阿魏

阿魏（10篇）

1.阿魏 篇一

木部·阿魏

作者：李时珍

释名

阿虞、薰渠、哈昔尼。

气味

辛、平、无毒。

主治

疝疼痛(败精恶血，结在阴囊，并非一般的偏坠)用阿魏二两，裹在醋和荞麦面作成的饼中，火上煨熟;另用大槟榔二枚，钻孔，乳行填满，也裹在荞面中煨熟;另用硇砂末一钱，赤芍药一两，各药一起糊成丸子，如梧子大。每服三十丸，饭前服，酒送下。

脾积结块，用鸡蛋五个、职权魏五分、黄蜡一两，同煎化，分十次空心服，水送下。诸物不忌，腹痛无妨。十日后大便下血即愈。

腹内一般痞块。用阿魏五钱、五灵脂(炒令烟尽)五钱，共研为末，调狗胆汁和成丸子，如黍米大。每服三十丸，空心服唾液送下。忌羊肉醋面。

疟疾寒热。用阿魏、胭脂各一块、如豆大，研匀，调蒜膏敷虎口上。又方：用阿魏、丹砂各一两，共研为末，加米糊和成丸子，如皂角子大。每服一丸，空心服，参汤送下。

牙齿虫痛。用阿魏、臭黄，等分为末，加糊做成丸子，如绿豆在。每取一丸，棉裹纳入齿痛一侧的耳中，有效。

2.阿魏 篇二

关键词：阿魏酸钠,临床应用

1 阿魏酸钠治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病充血性心力衰竭疗效观察[1]

有文献报道,把60例冠状动脉粥样硬化性心脏病充血性心力衰竭患者随机分为阿魏酸钠治疗组和对照组,治疗组给予阿魏酸钠200mg加入5%GS 100~500m L静脉滴注,1次/d,10d为一疗程,共3个疗程;对照组给予复方丹参20m L静脉滴注,1次/d,10d为一疗程,共3个疗程。结果发现,总有效率治疗组96.7%,对照组为70%(P<0.01),提示注射用阿魏酸钠治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病充血性心力衰竭疗效确切,耐受性好。

2 阿魏酸钠治疗慢性肺心病合并冠状动脉粥样硬化性心脏病心力衰竭临床观察[2]

有报道,对32例经综合治疗后临床疗效不满意的慢性肺心病合并冠状动脉粥样硬化性心脏病心力衰竭患者,加用注射用阿魏酸钠300mg加入5%葡萄糖或生理盐水250m L中静脉滴注,1次/d,疗程10~14d。结果发现,32例患者治疗后显效17例,有效12例,无效3例,总有效率90.6%,其中4例合并心绞痛患者显效3例,有效1例,全部治疗有效。21例有心肌缺血表现者治疗后显效5例,有效10例,无效6例,总有效率71.4%。表明在综合治疗基础上加用阿魏酸钠治疗慢性肺心病合并冠状动脉粥样硬化性心脏病心力衰竭疗效满意,该药对缓解心绞痛症状,改善心肌缺血疗效较好。

3 阿魏酸钠注射液治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病心绞痛的疗效观察[3]

有报道,96例患者随机分为治疗组和对照组,对照组予复方丹参注射液静脉滴注,治疗组予阿魏酸钠注射液静脉滴注,两组疗程均14d。结果发现,治疗组临床疗效、心电图改善情况均优于对照组。表明阿魏酸钠注射液对冠状动脉粥样硬化性心脏病心绞痛具有很好的疗效。

4 阿魏酸钠治疗不稳定型心绞痛的临床观察[4]

有报道,121例冠状动脉粥样硬化性心脏病不稳定型心绞痛患者,双盲随机分为阿魏酸钠治疗组(83例)和对照组(38例),以阿魏酸钠注射液300mg加入5%葡萄糖液250m L静脉滴注治疗为治疗组,以复方丹参针20m L加入5%葡萄糖液250m L静脉滴注治疗为对照组(有糖尿病者改用生理盐水稀释),平均1次/d,连续治疗2周,观察治疗前后心绞痛症状、心电图的变化。结果发现,心绞痛症状疗效:治疗组总有效率95.4%,对照组总有效率84.2%,两组比较差异有显著性(P<0.01);心电图疗效:治疗组总有效率71.9%,对照组总有效率31.1%,两组比较差异有显著性(P<0.01)。提示阿魏酸钠注射液治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病心绞痛安全有效。

5 阿魏酸钠、前列腺素E1联合治疗2型糖尿病肾病40例疗效观察[5]

有报道,40例2型糖尿病肾病患者随机分成对照组和治疗组各20例,根据24h尿蛋白排泄率不同,分为早期肾病组(24h尿蛋白排泄率在20~200μg/min)10例和临床期肾病组(24h尿蛋白排泄率>200μg/min)10例两个亚组。对照组每日静脉滴注前列腺素E1100μg,疗程14d;治疗组每日静脉滴注阿魏酸钠0.3g、前列腺素E1100μg,疗程14d。结果发现,治疗组和对照组治疗后尿微量白蛋白、尿总蛋白、血肌酐均明显降低,与治疗前比较差异有显著性(P<0.001);治疗后尿蛋白变化与对照组比较也有显著差异(P<0.05)。表明阿魏酸钠与前列腺素E1联合治疗糖尿病肾病明显优于单药组。

6 阿魏酸钠治疗慢性肺心病加重期疗效观察[6]

有报道,将88例年龄≥60岁的慢性肺心病患者随机分为两组,治疗组44例在传统综合疗法的基础上加用阿魏酸钠,对照组44例采用传统的综合疗法。结果发现,治疗组总有效率为90.9%,对照组总有效率为63.6%。两组比较有显著差异(P<0.01)。治疗组血液流变学指标较对照组在治疗后明显好转(t值4.43~10.53,P<0.01)。表明阿魏酸钠治疗慢性肺心病加重期能提高疗效,值得推广使用。

7 阿魏酸钠治疗急性脑梗死28例

符合急性脑梗死诊断标准的患者56例随机分为治疗组和对照组各28例,对照组采用口服尼莫地平、阿斯匹林、静脉注射低分子右旋糖酐、胞二磷胆碱治疗,治疗组在常规治疗的基础上加用10%GS500m L+阿魏酸钠0.4g静永滴注,1次/d,共15d。结果发现,治疗组有效率93.3%,显效率56.7%,对照组有效率73.3%,显效率16.7%,两组间疗效比较差异有显著性χ2=4.32,P<0.05。提示阿魏酸钠注射液能提高急性脑梗死的治疗效果。

参考文献

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[4]郭春霞,陈洁.阿魏酸钠治疗不稳定型心绞痛的临床观察[J].河南职工医学院学报,2007(3):238-239.

[5]卢爱华,胡敏.前列腺素E1在糖尿病慢性并发症的应用研究[J].国外医学内分泌学分册,2000,20(3):135-137.

3.阿魏酸糖酯的性能分析 篇三

【关键词】阿魏酸葡糖酯；抗氧化性

植物的衰老行为中的主要矛盾是活性氧，乙烯的产生和脂氧合酶（Lipoxygenase，简称LOX）起了协同作用，所以抗氧保鲜剂，主要考察对脂氧化酶活性的抑制，及对乙烯的抑制作用，这样可能达到预期的效果。由于阿魏酸及其衍生物是一种营养性的安全可靠的食品添加剂，本文通过苹果考察了合成阿魏酸葡糖酯的抗氧化性，即利用紫外光谱和气相色谱法系统的考察了阿魏酸对脂氧化酶活性的抑制和内源乙烯释放的抑制效果，通过测试证实阿魏酸糖酯具有较好的抗氧化性，探索开发出一种安全高效的果蔬保鲜剂。

1.材料与 仪器

1.1实验药品与仪器

阿魏酸葡萄糖酯，阿魏酸木糖脂（天津工业大学提供）； 亚油酸（化学纯，许昌元化生物科技有限公司）； 氢氧化钠（分析纯，天津市东丽区天大化学试剂厂）；乙酸-乙酸钠缓冲液（0.1mol/L，pH4.6～5.8）；磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.1mol/L，pH5.8～7.4）；紫外光度计[UV-2401PC，岛津仪器（苏州）有限公司]；气相色谱仪（GC-Agilent 6890N，美国安捷伦科技有限公司）；高速离心机（LG10-2.4A型，北京医用离心机厂）。

1.2实验方法

1.2.1苹果的处理

将5g左右的合成阿魏酸葡糖酯或阿魏酸木糖酯加热溶于800ml去离子水中待温度降至室温时，将反复洗过无伤、大小均一的最新市售的红富士苹果浸入到浓度约为0.62%的溶液中，待5min后取出，室温下放置待测。

