素蛋白酶体途径。简单说就是在蛋白质上加个泛素,做个标记,然后送进蛋白酶体中完成消化。

发现细胞自噬

首次提出自噬这一概念的,是诺贝尔奖生理学或医学奖获得者、比利时细胞和生物化学家克里斯汀·德·迪夫。他在20世纪50年代通过电子显微镜观察到自噬体,并在1963年溶酶体国际会议上正式提出,他也因此被誉为“自噬之父”。

到了20世纪90年代,大隅良典开始用酵母研究自噬。再后来越来越多科学家加入了研究自噬的队伍。

细胞自噬其实分为三种方式,这是根据如何“打包”物质和如何运送物质来划分的。

第一种叫宏自噬,也叫巨自噬,顾名思义就是自噬体比较大,用细胞膜或者其他的双层膜去把那些不想要的东西包裹起来,然后和溶酶体融合。

第二种叫微自噬。顾名思义就是自噬体比较小,溶酶体或者液泡直接用自身去吞噬那些需要降解的东西,也许是细胞器,也许是蛋白质。

第三种叫分子伴侣介导自噬。是指分子伴侣将细胞内的蛋白质先从折叠状态恢复为未折叠的状态,再放到溶酶体里。

这三种方式中,第一种方式是科学家们研究最为透彻的,所以有时自噬就是指巨自噬。而酵母细胞里发生的就是巨自噬。

自噬是这样发生的

首先,细胞核发出一种信号,指示细胞里某个部分需要降解了,或者是某些垃圾诱导细胞产生了某种反应,于是自噬发生了。

接着,自噬体逐渐扩张、收口、包裹那些垃圾。自噬体一般是球型的。

然后,自噬体和液泡或者溶酶体融合。

最后,在融合以后,细胞中那些暂时不需要的物质在某些酶的作用下便分解了,分解成氨基酸、脂肪酸之类,剩下的残渣就排出细胞了。当然也可能暂时保留,说不定能“废物利用”呢。

就这样,自噬发生了。但是最初包裹那些垃圾的膜是从哪来的呢?

原来,在酵母里,膜会在自噬体“组装”位点(这个位置是靠近液泡的),在Atg8以及其他蛋白质的作用下开始扩展生长,然后就形成了自噬体。

而在哺乳动物细胞里,这个过程就不一样了。形成自噬体的区域是分散在整个细胞里的。第一种假说认为,自噬体膜是来自内质网的,而自噬体就形成在内质网和线粒体接触的地方,所以还有一直说法认为自噬体膜来自线粒体外膜;还有三种假说分别认为自噬体膜来自 高尔基体、内吞体 以及细胞膜。这些假说各有证据,目前还很难说哪一个是对的,或者都是正确的,也不无可能。

高尔基体是真核细胞中内膜系统的组成之一,它由扁平膜囊、大囊泡、小囊泡三个基本成分组成。高尔基体在植物细胞中参与细胞壁的合成,但在动物细胞中它与腺细胞的分泌有很大关系。

内吞体即细胞内吞作用形成的网格蛋白有被小泡,将细胞外大分子物质摄入有被小泡,运输到早期胞内体,在这里遇到从高尔基体转运小泡运输来的溶酶体水解酶,再通过晚期胞内体,进一步形成溶酶体。

自噬=凋亡?

说到这,你一定还能想到一个词——凋亡。自噬和凋亡是一回事吧?答案是否定的。

细胞死亡分为三种:坏死、凋亡、自噬性细胞死亡。显然,自噬和凋亡是并列存在的。

坏死就是机体受到损伤,细胞代谢停止,功能丧失。溶酶体里的水解酶释放分解了整个细胞,或者是白细胞大老远地跑来释放了水解酶。

凋亡也称为1型程序性细胞死亡。依靠的是胱冬肽酶等多种水解酶。细胞凋亡有以下特点:染色体浓聚、细胞皱缩、DNA降解和凋亡小体形成,最后残余部分被巨噬细胞吃掉。

而自噬也叫2型程序性细胞死亡,它纯粹是在溶酶体的作用下发生的,而不依赖于某些酶。

由此可见,凋亡和自噬是一种动态平衡。自噬可能比凋亡早发生,通过启动自噬而抑制凋亡,从而保护细胞;自噬还可能向凋亡转化。

为了更好地生存,细胞也是“蛮拼的”

细胞发生自噬是一个非常“保守”的过程,几乎没有进化。细胞自噬的出现是为了适应环境,尤其是碰上了“不好的年景”,比如缺乏营养、饥饿难耐,或者细胞中氧气、水分特别少的时候,就需要自噬了。

自噬的研究对于临床医学领域非常重要。比如,肿瘤经常在环境非常差的时候还能生长,就是因为肿瘤细胞的自噬非常剧烈。所以理论上如果阻断了肿瘤细胞的自噬,它们不是就不会生长了吗?再比如一些神经退行性疾病,如帕金森,就是大脑里出现了一些错误折叠的蛋白质,而且还清除不掉,本质上也是自噬出了问题。

10.常用细胞凋亡检测方法 篇十

(0+12!“#信号通路中一个重要的调节

因子$在人类的多种肿瘤中高表达$包括有软组织肿瘤%骨肉瘤%血液系统肿瘤%乳腺癌%结肠癌和前列腺癌等”34#!

56789:等研究证明./.$的反义寡核

苷酸具有明显的抗肿瘤活性&它能特异性地抑制./.$的表达&增强癌细胞对化疗和放疗的敏感性&增强表皮生长因子抑制剂对激素抵抗和激素依赖的前列腺癌细胞的增殖%凋亡和蛋白表达的影响“3*&3$#’王宏梅等”3+#研究证明!;.

+>$>+小分子抑制剂在多种(;=&

突变和

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’.0?)&它们具有选择性的抗肿瘤活

性*G:F#@78868和HI$-344$是两种广泛应用的(0+1抑制剂&它们特异性抑制(0+1J**4亚单位的催化活性&阻断

(0+12!“#通路的活化&能有效的增加

化疗药物对癌细胞的敏感性”33#*但由于这两种抑制剂潜在的副作用&目前还都限于体外研究*!“#抑制剂是当前研发的热点&它能拮抗!”#的抗凋亡作用&破坏癌细胞耐药性&诱导癌细胞凋亡*较早发现的!“#的抑制剂有抗炎药物塞莱考昔()BAB9:K6E&是一种)LM2$抑制剂)及其衍生物L’N2

4+4*$和L’N24+4*+&其中L’N24+4*$

在抑制!”#方面表现更高的专一性&并且研究表明L’N24+4*$在体内具有很高的生物活性&产生很低的毒副作用*现在&研究进一步证实)BAB9:K6E能够通过使!“#失活而抑制乳腺癌细胞的生长&成为乳腺癌治疗研究中的主要药物之一”3O#*(BF6P:?68B是一种基

于脂的!“#抑制剂&通过抑制!”#的膜转位&降低!“#的活性&抑制多种肿瘤细胞的生长”3Q#*!期临床研究正在评价JBF6P:?68B对于复发性胰腺癌+前列腺癌%复发性或转移性头颈癌和晚期软组织肉瘤的疗效

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!(M2+*Q

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膜定位!在临床前研究中&每日腹腔注射(M2+*Q能够抑制!“#活性并减缓.)U2R裸小鼠移植瘤的生长&但是对于T;2$-裸小鼠移植瘤仅有微弱的疗效”O*#!.78V7A等“O$#研究发现了!”#的抑制剂*H2Q2DWVF:KW@B#DWA2

9D6F:268:?6#:A$2(%)2$2L2@B#DWA2+2L2:9#7VB9WA97FE:87#B(HT.L)%1(2+$*2*

(1(2*)和1(2+$*2$(1(2$)!其选择性抑制!“#的0)O4值大约是O”@:A

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1(2*和1(2$还能够有效抑制N$O*

和N,R细胞形成集落的能力&而对正常的星形胶质细胞和人成纤维细胞没有抑制效应”O+#!最近&XD78Y等“O3#研究发现了一种新的!”#抑制剂).=((-29DA:F:2$2@B#DWABAA6J#69686C@79B#7#B)&

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对(0+1%(/1*或.!(1的活性则没有影响!研究证明).=(对多种!“#高度活化的前列腺癌细胞具有抗增殖和诱导凋亡的效应&而对于!”#没有激活的其他癌细胞的抑制作用极微!相同的效应在荷瘤小鼠的试验中也得到了证实!雷帕霉素(%7J7@W968)是一种@;L%的抑制剂&是美国食品药品管理局批准适用于临床移植的免疫抑制剂&但其衍生物))02RR-%%!/244*和!(2$+OR+被明确定位为抗肿瘤药物!临床前研究结果表明&这类化合物无论是单药还是与细胞毒药物联用&都能够有效的抑制肿瘤生长!在临床

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显的抑制多种肿瘤的作用!在非小细胞肺癌%乳腺癌%子宫颈癌%泌尿系统

肿瘤%肉瘤%间皮瘤%淋巴瘤和胶质瘤的治疗中&均观察到雷帕霉素衍生物使患者病情部分缓解和病程稳定!同时&在上述临床研究中引入了一个作为监测临床响应的指标&即检测外周淋巴细胞中@;L%下游底物3=25(2*和’Q1*的磷酸化程度!临床上&用常规手段治疗肾癌易复发&在一项针对肾癌的!期临床研究中&雷帕霉素衍生物))02RR-产生一例完全缓解&数例部分缓解&还有半数患者病程稳定达$3周以上“OO#!)DF6?#678等”OQ#研究证明./.$的小分子拮抗剂8C#A682+$可用于(O+途径失调的肿瘤&8C#A682