1.2.2底物的制备

10mmol/L亚油酸钠（反应底物）溶液的制取：称取70mg的亚油酸钠， 7mlTritonX-100和4ml无氧水，用0.5mol/L氢氧化钠滴定至溶液澄清，定容25ml，分装于1.5ml的安瓿瓶中，-18℃保存备用。

1.2.3粗酶液的提取

称取2.0g果肉放入研钵中，在液氮中充分研磨，然后将研钵内的果肉转移至离心试管中，取9ml缓冲液充分冲洗研钵后将其转至离心试管中。在10000r/min下离心15min，取上层清液。

LOX活性最适pH值的测定 本文通过紫外分光光度计测定LOX活性最高时的pH值，具体方法是：将一定pH值的缓冲液作参比进行基线测定，然后取0.025ml 10mmol/L亚油酸钠溶液，缓冲液2.775ml和相应缓冲液下酶液0.200ml混合均匀，在30℃恒温水浴中反应1min。立即测定吸光度值A1并计时，过1min后，记录吸光度值A2。两次测量的差值（A2-A1）为ΔA。

LOX活性单位：酶活力 果肉质量×反应时间

LOX活性单位：ΔOD234nm×g-1min-1

由于每次取果肉为2.0g，ΔOD=ΔA×10002

本实验以1min内3ml体系在234nm的吸光度增加0.001作为一个酶活力单位（U），波长设定为234nm；测定不同缓冲液下的LOX活性，需要重新校正基线。

阿魏酸糖酯对LOX活性的影响 分别提取未用阿魏酸糖酯处理的、用阿魏酸葡糖酯处理的及用阿魏酸木糖酯处理的苹果果肉的粗酶液，将最适pH值的缓冲液倒入比色皿中，进行基线测定，然后移取0.025ml亚油酸钠，缓冲液2.775ml，酶液0.200ml于样品池中，在30℃恒温水浴中反应1min，立即测量A1并计时，过1min后，再进行测量A2，求出ΔA，每隔2天进行测量1次，持续22天。

乙烯的定性与定量 本实验中利用气相色谱通过纯乙烯对果肉释放的乙烯进行定性和定量，定量分析采用气相色谱外标法。

气相色谱条件：进样量8ml，检测器 FID。N2流速：35ml/min，H2流速：50ml/min，AIR流速：375ml/min，色谱柱温：50℃，进样口温度：120℃，检测器温度：150℃。

阿魏酸糖酯对乙烯释放量的影响 将处理过的苹果，每次均匀取果肉10g，放入135ml医用药瓶中，将瓶用胶塞封严。过13.5h后进行气相色谱测试，每次进样8ml，通过气相色谱的积分面积从标准曲线上查出对应的乙烯体积x。

乙烯释放量（y）=释放乙烯的体积（x）果肉质量×释放时间

[单位：nl/（g·h）]

2.结果与讨论

2.1 LOX活性最适pH值的测定

本文以离体烟台优级红富士苹果试验材料，在pH4.8～7.4范围内测定了LOX活性变化。最适pH值为6.4，在pH6.4附近，LOX活性也较高。因此应选pH=6.4为酶活性测定的pH值。

2.2未处理、葡糖酯处理、木糖酯处理的LOX活性变化

从图2可以看出三个处理LOX活性总体都呈上升趋势，未处理的红富士苹果的LOX均高于木糖脂和葡糖酯，阿魏酸葡糖酯抑制效应在处理后4天最明显，抑制率为36.92%，16天后开始上升。阿魏酸木糖酯抑制效应在处理后8天最明显，抑制率为 19.47%，12天后开始上升。

理的LOX活性变化。由此可以得出阿魏酸葡糖酯和阿魏酸木糖酯对离体后的红富士苹果的LOX活性有较好的抑制作用，且阿魏酸葡糖酯的抑制作用比阿魏酸木糖酯的效果要更好一些。这是可能是由于葡糖酯有五个羟基，更容易使脂氧合酶失去活性，而木糖酯有4个羟基，其抑制效果要逊于葡糖酯。

2.3未处理、葡糖酯处理、木糖酯处理的苹果乙烯释放量变化

通过在相同色谱条件下测定纯乙烯和果肉释放气体，证实释放气体为乙烯。并由不同浓度的纯乙烯做出标准曲线，利用外标法对不同时间释放的乙烯进行定量。

苹果乙烯释放量变化。

阿魏酸葡糖酯和阿魏酸木糖酯处理的苹果，明显抑制苹果果实内源乙烯发生，分别推迟释放乙烯高峰期为6天和4天出现，而且后期抑制释放量仍是阿魏酸葡糖酯比阿魏酸木糖酯的抑制作用效果更好一些。

3.结论

4.阿魏 篇四

阿魏酸 (Ferulic Acid, FA) , 化学名称为3-甲氧基-4-羟基肉桂酸, 是植物界普遍存在的一种酚酸。在植物中主要通过酯键与细胞壁多糖和木质素交联, 或自身酯化或醚化形成双阿魏酸, 从而构成细胞壁的一部分[1]。利用稀酸或多糖水解酶降解植物细胞壁材料可获得结构不同的低聚糖阿魏酸酯混合物。低聚糖阿魏酸酯 (Feruloylated oligosaccharides, FOs) 是指低聚糖中不同位置上的糖羟基与阿魏酸羧基酯化而形成的一类化合物。由于这类化合物结构中含有公认的天然抗氧化物-阿魏酸, 其生物活性引起了人们的兴趣。目前研究表明, FOs具有比FA更为出色的抗氧化能力[2,3], 同时能增加体内抗氧化酶活性和具有良好的益生菌增殖活性[4,5]。为了有利于深入开展FOs及其单一组分生物活性的研究, 本文综述了国内外FOs检测分析的研究进展。

2 低聚糖阿魏酸酯混合物的分析

目前以谷物麸皮为材料, 制备FOs的方法有两种:酸法水解和酶法水解[6]。两种方法均能随机地水解木聚糖主链上的糖苷键, 而对阿魏酸酯键无水解作用或轻微水解, 因此, 得到的低聚糖混合物中, 有的低聚糖还保留有阿魏酸基团, 从而获得FOs混合物。

2.1 定性分析

为了证实经酸解或酶解的产物是FOs混合物, 可采用纸色谱进行快速定性分析。色谱用的纸为Whatman NO.1滤纸, 采用下行展开, 展开溶剂为正丁醇∶乙酸∶蒸馏水=12∶3∶5, FOs组分分离后, 暴露于氨气中, 暴露前后用紫外光 (波长325nm) 照射进行定位, 然后对荧光点喷洒草酸苯胺试剂 (2体积的2%的苯胺乙醇溶液和3体积的2.5%草酸溶液配制) , 并在105℃下加热10～20min显色。

纸色谱分析结果显示, 若分离的组分在紫外光照射下产生蓝色荧光, 经氨气熏后, 蓝色荧光转变成绿色, 再用草酸苯胺试剂显色产生微红色的亮点, 表明该组分为FOs[4,7,8]。

2.2 定量分析

Saulnier等[9]给出了分光光度法快速测定产物中FOs含量的方法。量取稀释的FOs溶液0.1mL与0.9mL的0.1M硼砂-甘氨酸缓冲溶液 (pH10) 混合, 在345nm和375nm下测定混合溶液的吸光度。根据朗伯比尔定律A=εbc可知物质的浓度与吸光度呈正比。已知对于FA, 其摩尔吸光系数 ( (mol/L) -1·cm-1) :ε345=19662, ε375=7630;对于FOs, 其摩尔吸光系数 ( (mol/L) -1·cm-1) :ε345=23064, ε375=31430。

列方程组为:

式中:A345—被测液在345nm处的吸光值;A375—被测液在375nm处的吸光值;b—比色皿的厚度;Cl—FA的浓度 (mol/L) ;C2—FOs的浓度 (mol/L) 。

由方程组可计算出FOs的浓度C2, 同时可计算出FA的浓度Cl。

采用HPLC法可更加准确地测定FOs含量。HPLC是目前较为先进的分析手段, 具有灵敏度高和重复性好等优点, 因此, 分析FOs时大多使用HPLC进行FA的定量。检测的基本方法是先采用HPLC法测定FOs混合物中游离FA的含量, 而后将FOs碱解使结合态的FA游离出来, 最后测定FA总量, 将FA总量减去原游离FA含量即得FOs中结合态FA的含量, 由此可知FOs的含量。赵阳阳等[10]比较了分光光度法和HPLC法在FOs含量测定上的差异, 发现两者的相对误差小于10%, 相对标准偏差小于8%, 说明两者的测量结果基本一致。

3 低聚糖阿魏酸酯单一组分的分析

确定FOs单一组分的化学结构首先需要进行分离纯化, 分离和纯化是化合物结构分析的关键环节。FOs的分离纯化程序包括初步分离, 进一步分离和精细分离。初步分离基本上均借助于安伯莱特大孔树脂 (Amberlite XAD-2) 等树脂实现[4,9,11];进一步分离主要采用凝胶色谱[9,11,12];精细分离则涉及到高效液相色谱的使用[9]。

FOs结构分析主要是确定其单糖组成、数目、连接方式, FA的连接位置等。目前普遍采用碱水解游离出FA, 再用高效液相色谱法确定FA含量, 其构型和连接方式由核磁共振波谱确定。低聚糖部分可借鉴已经成熟的糖结构分析方法。糖结构分析方法可分为化学方法、物理方法和生物化学方法。化学方法, 如甲基化分析、smith降解、过碘酸氧化、乙酰解分析、三氧化铬氧化等;物理方法包括核磁共振波谱 (1H、13C-NMR) 、快原子轰击质谱 (FAB-MS) ;生物化学方法, 如酶解分析等[13]。

3.1 阿魏酸的分析鉴定

分离纯化后的FOs可以直接通过碱解来测定FA含量。Yuan等[14]将制备的FOs (100μL, 1mg/ml) 用NaOH (100μL, 0.4M) 于室温暗处碱解2h, 加入H3PO4 (150μL, 0.4M) 终止反应。溶液直接由HPLC进行FA含量的测定, 色谱条件:C18 Symetry色谱柱 (150×3.9mm i.d., 5μm) , 柱温为30℃, 进样量为10μL, 流动相为甲醇∶水∶乙酸=50∶50∶0.5的混合溶剂, 等度洗脱, 流速为0.8mL/min, 检测波长为320nm。

FA构型采用核磁共振波谱法进行确定。取8～10 mg样品溶解在D2O (99.996%) 里, 丙酮-d6 (取50μL溶解于500μLD2O中) 作为内标 (δH=2.20ppm, δC=31.88ppm) , 1H和13C的观察频率分别为500.13和125.75MHz[12]。如果FA偶合常数J7, 8=16Hz, 表明构型是反式 (trans) ;如果偶合常数J7, 8=12.5Hz, 表明构型是顺式 (cis) [9,12,15]。FA与糖连接方式的确定参见3.4节和3.6节。

3.2 单糖组成和比例的确定

在FOs结构分析中, 低聚糖部分的单糖分析一般是在三氟乙酸作用下水解, 检测水解产物中的单糖组成和比例, 常采用检测方法有纸层析 (PC) 、薄层层析 (TLC) 和气相色谱 (GC) 等, 离子色谱法 (HPAEC) 近年来也用于单糖与低聚糖的分析, 是一种新型的色谱分析方法, 采用高性能阴离子交换柱, 配合脉冲安培检测器 (PAD) 对糖类进行分析, 具有灵敏度高, 选择性好, 样品用量少和易实现自动化等优点[16]。

Saulnier等[9]量取0.1mL的FOs单一组分溶液 (1mg/mL) 置于NaOH溶液 (0.1mL, 0.4M) 中在35℃下碱解30min, HCl溶液 (0.1mL, 0.4M) 中和后用HPAEC-PAD进行分析。分析步骤如下:将0.1mL样品注射入Carbopac PA1柱中, 维持柱温在25℃, 采用等度洗脱, 流速为1m L/min, 洗脱剂为水∶NaOH (10mM) -NaOAc (40mM) 混合液∶NaOH溶液 (10 0 m M) =3∶1∶1, 电极脉冲电势和持续时间为E1=0.4V/0.5s, E2=0.9V/0.8s, E3=-0.3V/0.5s。在以上的条件下, 经与标准品比较, 可得到单糖的组成和比例。

3.3 糖苷键连接位置的确定

糖苷键连接位置的确定常采用甲基化分析。甲基化分析是多糖也是低聚糖结构分析的最有力的手段之一。它包括糖的所有自由羟基全部生成甲醚, 接着通过水解释放出甲基化单糖, 再经NaBH4还原成糖醇, 进而乙酰化水解后生成的羟基, 得到各种部分甲基化的糖醇乙酰衍生物, 生成的产物用气相色谱进行定性和定量分析, 可确定各单糖种类和比例, 进而用气相色谱-质谱 (GC-MS) , 结合标准谱图的分析, 可得到各种部分甲基化单糖衍生物的归属, 从而确定各单糖的连接位置, 即糖苷键的位置。但甲基化分析还无法知道异头碳糖苷键构型及多糖中单糖残基的顺序信息。此外, 乙酰解、过碘酸氧化及Smith降解也是确定单糖连接类型的常用方法。

波谱法确定糖苷键连接位置的有1H-NMR法和13C-NMR法。1H-NMR法是根据乙酰化后的质子化学位移判断糖的连接位点的。13C-NMR法则通过苷化位移, 推断糖的连接位点。苷化位移是指糖与苷元成苷后, 苷元的α-C、β-C和糖的端基的化学位移值均发生了改变。苷化位移的一般规律为:醇羟基苷化, 可使苷元α-碳向低场位移 (4～10ppm) , β-碳向高场位移 (-0.9～-4.6ppm) ;酚羟基苷化, 可使苷元α-碳向高场位移, β-碳向低场位移;糖的端基碳均为向低场位移。在确定了糖的种类之后, 将苷的碳谱数据与相应单糖的碳谱数据进行比较, 根据苷化位移规律确定单糖的连接位置。

Mueller-Harvey等[17]研究发现, 阿拉伯糖残基的羟甲基处于游离态时, 其H-5的化学位移为3.8ppm。如果样品中阿拉伯糖残基的H-5化学位移在4.30～4.47ppm之间, 那么这表明阿拉伯糖残基是在O-5位上被酯化的[8,10]。

3.4 单糖的连接次序

早期解决糖链连接顺序的方法主要是部分水解法, 即选择性酸水解、甲醇解、乙酰解、碱水解等方法, 选择性酸水解是用稀酸水解使部分糖水解脱去, 然后检查糖的水解产物, 确定连接在末端的糖, 再次水解、鉴定, 如此几次即可得知糖连接的顺序。

质谱分析是解决低聚糖及其苷中糖连接顺序的一个有力工具, 在了解了糖的组成后, 可根据质谱中的裂解规律和该化合物的裂解碎片推测低聚糖及其苷中糖链的连接顺序。此外, 现在测定糖链结构最常用的方法是NMR和2D-NMR法, 一般采用13C-NMR谱或利用碳原子的自旋-弛豫时间 (T1) 的大小来推测糖的连接顺序。

3.5 糖苷键构型的确定

糖苷键的构型可用糖苷酶水解法进行确定, 其原理是根据所用酶的专属性来确定糖苷键构型, 如转化糖酶只水解β-果糖苷键, 麦芽糖酶只水解α-D-葡萄糖苷键, 维素酶只水解β-D-葡萄糖苷键等。

除了糖苷酶水解法外, 目前最常用的是核磁共振法。其方法为: (1) 根据端基质子的偶合常数确定糖苷键的构型。对绝大多数吡喃糖, 当糖苷键为β-D型时, 偶合常数为6～8Hz;当糖苷键为α-D时, 偶合常数为2～4Hz。但甘露糖和鼠李糖无法用此方法确定它们的糖苷键构型。 (2) 在吡喃糖中端基碳的碳氢偶合常数 (1JC1-H1) 也可用于确定糖苷键的构型。当偶合常数为170～175Hz左右时, 为α-D或β-L型糖苷键;偶合常数为160～165Hz左右时, 为β-D或α-L型糖苷键。

Joseleau等[18]认为如果阿拉伯糖残基连接到木糖非还原末端, 并且其H-1的偶合常数 (J1, 2) <2Hz, 那么该阿拉伯糖残基是α构型而不是β构型。Kiefer等[19]研究植物戊聚糖时发现, 如果木糖残基是以α构型连接到其它残基上的, 那么它的H-1化学位移δ将在4.94～5.13ppm之间。

4 展望

目前FOs含量测定主要采用分光光度法和HPLC法, 分光光度法的优点是快速简便, HPLC法则更为灵敏准确。在FOs结构分析中, 化学方法仍然是不可缺少的分析方法, 但核磁共振波谱法 (NMR) 由于可以提供全面而丰富的FOs结构信息, 将成为FOs结构分析的一个有力工具。

摘要：低聚糖阿魏酸酯是指低聚糖中不同位置上的糖羟基与阿魏酸羧基酯化而形成的一类化合物, 可以植物纤维质为原料而获得, 是一类具有良好开发前景的新型食品功能因子。本文综述了低聚糖阿魏酸酯含量检测和结构分析的国内外研究进展, 为深入开展低聚糖阿魏酸酯生物活性的研究提供参考。