+$结合(O+的口袋蛋白&破坏(O+与./.$的结合&使(O+稳定&激活(O+

依赖的凋亡途径!另外&一些小分子抑制剂通过间接作用于(0+12!“#信号通路中的凋亡相关蛋白&促进肿瘤细胞的凋亡&抑制肿瘤的生长!目前&已经应用于临床试验的抑制(0+12!”#信号通路的小分子抑制剂有0@7#686E

@B?WA7#B(’;0OR*)和表皮生长因子受

体(BJ6VBF@7AYF:Z#DP79#:FFB9BJ#:F&

=[U%)抑制剂/*,+-!’;0OR*是一种

靶向).H5)%2!5H融合蛋白的小分子&研究表明’;0OR*能够下调5)%2

!5H阳性细胞的5)%2!5H蛋白水平&

诱导细胞凋亡!在=[U%高表达的多种癌细胞中&/*,+-的抗肿瘤活性可能是通过抑制=[U%下调!“#的活性%诱导凋亡%抑制增殖”OR&O,#!综上所述&对于(0+12!“#信号通路中过度活化或过度表达的关键性组成分子&特异性的小分子抑制剂能够有效地阻断该通路过度活化引起的凋亡抑制效应&增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性&诱导细胞凋亡&抑制肿瘤细胞的生长!

!展望

多细胞生物通过细胞增殖和凋亡来维持自身的稳定&若两者之间的动态平衡失调&则可导致肿瘤的发生!

(0+12!”#信号通路对于细胞的增殖和

凋亡的调节是必需的&其组成性活化与人类肿瘤的发生发展密切相关!通过基因干预方法敲除或小分子药物抑制(0+12!"#及相关基因&阻断其对下

11.常用细胞凋亡检测方法 篇十一

用氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人髓系白血病细胞株U937细胞凋亡,并研究其作用机制.用脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP切口末端标记技术(TUNEL法)、流式细胞仪和DNA断裂分析检测细胞凋亡;用免疫组化检测c-fos、c-jun和c-myc蛋白表达,RT-PCR显示c-fos、c-jun和c-myc mRNA表达水平.结果表明ox-LDL可致U937细胞凋亡,其作用具有浓度效应;ox-LDL可以上调c-fos、c-jun和c-myc基因表达,使c-fos、c-jun和c-myc蛋白合成增多,最终诱导U937细胞凋亡.

作 者:杨向东 杨永宗 黎健 YANG Xiang-Dong YANG Yong-Zong LI Jian 作者单位:杨向东,杨永宗,YANG Xiang-Dong,YANG Yong-Zong(衡阳医学院心血管病研究所,衡阳,421001)

黎健,LI Jian(卫生部北京老年医学研究所,北京,100730)

12.常用细胞凋亡检测方法 篇十二

【关键词】尿沉渣红细胞检测方法联合

【中图分类号】R446.12【文献标识码】B【文章编号】1005-0019(2015)01-0152-01

在对尿沉渣中的红细胞进行临床检验时,相关医护人员主要应用了DiasysR/S2003尿沉渣工作站以及UF-100全自动尿沉渣分析仪,将这两种检测方法进行联合应用,可以提高尿液分析的质量,而且有利于提高我国尿液分析的规范化与标准化程度。这两种检测方法的工作原理、操作方法以及检测结果有着一定差异,本文对联合使用尿沉渣红细胞检测方法的应用意义进行了探讨,希望可以对相关工作者有所帮助。

一材料与方法

1、一般资料

1.1仪器.DiasysR/S2003尿沉渣定量分析工作站(美国Di-asys公司)、UF-100型全自动尿沉渣分析仪及配套试剂(日本Sysmer公司)。

1.2对象。随机收集了某医院泌尿科及肾内科,住院送检尿标本460例。

2、方法

用一次性尿杯收集患者洁净随机尿,充分混匀后分二管倒进有凸头专用离心管中,第一管以400G相对离心力(RCF)离心沉淀5min,倾弃上层尿液9.8ml,留下尿沉渣0.2ml,通过R/S工作站的可调加样器把沉渣全部吸入流动计数室中。通过摄像显微镜将计数池的格子打到计算机上计数10个小格(0.1μl)的红细胞数,以单位体积报告混匀尿结果。第二管用于UF—100尿沉渣全自动分析法检测。DiasysR/S2003尿沉渣定量分析工作站结果男性RBC≥5个/μl、女性RBC≥7个/μl为阳性;UF-100型尿沉渣全自动仪结果RBC≥15个/μl为阳性。本次实验采用了两样本率χ2检验。

二结果

在本次实验中,有460例标本,应用DiasysR/S2003尿沉渣工作站以及UF-100全自动尿沉渣分析仪这两种不同的方法进行检测,检测结果如表1所示。这两种检测方法测得RBC阳性率分别为48.3%、61.1%,利用两样本率χ2进行检验,得出P<0.01,说明二者有着显著性差异。