5.阿魏酸钠治疗冠心病心绞痛60例 篇五

资料与方法

2008年6月～2009年6月收治心绞痛反复发作,心电图有缺血性S-T改变的冠心病心绞痛患者119例,随机分为两组。治疗组60例,其中男37例,女23例;年龄39～48岁12例,49～58岁21例,59～68岁18例,69岁以上9例。平均年龄59±5.25岁;伴有高血压病23例,伴有糖尿病13例,伴有腔隙性脑梗死9例。对照组59例,其中男35例,女24例;年龄39～48岁11例,49～58岁23例,59～68岁16例,69岁以上9例。平均年龄60±5.12岁;伴有高血压病22例,伴有糖尿病11例,伴有腔隙性脑梗死10例。两组在性别、年龄及伴随症状上比较无统计学意义,具有可比性。

诊断标准:诊断符合全国冠心病心绞痛座谈会议修订“冠心病的诊断参考标准”和1979年国际心脏病学会和协会及世界卫生组织(WHO)临床命名标准化联合专题组的《缺血性心脏病的命名及诊断标准》[1]。

治疗方法:治疗组给予注射用阿魏酸钠0.3g加入5%葡萄糖(糖尿病者应用生理盐水)250ml静脉输注。对照组采用钾镁极化液(10%葡萄糖500ml加氯化钾1.5g,硫酸镁2.0g,胰岛素10U,三磷酸腺苷40mg,辅酶A 100U)和0.9%生理盐水250ml加丹参注射液20ml静滴。两组每日1次,14天为1个疗程。两组在治疗过程中其心绞痛发作严重时,均临时含服硝酸甘油片,同时使用阿司匹林、钙离子拮抗剂、β-受体阻滞剂治疗以及控制血压、降血脂、调整血糖。每日观察2次,观察心率、节律、血压等一般体格检查项目,观察心绞痛发作次数,进行12导心电图描记。

疗效评定标准:按1993年卫生部制定并颁布的《中药新药临床指导原则》进行。疗效评定指标主要为心绞痛程度及心电图变化[2]。

结 果

两组心绞痛症状改善情况:两组经统计学处理后进行比较,有显著性差异(X2=6.34,P<0.05)。见表1。

两组心电图改善情况:两组经统计学处理后进行比较,有显著性差异(X2=3.90,P<0.05),治疗组疗效明显优于对照组。见表2。

讨 论

冠状动脉硬化性心脏病是冠状动脉硬化使血管腔狭窄或阻塞或(和)因冠状动脉功能性改变(痉挛)导致心肌缺血缺氧或坏死而引起的心脏病,简称冠心病。中药治疗冠心病心绞痛是增加冠状动脉及其分支的供血量,改善循环及降低心肌对缺氧的敏感性均可使病情得到改善越来越得到大家的认可。阿魏酸钠是桂皮酸的衍生物之一,普遍存在于川芎、当归等植物药中,是一种生物碱,是常用中药川芎的主要有效活性成分之一。川芎[3]具有行气开郁,活血止痛,祛风燥湿的作用。以现代技术合成的阿魏酸钠[4](川芎素)既保留了川芎的天然活性,具备传统活血化瘀的功效,又保证了药品的纯度。综上所述,阿魏酸钠在治疗冠心病的作用疗效确切、肯定,值得我们推广使用。

参考文献

1 叶任高,陆再英.内科学.第6版.北京:人民卫生出版社,2004:272-298.

2 中华人民共和国卫生部.中药新药临床指导原则(第一辑).北京:中国科技出版社出版,1993:41-45.

3 江苏新医学院编.中药大词典.上海:上海科技出版社出版,2004:220-223.

6.阿魏 篇六

【关键词】阿魏酸；高效液相色谱法；银杏芪血通胶囊

银杏芪血通胶囊（豫药制字Z04140065），是由当归、黄芪、银杏叶、赤芍、川芎等药材加工制成的复方制剂，具有补气活血，散瘀通络之功效，主治各种气虚血瘀和血粘度增高的各种病症。 [1]原标准中没有定量指标，本文以方中当归和川芎中主要成分阿魏酸为指标，建立了银杏芪血通胶囊中阿魏酸的高效液相测定方法，操作简便，准确性和重复性好，可作为银杏芪血通胶囊的质量控制方法，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1260型高效液相色谱仪，AUW-220D电子分析天平，5210DT超声处理器；阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号: 110773-200611）；乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂为分析纯。银杏芪血通胶囊(由柘城县人民医院提供，批号：100725、101127、110128)。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6mm×150mm，5um)

流动相：乙腈—0.085%磷酸溶液（17：83）为流动相[2]；流速0.8 ml·min-1；检测波长316nm；进样量10μl。

2.2线性关系考察

取阿魏酸对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加70%甲醇适量，振摇使完全溶解后，稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml置100 ml量瓶中，加70%甲醇至刻度，摇匀。按照“2.1”项色谱条件，分别进样2、4、6、8、10、12、14、16μl，记录阿魏酸峰面积值，以峰面积积分值（Y）对对照品进样量（X）进行线性回归，得回归方程：Y=3569.2X+1.86r=1.0000。结果表明，阿魏酸对照品进样量在0.0456~0.1824μｇ范围内与峰面积值呈良好的线性关系。

2.3对照品溶液的制备

取阿魏酸对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加70%甲醇适量，振摇使完全溶解后，稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液10ml，置100 ml量瓶中，加70%甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.4供试品溶液及阴性对照溶液的制备

取本品约3.0g，研细，精密称定，置25ml量瓶中，加入70%甲醇适量，超声处理30分钟，放冷，加70%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。另取缺当归和川芎的其他味药按处方工艺制成阴性制剂，按上述方法制备阴性对照溶液。

2.5干扰试验

取上述3种溶液，按照上述色谱条件，分别注入高效液相色谱仪，进样测定，记录色谱图，结果表明供试品溶液在与对照品溶液色谱相应的位置上，有相应的色谱峰，而阴性对照溶液在此保留时间无干扰。色谱图见图1。

2.6精密度试验

取同一对照品溶液，重复进样5次，每次10μl，记录峰面积，RSD=0.82%(n=5)，表明精密度良好。

2.7稳定性试验

取同一对照品溶液，分别在0、2、4、6、8、10、12h进样测定，RSD=0.71%，供试品溶液在12小时内峰面积基本稳定。

2.8加样回收率试验

称取6份已知含量为0.1145mg/g的样品约1.5g，精密称定，置25ml量瓶中，另分别精密加入对照品储备液1.50ml，制备成供试品溶液，分别测定阿魏酸的含量，结果见表1。

2.8样品测定

取3批样品，按“2.4”项下方法制备供试液，各进样10μl，按外标法计算阿魏酸的含量，结果见表2。

3 讨论

3.1 阿魏酸是当归和川芎药材的有效成分，本文建立了阿魏酸的高效液相色谱测定方法，对控制制剂的内在质量具有重要意义。

3.2本文参考中国药典2010年版一部当归及川芎药材的含量测定方法及参考文献[3]- [6]，并针对本制剂的制备工艺及辅料的特性和影响因素，对样品的前处理稍做改动，试验表明超声处理30分钟提取较为完全，且操作简便快捷，故采用超声提取。

参考文献

[1] 河南省医疗机构制剂标准

[2] 中国药典[S].2010年版.一部.38、124

[3] 陳昌彪， 罗明芳， 陈少军. HPLC法测定当归补血颗粒中阿魏酸的含量[J].中国药师.2009.10（09）：865-866

[4] 马秀建.RP-HPLC法测定气血和胶囊中阿魏酸的含量[J].中国药师.2009.12（03）：342-343

[5] 潘莹. HPLC法同时测定通脉颗粒中丹参素、阿魏酸和葛根素的含量[J].中国药房.2011.22（04）：377-378

7.阿魏 篇七

阿魏酸 (ferulic acid) 是当归、川芎的有效成分之一, 其化学名4-羟基-3-甲氧基肉酸, 是桂皮酸的衍生物之一。药理学研究表明, 阿魏酸能改善血液循环、抗凝血并能抑制血小板聚集, 有明显的抗血栓作用;有抑制巨噬细胞活化、抑制花生四烯酸 (AA) 代谢、拮抗组胺、降低血管通透性、抗氧化和清除自由基等广泛药理作用。临床用于治疗血管栓塞性脉管炎、动脉粥样硬化、急性脑血栓和偏头痛及动脉粥样硬化等[6]。阿魏酸能通过抑制细胞外调节蛋白激酶 (ERK1/2) 、应激活化蛋白激酶 (JNK) 而显著抑制有血管紧张素II诱导的血管内皮细胞VSMC增生。结果显示, 阿魏酸将有可能成为有效治疗心血管疾病的药物[7]。因此, 本实验采用HPLC法测定当归-川芎不同比例配伍后阿魏酸含量的变化, 为含当归-川芎的复方方剂分析和临床治疗药物监测提供质量依据, 现介绍如下。

1 仪器与材料

Waters600高效液相色谱仪;电子天平 (BS124S北京赛多利斯仪器系统有限公司) ;阿魏酸对照品 (中国药品生物制品检定研究院, 110773-201012) ;乙腈为色谱纯, 购自山东禹王公司;磷酸为分析纯, 购自天津凯信公司;川芎饮片、当归饮片 (均来源于甘肃省中医院饮片药房, 由李喜香主任药师鉴定) ;水为重蒸馏水。

2 方法

2.1 对照品溶液的制备

精密称取阿魏酸标准品2.5 mg, 用流动相定容于10 m L棕色容量瓶中, 作为对照品贮备液。分别取贮备液0.25 m L、0.5 m L、1 m L、2 m L、5 m L置于5 m L棕色容量瓶中, 用流动相定容作为标准曲线制备液。

2.2 样品溶液的制备

分别称取适量当归-川芎不同配比 (1∶5、1∶4、1∶3、1∶2、1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1) 的药材置于不锈钢锅中, 加入4倍量水浸泡30分钟, 电磁炉加热煮沸30分钟, 过滤, 残渣再用4倍量水加热煮沸20分钟, 过滤, 合并药液, 文火浓缩至60 m L, 备用。

2.3 色谱条件

Agileht ZORBAX SB-C18柱 (250 mm×4.6 m, 5μm) ;流动相:乙腈∶0.085%磷酸水溶液=17∶83 (v/v) ;流速为1 m L·min-1;柱温:25℃;检测波长为320 nm。色谱图见图1。

注:A:阿魏酸对照品色谱图;B~J:当归-川芎 (1∶5、1∶4、1∶3、1∶2、1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1) 不同配比色谱图

3 结果

3.1 线性关系分析

取2.1项中标准曲线制备液, 分别进样20μL测定。由峰面积 (Y) 对相应的浓度 (X) 做线性回归, 阿魏酸回归方程为Y=97 268X-12 960, r=0.999 9, 表明阿魏酸在12.5~250μg·m L-1的浓度范围内线性关系良好。

3.2 精密度实验

取2.1项中对照品贮备液, 精密吸取20μL, 连续进样5次, 测定阿魏酸的峰面积, 其峰面积RSD=1.47%, 表明仪器精密度良好。

3.3 稳定性实验

取20μL配比为1∶5的样品溶液, 分别在0小时、2小时、6小时、12小时、24小时内测定, 其阿魏酸峰面积RSD=1.93%, 表明样品溶液在24小时内稳定。

3.4 重复性实验

取20μL配比为1∶5的样品溶液, 重复进样5次, 其阿魏酸峰面积RSD=2.60%, 重复性符合要求。

3.5 加样回收率实验

精密称取约6 g已知含量配比为1∶5的药材饮片, 精密加入阿魏酸对照品溶液 (3种不同浓度水平, 各3份) 。按2.2项下条件制备样品溶液, 定容至10 m L;各进样20μL, 测定阿魏酸含量, 计算回收率, 结果见表1。实验结果表明:平均加样回收率为97.55%, RSD为2.10%, 加样回收率符合规定, 说明方法的准确度较好。

3.6 样品的测定

按2.2项下方法制备样品溶液, 进样20μL, 测定当归、川芎不同配比下阿魏酸的含量, 结果见表2。从实验结果来看, 当归与川芎配比为1∶5时阿魏酸的含量最高, 配比为4∶1时阿魏酸的含量最低。

4 讨论

(1) 阿魏酸结构中有酚羟基和苯环共轭的双键而使其性质极不稳定, 特别是具有光不稳定性, 配制时应存放在棕色容量瓶里。方法学实验表明, 该法线性关系良好, 回收率、精密度高, 具有准确、灵敏的特点。本实验结果表明, 当归与川芎配比为1∶5时, 阿魏酸的含量最高, 而随着配比的变化, 阿魏酸含量也发生了不同程度降低, 这为当归-川芎的复方方剂分析和临床药物检测提供了质量依据。

(2) 本实验曾选用过甲醇、乙腈-冰醋酸-水和甲醇、乙腈-磷酸-水作为流动相, 对样品溶液进行进样分析, 结果显示, 流动相条件为乙腈∶0.085%磷酸水溶液=17∶83 (v/v) 时, 样品溶液色谱峰分离效果好, 且杂质少。

(3) 根据白晶等[8]在当归-川芎药对中阿魏酸在体肠吸收研究结果表明, 与单味药相比较, 药对中阿魏酸的吸收在质量浓度、p H值及胃肠道方面均表现出较大的优越性。相同质量浓度 (以阿魏酸为准) 给药时, 药对中阿魏酸的吸收更完全、更迅速。因此, 本实验通过比较当归、川芎不同配比中阿魏酸的含量, 寻找出阿魏酸含量最高时当归、川芎的配比, 从而指导临床合理有效用药。

参考文献

[1]李伟霞, 唐于平, 郭建明, 等.当归川芎药对及其组成药味对3种血虚模型补血作用的比较研究[J].中国中药杂志, 2011, 36 (13) :808.

[2]王欢, 唐于平, 丁安伟, 等.当归-川芎药对不同配比的中医应用数据分析[J].中国实验方剂学杂志, 2009, 15 (11) :44-47.

[3]张焕, 王一涛, 严灿, 等.当归与川芎药理作用研究进展与比较[J].时珍国医国药, 2008, 19 (2) :293-295.

[4]夏泉, 张平, 李绍平, 等.当归的药理作用研究进展[J].时珍国医国药, 2004, 15 (3) :164.

[5]李秋怡, 干国平, 刘焱文.川芎的化学成分及药理研究进展[J].时珍国医国药, 2006, 17 (7) :1298.

[6]胡益勇, 徐晓玉.阿魏酸的化学和药理研究进展[J].中成药, 2006, 28 (2) :253-255.

[7]Hou Yongzhong, Yang Jie, Zhao Guangrong.Ferulic acid inhibits vascular smooth muscle cell proliferation induced by angio tensin II[J].European Journal of Pharmacology, 2004 (499) :85.

8.阿魏 篇八

流变性能是高速卷烟胶的重要指标,在本文中,我们将利用PVA中的-OH,使之与有机酸(阿魏酸)交联反应,提高其流变性能。研究发现采用阿魏酸对PVA进行改性后,PVA的流变性能达到了较大的改善。

1 实验

1.1 试剂

聚乙烯醇(PVA,聚合度2400,醇解度98%~99%),北京有机化工厂;阿魏酸(3-甲氧基-4-羟基肉桂酸(FA,化学纯),国药集团化学试剂有限公司;其他试剂均为分析纯,使用前未经进一步处理;去离子水自制。

1.2 实验步骤

1.2.1 试样制备

(1)PVA溶液的配制:准确称取一定量的PVA与去离子水,在常温下用磁力搅拌器搅拌3 h,待PVA颗粒大部分都融化,然后再用由油浴加热法搅拌3 h,完全溶解制得12%的PVA溶液。

(2)依次准确称取PVA溶液投入到三口烧瓶中,按不同比例称取阿魏酸,溶于一定量的去离子水中,分别投入PVA溶液。采用油浴加热,将温度升高到指定温度,中速搅拌,在指定时间段内保持恒温反应。反应终止后,停止加热搅拌,冷却至室温,出料,密封保存。

1.2.2 羟值测定

选取浓度比例为2%,8%,10%的FA/PVA和纯PVA溶液,放入烘箱进行烘干。

从第一组实验样品中,选取浓度比例为2%,5%,8%,10%的FA/PVA和纯PVA溶液,放入烘箱进行烘干。

称取一定量的邻苯二酸酐溶液,将FA/PVA样品和纯PVA样品投入溶液中,在油浴加热至115℃反应1 h。待样品完全溶解后滴定酚酞和1 mol·L-1的KOH溶液,至溶液颜色变粉红色。根据KOH的消耗量计算得出羟值X1:

式中:V1、V2———空白试验和样品所消耗的KOH溶液体积

c———KOH溶液的浓度

m———样品质量

X2———样品的酸值

2 结果与讨论

聚乙烯醇含有大量的羟基,能形成大量的分子内和分子间氢键,其熔融温度与分解温度非常接近[9]。利用多元酸作为改性试剂可以得到侧链含有羧基的PVA,得到改性PVA后,测量改性后PVA的流变性能。