表1两种方法的检验结果对比

将DiasysR/S2003尿沉渣工作站的定量分析法的检测结果,与UF-100全自动尿沉渣分析仪检测结果相比,UF-100红细胞测定阳性的尿液中,真性RBC尿占总沉渣的例数为222、草酸钙结晶为36、无定形结晶为9,酵母样菌为8,细菌为4,其他沉渣为2,总合计为281,假RBC尿占12.8%,其中草酸钙结晶、无定形结晶、酵母样菌和细菌样本分别占7.8%、2.0%、1.7%和0.9%。,而其他沉渣的比例可以忽略不计。

三讨论

在临床实验中,对尿液进行分析,多会采用显微镜检测法,在检测的过程中,要对优化操作技术,避免出现操作失误的现象,对尿液分析的准确性,影响着临床诊断的正确性以及鉴别诊断的可靠性。显微镜检验可以有效检测出尿液中含有的有形成分,但是应用这一方法对操作的精确度要求比较高,而且比较耗费时间,重复性差,无法对检测结果进行定量分析,这不利于对患者的临床动态观察。在尿沉渣红细胞的临床检测中,医护人员多使用的是DiasysR/S2003尿沉渣工作站以及UF-100全自动尿沉渣分析仪这两种方法,由于这两种方法的检测方法、结果以及原理有着较大差异,所以,在联合应用的过程中,一定要提高操作的规范性,还要制定统一的标准,这样才能降低手工操作时出现个体差异以及失误的概率。

DiasysR/S2003尿沉渣工作站的工作原理主要是动力装置产生的吸力,这种吸力可以将尿沉渣提供提取到显微镜仪器特定的计数池中,而且具有计数后自动冲洗的功能,这种方法提高了观测图像的清晰度,而且提高了计数结果的准确度。在将尿沉渣从试管中提取到显微镜下进行观察时,计数结果主要是以细胞数的形式制定定量报告的。而UF-100全自动尿沉渣分析仪DiasysR/S2003尿沉渣工作站以及UF-100全自动尿沉渣分析仪的工作原理是流式细胞原理以及阻抗原理,实验人员利用荧光染色材料,荧光幅波幅等技术,可以准确的对尿液中有形成分进行识别与技术。通过对比发现,DiasysR/S2003尿沉渣工作站的检测结果更加直观,但是操作比较复杂,存在较多的人为误差,所以,这种方法检测尿沉渣中的红细胞,准确值以及可靠性并不高。UF-100全自动尿沉渣分析仪,由于自动化程度比较高,所以,操作较为简单,提高了尿沉渣检测的效率以及质量,还减少了尿样的传递时间,缩短了样本放置的时间,有助于提高测定结果的精密性,并且这种方法携带污染率低,有助于提高实验过程的安全性。

结果还表明,UF-100全自动尿沉渣分析法的敏感性显著高于DiasysR/S2003尿沉渣工作站分析法,尿沉渣分析仪的敏感性较高,且其特异性也较好与显微镜涂片结合起来对红细胞的共同检出敏感度很高,漏检率很低。在临床上应该把这两种方法结合起来,消除了DiasysR/S2003尿沉渣工作站沉淀法中残留体积不准、细胞成分附壁,细胞离心破坏变形以及人工显微镜计数等引起的一系列误差。尿液中草酸钙结晶大小形态与红细胞相似,染色敏感度也类似,在散点图中与红细胞交叉分布而形成的假阳性;细菌的体积较红细胞小,但成堆细菌颗粒其大小与红细胞相似,当细菌细胞膜对荧光染色的通透性较低时,荧光强度下降,有可能被误认为红细胞;集聚成团的非晶形尿酸盐结晶、磷酸盐结晶等,同样也可使红细胞测定结果呈假阳性升高。总之,尿液中大量细菌、酵母样菌和各种结晶均会不同程度影响红细胞测定,且误认率达26.6%(59/281)为红细胞,其中草酸钙,无定形结晶以及酵母样菌为主要干扰成分,与其他学者的相关报告相符。

综上所述,临床检验工作中利用UF-100型尿沉渣分析仪检测尿沉渣是尿常规筛检的一个重要的过筛手段。但是当尿样中出现上述各种可能影响到UF—100检测细胞结果的有形成分,或尿液电导率过低时,必须结合干化学分析和显微镜检查综合分析,以保证检测结果的准确性。

参考文献

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[2]武蓉珍,刘胜勇,徐丽珍,陈东红,吴日荷.草酸钙结晶对UF-100尿沉渣分析仪测定红细胞的影响[J].临床检验杂志.2002(04)

13.常用细胞凋亡检测方法 篇十三

目的 研究可见光对体外培养的兔视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞凋亡的影响.方法 用两步酶法消化分离、培养并鉴定RPE细胞.RPE细胞分为对照组及实验组,实验组用(3 652±213)Lux的白色荧光灯照射6 h.分别于光照前及光照后3 h、12 h、24 h、72 h终止培养,取细胞行Bcl-2 mRNA原位杂交检测,观察细胞Bcl-2基因表达情况.选取部分光照后24 h组细胞进行透射电镜的观察.结果 对照组各时间点Bcl-2 mRNA原位杂交阳性细胞率无统计学差异(P>0.05).实验组光照后3 h阳性细胞率为(82.29±5.65)%,有轻度增高,但无统计学意义(P>0.05);光照后72 h阳性细胞率为(44.07±7.11)%,光照后12 h、24 h、72 h阳性细胞逐渐减少,均有统计学意义(P<0.05).RPE细胞光照后透射电镜观察到染色质碎裂、凋亡小体等细胞凋亡的典型形态学变化.结论 一定强度的可见光照射可引起体外RPE的`凋亡.光照后一定时间内可以刺激并启动细胞自身的保护机制.

作 者:闫利锋 成霄黎 王丽聪 彭清 李春晖 YAN Li-Feng CHENG Xiao-Li WANG Li-Cong PENG Qing LI Chun-Hui 作者单位:闫利锋,YAN Li-Feng(030002,山西省太原市,山西省眼科医院白内障科)

成霄黎,王丽聪,彭清,李春晖,CHENG Xiao-Li,WANG Li-Cong,PENG Qing,LI Chun-Hui(030001,山西省太原市,山西医科大学第一临床医学院眼科)

14.常用细胞凋亡检测方法 篇十四

说服自己+说服别人=正确答案

细胞分化、衰老、凋亡和癌变复习课教学设计

昆明市钟英中学

齐梅

一、教材分析:

《细胞的分化、衰老、凋亡和癌变》是人教版新课标教材必修1第六章第2、3、4节的内容。它们与第1节《细胞的增殖》共同构成了细胞的生命历程。这部分内容基础知识点较多,背记的内容较多,相对好理解。

二、学情分析

学生在高一时就已经学习了这些内容。对于这些知识点已经有了一定的基础和记忆。因此教师要在学生原有知识、经验基础上对知识进行基础梳理和对考点进行分析,多让学生动脑思考和讨论,做到真正掌握。

三、教学目标:

1、理解细胞分化的实质

2、掌握细胞全能性

3、理解细胞衰老、凋亡的意义及与人体健康的关系

4、掌握癌症发病的原因及防治措施

四、教学重点:

1、细胞分化的概念和意义

2、细胞全能性、细胞凋亡的概念

3、个体衰老与细胞衰老的关系

4、细胞衰老的特征

5、癌细胞的主要特征

五、教学难点

1、细胞全能性的概念及实例

2、细胞凋亡的含义和细胞坏死的区别

3、原癌基因与抑癌基因的区别

六、教学过程

一、导入:

展示细胞生命历程的图片,展示考纲要求和高考命题情况 1.细胞的分化(Ⅱ)

2.细胞的全能性(Ⅱ)

3.细胞的衰老和凋亡以及与人体健康的关系(Ⅱ)4.癌细胞的主要特征及防治(Ⅱ)通过一道题检测学生对这部分内容掌握的程度合理调整教学过程 如图所示是与细胞增殖和分化有关的图解,据图回答下列问题:

你懂,但你不奉献,说明你自私:你不懂,但你不参与,说明你自卑 学得好,奉献智慧;学得不好,抓住机会

说服自己+说服别人=正确答案

(1)图中A表示的是______________过程,B表示的是______________过程。

(2)图中e能合成血红蛋白,则b、c、d都________(填“能”或“不能”)合成,其主要原因是__________________________________。

(3)若a为植物细胞,而d能在体外条件下培养成一个植物体,说明d具有________性。(4)图中的a、b、c、d、e这五个细胞相比,哪一个细胞的全能性最大?________。

(5)若b 细胞已经衰老,则细胞内的________积累会导致“老年斑”的出现;若c细胞代表人类个体发育中尾部的细胞,则发育到一定阶段该细胞会发生凋亡的原因是________________________;d细胞若是异常分化产生的癌细胞,则癌变的根本原因是________________________。

(6)b、c、d、e细胞不同的根本原因是________(物质)不同,直接原因是________(物质)不同。

二、突破考点

考点突破一:细胞分化

先核对本部分内容的知识清单,一个问题引出细胞分化的实质 思考一:一头猪身上的猪肉和猪肝形态和味道不同的根本原因是?

通过细胞分化的实质引出斯图尔德的实验简单介绍细胞的全能性不做过多扩展,在选修的复习中再做扩展。细胞的全能性:

1.判断下列有关细胞分化的叙述

(1)(2013·天津卷T3B改编)细胞分化使细胞趋向专门化,提高了机体生理功能的效率。(√)(2)(2013·山东卷)完成分化的肌肉细胞通过有丝分裂增加细胞数量形成肌纤维(×)(3)骨髓干细胞与胰岛样细胞的基因组成不同,基因表达产物不同。(×)2.(2014新课标II卷.2.)同一动物个体的神经细胞与肌细胞在功能上是不同的,造成这种差异的主要原因是(B)