2.1 FA的含量对PVA流变性能分析

为了考察阿魏酸(FA)的量对PVA的影响,将质量分数为2%,5%,8%,10%,15%的FA加入PVA中。控制反应温度为60℃,反应时间为3 h。其中含5%和10%FA的PVA的流变曲线见图1。

由图1可知,随着阿魏酸添加量的增加,改性PVA流变性能呈现先提升后变差的趋势。当阿魏酸添加量为PVA质量的2%时,改性PVA的流变性能有所提升;当添加量增至5%时,流变曲线重合度高,流变性能表现最佳;添加量继续增加时,流变性能变差。这是因为PVA上的羟基较容易和阿魏酸的羧基发生酯化反应,当阿魏酸添加量较少时,能够与PVA上的羟基充分酯化,键接在PVA分子链段上。随着阿魏酸参与反应的量增多,PVA分子链段上键合数也增加,此过程中,改性PVA溶液的流变性能变好。但由于阿魏酸分子上含有一个羧基基团,一个羟基基团,阿魏酸分子间也有酯化反应的趋势,在阿魏酸添加量较大的情况下,阿魏酸除同PVA分子间产生更多反应外,自身分子间也出现交联,PVA分子链的位阻效应增强,直接影响了改性PVA的流变性能。最终导致随着阿魏酸添加量增加,改性PVA的流变性能先提升后降低的表现。不同FA含量的PVA流变性能见表1。

*经改性后的PVA流变性能表现,★越多,流变性能表现越好。

2.2 反应温度对FA/PVA流变性能表现影响及分析

我们还考察了不同反应温度对PVA性能的影响。选取FA/PVA的质量比为5%,反应时间为3 h。当反应温度为70℃时,改性PVA的流变曲线如图2所示。

*经改性后的PVA流变性能表现,★越多,流变性能表现越好。

由图2和表2和可知,随着反应温度的增加,阿魏酸改性PVA的流变性能先提升后降低,70℃时表现最佳。这是由于酯化反应是放热反应,但酯化前断键吸热,此过程中温度越高,反应越充分,因而在70℃以下时,反应温度越高,反应越充分;但随着反应温度增加,高温不利于酯化体系散热,影响平衡反应向右进行,酯化程度及键合度降低,改性效果有限。对比图1和图2,60℃时,改性PVA的流变性能表现更佳。

2.3 羟值测定分析

按照羟值测定方法对改性PVA样品进行测试,计算对应样品的羟值如表3所示。

根据表3羟值测定结果,FA/PVA质量比为5%左右时,改性PVA的羟值同纯PVA羟值最为接近,且此时FA/PVA抗剪切能力最强,流变性能最好。当FA/PVA质量比低于5%时,改性体系内羧基基团偏少,羟基酯化不完全;而质量比高于5%时,多余羧基将同FA分子上的羟基反应,甚至会同PVA侧链上的羟基键接,形成体系交联结构,PVA长链上出现空间位阻效应。

3 结论

采用用阿魏酸作为聚乙烯醇的改性试剂,在不同实验条件下,通过合成实验制得改性聚乙烯醇,且对改性产物做了流变性能测试。通过对改性产物的流变性能分析得出如下结论:

(1)阿魏酸作为改性试剂合成改性PVA,改性后PVA粘度降低幅度小,且降低趋势平缓,耐剪切能力明显高于其他对照试验试剂。整个流变性能测试过程中,流变升速降速曲线重合性好,稳定性较高。

(2)温度是影响阿魏酸键合度的重要指标。反应初始,高温有利于反应的进行,但是温度一旦超过70℃,键合度就会降低。一方面,酯化反应是放热反应,过高的温度影响体系放热,影响酯化平衡反应向右进行,酯化程度及键合度降低,改性效果有限。另一方面高温下,阿魏酸自身的酯化反应活性增加,降低了对PVA的改性效果。

(3)通过对比试验,最优流变性能的阿魏酸改性PVA,其工艺条件为:阿魏酸添加量为PVA浓度的5%,反应时间为3 h,合成温度为60℃。

摘要：为了改善聚乙烯醇的流变性能,分别采用阿魏酸对聚乙烯醇(PVA)进行改性,考察了不同有机酸改性剂对PVA的流变性能影响。实验结果表明,经阿魏酸改性后的PVA其流变性能、剪切硬度及稳定性得到较大提高。同时优化了改性的工艺条件,研究发现反应温度为60℃,阿魏酸的添加量为PVA质量的5%时,反应时间为5 h,改性PVA的流变性能最好。

关键词：聚乙烯醇,有机酸,改性,流变性能

参考文献

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[4]杨猛,李长多,高阳,等.PVAc乳液粘度的影响因素研究[J].中国胶黏剂,2013,22(3):22-25.

[5]王建华,杨毅.水溶性聚乙烯醇作为药物载体材料的应用研究.材料导报,2010,24(6):73-76.

[6]R Ricciardi,C Gaillet,G Ducouret,et al.Investigation of the relationships between the chain organization and rheological properties of atactic poly(vinyl alcohol)hydrogels[J].Polymer,2003,44(11):3375-3380.

[7]M Mucha.Rheological properties of chitosan blends with poly(ethylene oxide)and poly(vinyl alcohol)in solution[J].Reactive and Functional Polymers,1998,38(1):19-25.

[8]F Boury,Tz Ivanova,I Pana otov,et al.Dynamic properties of poly(DL-lactide)and polyvinyl alcohol monolayers at the air/water and dichloromethane/water interfaces[J].Journal of Colloid and Interface Science,1995,169(2):380-392.

9.阿魏 篇九

【关键词】阿魏酸钠；糖尿病肾病；超敏C反应蛋白；肾功能

Effection of Sodium Ferulate to Diabetic Nephropathy Patients on Serum Hypersensitivity C-reactive Protein and Renal Function

Zhong JingLing.

【Abstract】Objective：To investigate effection of Sodium ferulate to diabetic nephropathy (DN)patients on serum Hypersensitivity C-reactive protein(hs-CRP)and renal function.Methods： 42 cases of DN patients were randomly divided into control group (21 cases) and treatment group (21cases). Observed two groups before treatment， after 2 weeks and 4 weeks the blood urea nitrogen(BUN)， creatinine (CRE)， and hs-CRP concentration.Results Serum BUN， CRE， and hs-CRP were decreased after 2 weeks of treatment in 2 groups， and decreased significantly in treatment group.compared with before treatment， there were no significant difference respectively. Serum BUN， CRE， and hs-CRP were further decreased after 4 weeks of treatment in 2 groups， and the treatment group decreased substantially greater.compared with before treatment，there were no significant difference between the control group， whereas the treatment group differences were significant.compared with the control group， the differences were significant. hs-CRP and BUN and CRE were positively related analysis correlation.Conclusion： Sodium ferulate could inhibit DN on serum inflammatory response， significantly improv renal function， Worthy of clinical promotion.

【Key words】 Diabetic nephropathy；Sodium ferulate； Hypersensitivity C-reactive protein；Renal function

糖尿病肾病(DN)是2型糖尿病慢性微血管并发症，认为与慢性低度炎症反应[1，3]。而高敏C反应蛋白(hs-CRP)是反映血管炎症反应的敏感指标。近年来，笔者应用阿魏酸钠治疗DN患者，观察患者治疗前后血清中hs-CRP及肾功能变化，现报道如下。

1资料与方法1.1 对象：收集2008年3月至2009年3月我科住院的DN患者42例，所有病例均按照《内科学》(第7版)诊断标准[2]，经临床确诊为DN(IV-Ⅴ期)，除外其他肾病及心衰诊断之前有高血压患者和近期有口服肾毒性药物史患者。按随机数字表分为2组。治疗组21例，男13例，女8例；年龄48～67岁，平均53.6岁；病程7～16a，平均12.5a；IV期14例，Ⅴ期7例。对照组21例，男9例，女12例；年龄51～63岁，平均54.2岁；病程9～14a，平均10.9年；IV期12例，Ⅴ期9例。2组患者性别、年龄、病程及病情比较，差异均无显著性(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 治疗方案：对照组在糖尿病饮食和应用胰岛素将糖的基础上常规抗凝药、降压药等护肾治疗；治疗组在对照组基础上用阿魏酸钠注射液0.4g加入生理盐水250ml静滴，1次/d，共4wk治疗。

1.3 观察指标：两组患者分别于治疗前、治疗2wk和4wk后空腹采静脉血，留取血清检测血尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)和hs-CRP。

1.4 统计学处理：所有数据以 χ±S表示，采用t检验，相关性采用直线相关分析，P＜0.05为差异有显著性。

2结果

2.1 2组治疗前后BUN、CRE和hs-CRP比较：2组治疗前后BUN、CRE和hs-CRP比较，结果见表1。

2.2 hs-CRP与BUN和CRE的相关性 hs-CRP与BUN和CRE呈同向变化，作直线相关分析均呈正相关(r=0.459、0.472，P＜0.01)。

3讨论

越来越多的研究表明[3]，在DN的发病机制中，慢性低度炎症反应起重要作用，炎症过程促进了DN的发生与发展。作为炎性标志物， C反应蛋白几乎与炎症和机体损伤程度呈正比，是反映体内炎症活动的精确、客观指标。在急性炎症时，血清中C反应蛋白浓度可迅速增高，但是在慢性低度炎症状态下含量甚微。hs-CRP是一种敏感的、非特异的炎症标志，它反映了炎症的程度。目前国外研究发现[4-5]，hs-CRP的水平与糖尿病肾脏损伤的程度平行。因此如何抑制DN患者血清中炎症反应是临床防治DN的重要课题。

阿魏酸钠是桂皮酸的衍生物， 普遍存在于当归、川芎等植物中，是一种新型的非肽类内皮素受体拮抗剂[6]。国内有研究发现[7，8]，阿魏酸钠可明显改善DN患者的肾功能状态，减少尿蛋白。但阿魏酸钠改善DN患者的肾功能状态，减少尿蛋白的具体机制尚不清楚。本研究发现，2组DN患者治疗前血清中BUN、CRE和hs-CRP比较差异均无显著性。两组治疗2wk后血清BUN、CRE和hs-CRP均存在不同程度降低，以治疗组明显，与治疗前比较差异均无显著性；与对照组比较，差异均无显著性；两组治疗4wk后患者血清中BUN、CRE和hs-CRP均进一步降低，以治疗组降低幅度更大，与治疗前比较，对照组差异均无显著性，而治疗组差异均有显著性；与对照组比较，差异均有显著性。更有意义的是hs-CRP与BUN和CRE呈同向变化，作直线相关分析均呈正相关，说明阿魏酸钠可能通过抑制DN患者血清中炎症反应，从而降低血清中BUN和CRE浓度，改善患者肾功能。但阿魏酸钠通过何种途径抑制DN患者血清中炎症反应目前尚不清楚，有待进一步研究。

总之，阿魏酸钠可能通过抑制DN患者血清中炎症反应，显著改善患者肾功能， 对延缓肾功能衰竭进展，值得临床推广。

参考文献

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10.阿魏 篇十

1 阿魏酸酯酶的来源及分类

1.1 微生物来源的阿魏酸酯酶

阿魏酸酯酶[feruloyl esterase;EC 3.1.1.73], 又称肉桂酸酯酶或肉桂酰酯酶, 可以水解阿魏酸、二聚阿魏酸形成的酯键, 属于羧酸酯水解酶亚类[2]。阿魏酸酯酶在微生物、植物和动物中均有发现, 目前已有40余种阿魏酸酯酶从微生物中分离得到[3]。

真菌是阿魏酸酯酶的主要微生物来源, 包括曲霉菌属 (Aspergillus sp.) 、青霉菌属 (Penicillum sp.) 、瘤胃真菌 (Neocallimastix sp., Orpinomyces sp., Anaeromyces mucronatus) 、镰刀菌属 (Fusarium sp.) 、裂褶菌属 (Schizophyllum commune) 、孢子丝菌属 (Sporotrichum sp.) 、嗜热毁丝菌 (Myceliophthora thermophila) 、烟草赤星病菌 (Alternaria alternate) 等。

相比之下, 阿魏酸酯酶的细菌来源则相对较少, 仅包括链霉菌属 (Streptomyces sp.) 、乳杆菌属 (Lactobacillus sp.) 、梭菌属 (Clostridium sp.) 、嗜热厌氧菌 (Thermoanaerobacter tengcongensis) 、丁酸弧菌 (Butyrivibrio fibrisolvens) 、伯克氏菌 (Burkholderia multivorans) 、嗜冷单胞菌 (Pseudoalteromonas haloplanktis) 和弯曲芽孢杆菌 (Bacillus flexus) 。

1.2 阿魏酸酯酶的分类

2004年, Crepin VF等人[4]根据氨基酸序列及对四种模式底物 (阿魏酸甲酯 (MFA) 、咖啡酸甲酯 (MCA) 、对香豆酸甲酯 (MρCA) 及芥子酸甲酯 (MSA) ) 的特异性, 将阿魏酸酯酶划分为A、B、C、D四种类型。表1从微生物来源、底物特异性、序列特点等方面对不同类型的阿魏酸酯酶进行了总结。

2008年, BenoitⅠ等人[5]通过研究阿魏酸酯酶基因在真菌中的分布情况, 将真菌阿魏酸酯酶划分为7个亚类 (Sub Families) 。其中, SF1、SF6、SF7包含了已进行详细酶学特性研究的真菌阿魏酸酯酶。SF7中的阿魏酸酯酶均来源于曲霉菌属, 主要属于A型阿魏酸酯酶。然而该分类方法与底物特性分类并不存在一致性。如Ts Fae C、FOXG12213、Ao Fae B、Ao Fae C均属于SF1亚类;而根据底物特性分类, Ao Fae B属于B型阿魏酸酯酶, 其他阿魏酸酯酶均属于C型。

2 阿魏酸酯酶的分子研究

从发现至今, 阿魏酸酯酶走入研究者的视野已有20多年的历史。由于其在诸多领域中的应用潜力, 近几年国内外学者对阿魏酸酯酶基因的重组表达、调控机制及酶学性质的分子改良的关注度呈上升趋势。

2.1 阿魏酸酯酶基因的克隆与表达

目前, 阿魏酸酯酶基因的获得主要通过3条途径:

第一, 构建已知阿魏酸酯酶活性菌株的基因文库, 通过底物筛选含有阿魏酸酯酶基因片段的克隆子。阿魏酸酯酶基因cin I[6]和est EFH5[7]均通过该途径从菌株Butyrivibrio fibrisolvensE14和Burkholderia multivorans的基因组文库中获得。

第二, Gene Bank中存在大量假定阿魏酸酯酶基因序列。通过PCR已成功获得了十几种阿魏酸酯酶基因。Crepin VF等人[8]运用此方法从Neurospora crassa中得到基因fae D-3.544, 该基因编码291个氨基酸, 蛋白序列与Fae A (Penicillium funiculosum) 和XYLD (Pseudomonas Fluorescens) 分别具有43%和41%的相似性。Shin HD等人[9]根据Pseudomonas Fluorescens基因序列设计引物扩增一个阿魏酸酯酶基因, 该基因编码527个氨基酸, 其中包含一条长19个氨基酸的信号肽, 其蛋白序列与Fae C (T.Stipitatus) 具56%的一致性。Koseki T[10]设计引物从Aspergillus oryzae中克隆基因Aofae B和Aofae C, 其编码的Ao Fae B和Ao Fae C与来源于Pseudomonas Fluorescens、Talaromyces stipitatus和Aspergillus niger的C型阿魏酸酯酶有50%以上的同源性。Zheng XZ等人[11]根据已知的稻瘟病菌基因组数据库设计引物从中获得MGG-01403.5基因, 该基因编码的氨基酸序列与pf FAEA (Penicillium funiculosum) 具有44%的同源性。2010年, Abokitse K[12]等人从Thermoanaerobacter tengcongensis中获得基因Tt FAE, 表现了优良的酶学特性。Rakotoarivonina H[13]从Thermobacillus xylanilyticus中获得基因Tx-est1, 长1 020 bp。重组蛋白Tx-Est1与Xyn Y (CAA58242) 和Xyn B (BAB3949) 分别具有52%和50%的同源性。