A.二者所处的细胞周期不同

B.二者合成的特定蛋白不同 C.二者所含有的基因组不同

D.二者核DNA的复制方式不同 3.(2013·海南单科)关于细胞分化的叙述,错误的是(C)A.白细胞和红细胞都是由造血干细胞分化来的 B.基因突变可使已分化的正常细胞变成癌细胞 C.同一个体的小肠上皮细胞和平滑肌细胞所含基因不同 D.同一个体茎尖分生组织细胞的分化能力比叶肉细胞的强

4.(2015·海南卷.6)关于人体造血干细胞的叙述,错误的是(B)

A.造血干细胞与成熟红细胞中的酶存在差异

B.造血干细胞分化为成熟红细胞的过程是可逆的

你懂,但你不奉献,说明你自私:你不懂,但你不参与,说明你自卑 学得好,奉献智慧;学得不好,抓住机会

说服自己+说服别人=正确答案

C.健康成年人的造血干细胞主要存在于其骨髓中D.造血干细胞分化形成的红细胞和白细胞寿命不同 考点突破二:细胞衰老

先核对本部分的知识清单,让学生辨析细胞衰老和个体衰老的关系,通过本道题展示细胞衰老的特点考查学生掌握情况。

下列关于细胞衰老的叙述,不正确的是(D)A.衰老的细胞内水分减少,结果使细胞萎缩,新陈代谢速率减慢 B.衰老的细胞,细胞膜通透性改变,使物质运输功能降低 C.细胞内的色素会随着细胞衰老而逐渐积累,从而影响新陈代谢 D.衰老细胞的呼吸速率加快,细胞核体积变小,染色质固缩

考点突破三:细胞凋亡与坏死的关系

先核对本部分的清单,第一道题展示出凋亡和坏死的关系,第二道题强调被病原体感染的细胞的清除和效应T细胞裂解靶细胞的过程都为细胞凋亡。1.关于细胞凋亡与细胞坏死,下列说法正确的是(A)A.细胞凋亡是由细胞内的遗传物质控制的B.细胞坏死是细胞凋亡的同义词

C.细胞坏死受到严格的由遗传机制决定的程序性调控

D.细胞的自然更新,被病原体感染的细胞的清除不是通过细胞凋亡完成的 2.(2015·海南卷.5改编)关于细胞凋亡的叙述,错误的是(C)

A.效应T细胞可诱导靶细胞发生凋亡

B.细胞凋亡也称为细胞编程性死亡 C.细胞凋亡不出现在胚胎发育过程中

D.被病原体感染的细胞可通过细胞凋亡清除 考点突破四:细胞的癌变

先核对本部分的知识清单让学生注意原癌基因和抑癌基因作用的区别,并与细胞衰老的特点进行比较 用一个讨论对癌变的实质进行理解,并教育学生养成良好的生活习惯。讨论:什么样的人容易得癌症呢?为什么会得癌症? 通过本题对致癌因子的作用过程不同简单介绍

1.(2012·全国新课标)下列关于细胞癌变的叙述,错误的是(D)

A.癌细胞在适宜条件时刻无限增殖

B.癌变前后,细胞的形态和结构有明显差别 C.病毒癌基因可整合到宿主基因组诱发癌变

D.原癌基因的主要功能是阻止细胞发生异常增殖

各考点的这些题主要由学生来进行讲解,教学生做题勾画关键点,如果叙述错误标出错误原因。让学生动起来。

拓展训练主要运用的是高考题,在时间充裕的条件下让学生以抢答的形式完成,如果时间不足留在课下完成。拓展练习

1.(2015·江苏卷.2)下列关于人体细胞增殖、分化、衰老、凋亡和癌变的叙述,正确的是(B)

你懂,但你不奉献,说明你自私:你不懂,但你不参与,说明你自卑 学得好,奉献智慧;学得不好,抓住机会

说服自己+说服别人=正确答案

A.细胞的分化程度越高,全能性越强

B.癌细胞具有细胞增殖失控的特点

C.正常细胞的衰老凋亡必将使个体衰老死亡

D.幼年个体生长需细胞增殖,成年后不需细胞增殖 2.(2015·山东卷.2)关于细胞生命历程的叙述,正确的是(A)

A.胚胎细胞中存在与细胞凋亡有关的基因

B.原癌基因与抑癌基因在正常细胞中不表达 C.真核细胞不存在无丝分裂这一细胞增殖方式

D.细胞分化过程中蛋白质种类和数量未发生改变 3.(2013年江苏单科)关于细胞的分化、衰老、凋亡与癌变,下面选项中表述正确的是(D)A.细胞的高度分化改变了物种的遗传信息

B.细胞的衰老和凋亡是生物体异常的生命活动

C.原癌基因或抑癌基因发生多次变异累积可导致癌症,因此癌症可遗传 D.良好心态有利于神经、内分泌系统发挥正常的调节功能,从而延缓衰老

4.(2014·山东卷)神经系统正常发育过程中神经细胞数量的调节机制如图所示。下列说法正确的是(A.细胞程序性死亡不利于神经系统正常发育

B.生存因子影响了神经细胞的基因表达 C.神经细胞与靶细胞间通过电信号传递信息

D.死亡细胞被吞噬细胞清除属于细胞免疫 5.(2015·课标II卷.5)下列与病原体有关的叙述,正确的是(D)A.抗体可以进入细胞消灭寄生在其中的结核杆菌

B.抗体抵抗病毒的机制与溶菌酶杀灭细菌的机制相同 C.Rous肉瘤病毒不是致癌因子,与人的细胞癌变无关

D.人体感染HIV后的症状与体内该病毒浓度和T细胞数量有关 对本节课进行小结

七、板书设计(略)

你懂,但你不奉献,说明你自私:你不懂,但你不参与,说明你自卑

15.常用细胞凋亡检测方法 篇十五

【关键词】 骨关节炎;内质网应激;软骨细胞;凋亡

内质网应激(endoplasmie retieulum stress,ERS)

是指各种刺激因素使内质网功能紊乱,导致错误折叠和未折叠蛋白在内质网腔聚集及Ca2+失衡的病理状态。各种理化因素,如缺氧、氧化应激、营养物质缺乏等,均可导致ERS,激活内质网相关性死亡(ER-associated death,ERAD)信号通路,导致细胞凋亡[1]。骨关节炎(osteoarthritis,OA)主要病理改变是软骨退变,而软骨细胞凋亡在软骨退变过程中发挥重要作用[2]。ERS在软骨细胞凋亡启动过程中起关键性的调控作用[3],提示有效抑制ERS介导的软骨细胞凋亡,可能是防治OA的一个关键靶点。

1 软骨细胞凋亡是软骨退变的重要因素

OA是生物学和力学因素相互作用下导致软骨细胞、软骨基质及软骨下骨合成与降解正常耦联失衡,引起关节软骨异常重塑的慢性骨关节疾病[4]。软骨基质合成与降解代谢失衡,导致软骨退变,而关节软骨内的唯一细胞——软骨细胞能感受关节内微环境变化,进而调节软骨基质的代谢平衡,发挥调控软骨退变的作用[5-6]。软骨细胞凋亡过度导致软骨基质合成与降解代谢失衡,并引起软骨基质的质与量发生变化,而这种变化又促进软骨细胞的凋亡,从而加速OA的病理进程。

2 ERS是调控软骨细胞凋亡的重要因素

内质网是蛋白合成、翻译后修饰和折叠的主要场所,同时也是Ca2+储备及其信号转导的主要部位,未折叠或错误折叠蛋白的积累,破坏内质网的动态平衡,触发ERS,导致细胞凋亡[7-8]。软骨细胞处于无血管、神经、淋巴管分布的特殊微环境中,各种理化因素刺激易引起ERS[9],ERS可直接或通过减少软骨基质的主要成分II型胶原和蛋白多糖的表达间接引起软骨细胞凋亡[10-11]。

3 ERS调控软骨细胞凋亡的机制

ERS通过激活未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)发挥调控细胞凋亡的作用。UPR由一个分子伴侣免疫球蛋白结合蛋白(binding immumoglobulin protein,Bip)和双链RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶(protein kinase RNA like ER kinase,PERK)、活化转录因子6(activating transcription factor-6,ATF6)及肌醇需求酶l(inositol requiring protein-1,IRE1)3种ERS感受蛋白所介导[12]。无ERS时,3种ERS感受蛋白分别与Bip结合处于无活性状态;ERS时,Bip从3种ERS感受蛋白上解离,解离后的感受蛋白被活化并启动UPR,UPR包括3条信号通路,即PERK、ATF6及IRE1信号通路。

3.1 PERK信号通路 PERK是内质网I型跨膜蛋白,解离后PERK通过自身二聚化和磷酸化而激活,活化的PERK使翻译起始因子2α(eukaryotic translation initiation factor 2 alpha,eIF2α)磷酸化,导致GTP-GDP交换障碍,从而减缓或暂停蛋白的合成[13]。eIF2α磷酸化的同时,ERS相关基因活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)表达上调,进而激活其靶基因C/EBP同源蛋白(Chop)表达,Chop通过增加细胞生长抑制与DNA损伤诱导基因34(growth arrest and DNA damage-inducible gene 34,GADD34)的表达,负反馈调节使eIF2α去磷酸化,增加内质网伴侣蛋白的生物合成[7],激活ERS应激反应,从而启动凋亡程序。

3.2 ATF6信号通路 ATF6是内质网膜Ⅱ型跨膜蛋白,非ERS状态下ATF6主要以酶原形式存在于内质网。不同于IRE1和PERK,ATF6的激活需以小泡形式转运到高尔基体,先后被位点1蛋白酶(site 1 protease,S1P)和位点2蛋白酶(site 2 protease,S2P)所剪切活化。活化型ATF6进入细胞核,激活具有的转录因子X盒结合蛋白1(X box-binding protein 1,XBP1)的转录,促进蛋白质在内质网腔内的正确折叠,减缓ERS;但持续强烈的ERS,ATF6的靶基因Chop等凋亡相关基因被激活,清除无法逆转的ERS细胞,导致细胞