第三, 不可培养微生物中蕴含了大量的生物资源。2009年, Vieites JM等人[14]通过功能性筛选从蚯蚓肠胃宏基因组文库中获得基因3A6, 经表达得到的蛋白3A6表现阿魏酸酯酶活性, 与酯酶/脂肪酶超家族的蛋白质序列表现54%同源性。2011年, 本文作者[15]从土壤宏基因组中克隆到阿魏酸酯酶基因est27, 编码291个氨基酸, 与部分酯酶/脂肪酶仅具有37%~47%同源性。2012年Rashamuse K等人[16]利用垃圾废弃物构建宏基因组文库, 获得阿魏酸酯酶基因fae6, 编码515个氨基酸。重组蛋白Fae6的序列与已知酯酶氨基酸序列存在43%~49%同源性, 其催化三分子为Ser219 (位于G-X-S-X-G基序中) 、Glu331和His422。Cheng F[17]从荷兰牛胃宏基因组文库中获得基因FAE-SH1, 其表达产物表现出显著的阿魏酸酯酶活性。重组蛋白FAE-SH1与已知酯酶序列表现56%的同源性。Wong DW等人[18]构建瘤胃微生物宏基因组文库, 克隆到阿魏酸酯酶基因Ru Fae2。重组蛋白表现C型阿魏酸酯酶的特性。研究发现, 利用该技术获得的阿魏酸酯酶除了在序列上属于新型蛋白, 还表现了其他优良特性, 如重组蛋白Est27具有良好的耐盐、耐碱、耐高温特性, 在造纸工业中具有应用前景[15];FAE-SH1对蛋白酶表现良好的抗性[17]。可见, 研究者可通过宏基因组学技术获得更多具有应用前景的新型阿魏酸酯酶基因。

目前, 国内外学者主要采用大肠杆菌 (E.coli) 、毕赤酵母 (P.pastoris) 和酿酒酵母 (S.cerevisiae) 表达系统对阿魏酸酯酶进行重组表达 (表达产物、酶学特性等信息在表2中显示) 。除此之外, 部分学者将阿魏酸酯酶基因进行同源表达。同源表达的优点在于可以提高表达量, 且使重组蛋白仍然具有原始菌分泌蛋白的性质。Levasseur A[19]将fae B基因在Aspergillus niger中进行同源表达, 经过诱导蛋白表达量为100 mg/L, 为未转化Aspergillus niger所分泌阿魏酸酯酶量的16倍。重组子在发酵11d时酶活高达300 U/m L, Fae B在50℃下保温2h仍然有90%左右的活性, 其表达量和热稳定性都为该酶应用于造纸工业提供了条件。Record E等人[20]将fae A进行了同源表达, Fae A与木聚糖酶、漆酶共同消化麦秆进行化学制浆, 消化率可以达到75%, 卡伯值为3.9, 具有应用于造纸工业的潜力。

2.2 阿魏酸酯酶的表达调控

阿魏酸酯酶的表达调控是一个非常复杂的过程。以A.niger为例[21], Fae A的启动子中包含Cre A阻遏蛋白 (SYG-GRG, 位于起始密码子上游376bp序列处) 和Xln R (GGCTAG, 位于起始密码子上游225bp序列处) 。Xln R介导木糖诱导途径, 木糖的加入促进Fae A的表达。然而木糖的浓度对阿魏酸酯酶表达的影响不同, 如与1%木糖相比, 0.03%木糖促进木糖的表达量更高。Cre A介导糖代谢产物抑制途径。试验显示葡萄糖严重抑制以木糖为碳源的野生菌株A.niger N402的Fae A表达。此外, 研究显示Fae A的表达还受到芳香化合物 (如阿魏酸、香豆酸) 诱导途径的影响。芳香化合物能够促进其表达, 协同木糖共同作用时阿魏酸酯酶的表达量大大增加。阿魏酸酯酶的调控过程仍有待进一步研究, 对优化阿魏酸酯酶发酵, 实现最佳表达具有指导意义。

2.3 阿魏酸酯酶晶体结构的研究

通过蛋白质晶体结构的构建及基因突变技术, 研究者推测了阿魏酸酯酶与脂肪酶的进化过程, 并对阿魏酸酯酶的催化机制、底物特异性识别位点进行研究。

以来源于A.niger的阿魏酸酯酶FAE-Ⅲ为研究对象。FAE-Ⅲ与脂肪酶TIL (Thermomyces lanuginosa) 的蛋白质晶体结构具有较高的相似性 (如图1) 。由此推测, 真菌阿魏酸酯酶与TIL的分化晚于细菌阿魏酸酯酶。TIL具有两种构象:活化状态 (图1-a) 、失活状态 (图1-c) 。这两种状态取决于82~96位的螺旋“盖子”的开闭。当“盖子”打开时, TIL处于活化状态;当“盖子”关闭时, TIL处于失活状态。由于FAE-Ⅲ本身并不具备脂肪酶活性, “盖子”结构并不能发挥作用, 因此FAE-Ⅲ并不具有“盖子”结构 (图1-b) 。

通过对蛋白晶体结构的研究发现, FAE-Ⅲ的催化三分子为Ser133、Asp194和His247, 其中His247的Nε原子与Ser133的Oγ原子、Asp194的Nδ原子形成氢键。这种氨基酸残基的排布有利于通过亲核攻击打断氨基化合物或者酯键, 其催化机制如图2。随着底物的加入, FAE-Ⅲ中Ser133和His247的构象会发生变化[22]。

2.4 阿魏酸酯酶的分子改良

研究者根据阿魏酸酯酶晶体结构、序列特点, 利用突变技术对其分子改良, 获得目的阿魏酸酯酶。Koseki T[23]依据黑曲霉来源阿魏酸酯酶的晶体结构, 对米曲霉来源的阿魏酸酯酶Awfae A进行定点突变, 突变子D77I、D77N的最适p H值升高。可见, Asp77对于Awfae A能够在酸性条件下催化反应起重要作用, 推测突变原理在于蛋白表面电荷的改变;在控温方面, 本文作者采用随机突变及定点突变技术对阿魏酸酯酶Est27进行分子改良, 实验结果显示突变酶的热稳定性较野生Est27提高20℃, 有明显改善[24]。Zhang SB等人[25]通过Po P-Mu Si C运算法对阿魏酸酯酶An Fae A的序列进行分析, 通过定点突变获得热稳定性提高的突变酶D93G、S187F。随后在此基础上进行随机突变获得C235S, 其热稳定性有显著提高且在60℃下能够水解气爆玉米秆。可见, 突变技术是获得具有工业用途阿魏酸酯酶的有效途径。

(a) 活化状态的TIL; (b) FAE-Ⅲ; (c) 失活状态的TIL。 (a) open-form TIL; (b) FAE-Ⅲ; (c) closed-form TIL.

3 阿魏酸酯酶的工业应用

阿魏酸酯酶在食品、医药、造纸、饲料加工、生物合成及生物能源的开发等诸多领域均有应用, 近几年来受到了研究者的普遍关注。首先, 阿魏酸酯酶水解作用的产物———阿魏酸具有抗氧化、防自由基、抗血栓、降血脂、防癌、抗辐射等功能[26,27], 这些功能使阿魏酸酯酶在食品、医药、化妆品行业中具有广泛的应用价值。其次, 在造纸业中, 经过阿魏酸酯酶与其他酶协同处理后的植物原料结构变疏松, 易于木质素的脱除, 从而减少了制浆过程中氯的使用, 减少了环境污染;另一方面也可以提高纸浆的亮度[19,20]。第三, 阿魏酸与木质素及纤维素交联所形成的骨架结构严重抑制了牲畜的消化和吸收。阿魏酸酯酶的协同作用使饲料变的疏松, 从而提高干物质消化率和饲料的转化效率[28], 因此阿魏酸酯酶在饲料加工业中的运用潜力不可小觑。第四, 在生物能源开发方面, 阿魏酸酯酶协助纤维素酶、木聚糖酶对植物细胞壁进行降解可以提高还原糖类 (如葡萄糖和木糖等) 的释放[29], 用以生产燃料乙醇。最后, 在生物合成方面, 阿魏酸酯酶能够催化酚类和羟基肉桂酸等酯化, 扩大了这些物质在工业生产中的应用范围[30]。

4 展望

由于阿魏酸酯酶在多种行业中的应用及环境保护中具有应用价值, 因此对阿魏酸酯酶的研究显得尤为重要。目前对阿魏酸酯酶的研究国内外学者已经取得了一定的成绩, 然而获得具有工业应用价值的阿魏酸酯酶仍然还有大量工作要做。分子生物学技术已经在阿魏酸酯酶的基因克隆、蛋白重组表达等方面发挥了重要的作用。如何利用分子技术获得新型的阿魏酸酯酶, 如何通过分子改造使已知的阿魏酸酯酶适应工业生产, 如何解析阿魏酸酯酶蛋白结构与功能关系, 这些均为下一步需要研究的问题。

摘要：阿魏酸酯酶是指可以水解阿魏酸甲酯、低聚糖阿魏酸酯及多聚糖阿魏酸酯中的酯键并将阿魏酸释放出来的酶, 可以破坏阿魏酸在细胞壁中形成的交联结构。阿魏酸酯酶在食品、医药、造纸、饲料加工、生物燃料等诸多领域的应用越来越受到重视。该文主要介绍了阿魏酸酯酶的基因的克隆与表达、调控机制、晶体结构、分子改良及应用等方面的研究进展。