凋亡[14]。

3.3 IREl信号通路 IREl是内质网膜I型跨膜蛋白,解离后IREl通过自身二聚化和磷酸化而激活,激活的IREl剪接由ATF6诱导表达的XBP-1前体mRNA分子内26 bp的内含子,剪接后的mRNA发生翻译框移,编码产生一个含碱性亮氨酸拉链结构域,有较强转录活性的转录因子-盒结合蛋白(X-box binding protein-1 splicing,XBP1s)。XBP1s进入细胞核后与ERS反应元件的基因启动子结合,加快蛋白折叠和错误蛋白降解,恢复内质网

功能[15-16]。

3.4 ERS介导软骨细胞凋亡的途径 持续强烈的ERS,内环境无法纠正,则发生细胞凋亡,ERS介导的细胞凋亡有其自身的信号通路,称为ERAD途径,包括Chop、凋亡信号激酶1(apoptosis-signal-regulating kinase 1,ASK1)/c-Jun氨基酸末端激酶(c-Jun NH2-terminal kinase,JNK)、Bcl-2家族和caspase-12途径[17]。Chop和JNK是联系ERS与细胞凋亡之间的重要中间信号分子,Bcl-2家族是凋亡信号转导的重要调节信号分子,而caspase是执行细胞凋亡作用的终末分子。

nlc202309040648

3.4.1 Chop途径 ERS的特异转录因子Chop正常情况下表达很低,PERK、ATF6和IRE1 3条信号通路均能激活Chop的转录,但PERK-eIF2α-ATF4是Chop转录所必需[17]。内质网氧化物蛋白Ero1-Lα通过编码内质网氧化酶,使内质网产生一个过氧化环境,从而减少细胞内促反应性氧中介物和谷胱甘肽的生成;死亡受体DR5则通过激活caspases级联反应膜表面死亡受体,最终导致细胞凋亡[18],Chop通过激活Ero1-Lα和DR5等凋亡反应蛋白发挥调控细胞凋亡的作用。同时,Chop抑制Bc1-2表达并使线粒体对BH3-only结构域蛋白的促凋亡效应敏感,造成Bax从细胞质向线粒体移位,并增加Ca2+从内质网流到线粒体,使线粒体凋亡途径激活,导致细胞凋亡[19-20]。

3.4.2 JNK途径 ERS时,活化的IRE1与肿瘤坏死因子受体相关因子2(tumor necrosis factor receptor-associated factor 2,TRAF2)相互作用,募集ASK1形成IRE-1/TRAF2/ASK1三聚体,随后激活JNK信号通路,激活的JNK从细胞质转移到细胞核,通过磷酸化激活c-Jun、c-Fos、EIK-1等转录因子,诱导TNF、FasL等配体蛋白的表达,从而激活死亡受体途径。同时,活化的JNK也可在细胞质中通过上调BH3-only结构域蛋白Bim、Bid表达,进而激活Bax等促凋亡蛋白介导的线粒体凋亡途径,引起细胞凋亡[21]。

3.4.3 Bcl-2家族途径 Bcl-2家族不仅存在于线粒体,也分布在内质网膜,对内质网的稳态起调节作用,并在ERS凋亡途径中起重要的调控作

用[22-23]。无ERS时,内质网膜上的促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2相互结合处于无活性状态;ERS时,Bax构象寡聚化导致内质网膜完整性破坏,引起Ca2+外流到细胞质,从而激活Ca2+依赖的caspase家族成员钙调蛋白分解酶(calpain),calpain随后激活caspase-12,导致caspase依赖的细胞凋亡[22,24]。同时,从内质网释放的Ca2+进入线粒体,使线粒体内膜去极化,导致线粒体膜通透性改变,释放细胞色素C(cytochrome C,Cyto C),激活caspase,引起细胞凋亡。

3.4.4 caspase-12途径 正常情况,内质网特有的caspase-12与TRAF2形成稳定的复合物处于无活性状态,ERS导致caspase-12与TRAF2分离,并发生寡聚化或同源二聚化使caspase-12活化;再者,ERS引起胞质caspase-7转移至内质网膜,随后活化与caspase-12形成复合物,活化的caspase-7剪切并活化caspase-12。活化的caspase-12释放入细胞质中,在不依赖线粒体凋亡途径成分Apaf-1和Cyto C的情况下激活caspase-9,活化的caspase-9激活caspase-3,最终导致细胞凋亡[25]。

4 小 结

综上所述,内质网是细胞内信号转导的关键场所,ERS在调控细胞凋亡过程中发挥着重要的作用。因此,如何从ERS相关的信号通路中寻找抑制软骨细胞凋亡的效应分子作为治疗OA的靶点,可能会为OA的治疗提供潜在的有效途径。

5 参考文献

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收稿日期:2014-08-11;修回日期:2014-09-24

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