检验科室内质控流程图（精选5篇）
1.检验科室内质控流程图 篇一
灌南县第一人民医院检验科
微生物室室内质控规程
1.目的
规范微生物实验室管理程序，确保临床报告的质量。
2.适用范围
微生物实验室的所有检验项目。
3.职责
实验室检验人员均须熟知并遵守本程序。
4.程序
4.1 分析前质量管理
4.1.1 检验申请单临床医生应在HIS中规范申请临床微生物检测。口头申请追加样本检验项目，必须在样本有效期内申请，并补开检验医嘱或检验申请单。4.1.2 护士应在核对医嘱、病人信息和检验申请信息后，填写微生物检验项目标签，并将微生物检验项目标签正确张贴于标本容器上。
4.1.3 样本采集和运输样本采集人员应遵偱《标本采集手册》采集样本，并在规定的时间和温度范围内，使用指定的容器或运输培养基，安全运送到微生物室。4.1.4 样本的接收样本接收人员应严格按照《标本接收和录入程序》、《标本拒收程序》对样本接收或拒收，并记录。
4.1.5 微生物检验标本信息输入微生物实验室接种岗位检验人员严格按照《标本接收和录入程序》录人、核对病人信息和标本信息等资料。
4.1.6 样本储存微生物实验室接种岗位检验人员按照各种标本的细菌学检验标准程序正确及时处理的标本。已经检验的样本应在保证其性质稳定的条件下，将样本以适当的方式保留到规定时间内，以便能在出具结果报告后可以复查，或做补充检验。
4.2 分析中质量管理 4.2.,1 试剂的质量控制
4.2.1.1 所有新购入或新配制试剂必须做质控以评估质量并记录质控结果，只有质控合格才可使用。
触酶、氧化酶每日质控；（质控菌株见各实验标准操作规程）
抗血清至少每半年用阴、阳性质控菌株做质控（质控菌株见各实验标准操作规
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程）;革兰染液每日用阴（ATCC25922）、阳（ATCC29213）性质控菌做质控;抗酸染液每周使用要求用阴（ATCC25922）、阳性（CICC偶发分枝杆菌）质控菌做质控;自制试剂：每配制一批新试剂做质控（质控菌株见各配制程序标准操作规程）。4.2.1.2 无厂商特别说明时，不同批号的试剂不可混用。
4.2.1.3 缺陷或失效试剂只能用于培训员工业务能力，否则报废处理。培训试剂应明显标记“仅供培训使用”，并与检验试剂分开放置。4.2.2 培养基的质量控制
4.2.2.1 购买的有质量保证标准的培养基实验室应保存制造商所遵循的质量保证标准，以及每批号产品完成无菌试验、生长试验、生化试验及质量控制性能的合格证明等文件； 无质量保证标准的培养基，每批号和(或)每次购买的产品应检测相应的性能，包括生长试验或与旧批号平行试验、生长抑制试验(适用时)、生化试验（适用时)等。每个批号和(或〉每次购买时，应进行外观检查并记录。4.2.2.2 自制培养基每批号产品应检测相应的性能，包括无菌试验、生长试验生长抑制试验(适用时)、生化反应(适用时)等。
4.2.2.3 外观检查合格培养基的标准:完整、琼脂附于平板底部，血平板应不透明、没有溶血情况，平板颜色好、湿润，无干裂、无污染、无浑浊或沉淀、无冻伤、无过热现象，琼脂厚度至少3mm.如发现与上述情况不符的培养基，应不予使用。
4.2.2.4 生长试验及生化反应试验质控菌株见各培养基和生化试验操作规程。4.2.3.1 鉴定卡质控 每新进一批鉴定药敏板卡应做质控，每一新生产批号鉴定板卡需用相应质控菌株做质控以检测生化反应的可靠性。材料和试剂批号必须记录并保存。对于鉴定药敏复合板还应按药敏质控方法做药敏质控。4.2.3.2 药敏卡的质控方法：分为周质控和新进药敏卡质控。周质控：每周用相应质控菌株进行质控并记录结果。
新进药敏卡质控：新购进新批号的药敏卡用相应菌株做质控，在控后方可使用。常用板卡使用的质控菌株参见相应板卡说明书。
4.2.3.3 检测仪器要进行维护、功能评估及温度监测。参见《仪器管理程序》。
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4.2.4 抗菌药物敏感试验纸片参见《药物敏感性试验标准操作程序》。4.2.5 染液质量控参见相应染色的标准操作规程。
4.2.6 标本预处理、涂片及接种(微生物标本接种岗位检验人员完成)4.2.6.1 严格按照《呼吸系统标本细菌学检验标准操作规程》预处理呼吸道标本，涂片革兰染色为下一步鉴定提供参考，正确选择培养基接种。
4.2.6.2 按照《血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程》将血培养瓶放入全自动血培养分析系统进行培养。如仪器报阳性，应立即取瓶，涂片革兰染色，同时接种血平板。如果涂片阳性，应按照《危急值报告程序》将染色结果以初步报告形式电话通知临床医生，并记录在《危急值报告登记表》上。
4.2.6.3 按照《脑脊液标本细菌学检验标准操作规程》处理脑脊液标本。如果涂片阳性，应将染色结果以初步报告形式电话通知临床医生，并记录在《工作日志》上。
4.2.6.4 按照《尿液标本细菌学检验标准操作规程》定量培养(菌落计数〉。4.2.6.5 按照《生殖道标本细菌学检验标准操作规程》正确选择培养基，处理、接种生殖道标本。阴道炎病人标本须进行革兰染色，孕妇按需进行B 群链球菌的筛查。
4.2.6.6 根据医生的要求，按照《粪便标本细菌学检验标准操作规程》正确选择培养基、处理、接种粪便标本。
4.2.6.7 按照《脓及分泌物标本细菌学检验标准操作规程》处理、接种伤口标本。4.2.6.8 核对检验单与接种平板信息，确保无误后并记录，按照检验要求将接种好的平板放置相应条件孵育箱培养。
4.2.7 菌落观察及鉴定(细菌鉴定岗位检验人员完成)细菌鉴定岗位检验人员取出充分孵育的平板按照各种标本标准操作程序，观察培养基上菌落形态，根据需要进行革兰染色及初步生化试验以判别细菌类型。根据初步检测结果，制订进一步鉴定及药敏试验方案。涂片染色、简单手工生化应同时做阴、阳性质控，所有质控结果记录在《室内质控记录表1/2》上。仪器鉴定药敏试验应在板卡质控在控状态下方可进行，所有质控结果记录在仪器软件的数椐库内，备案可查。4.2.8 严格遵守《二级生物安全管理程序》进行微生物标本的检测。4.3 分析后质量控制
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4.3.1 药敏岗位检验人员综合细菌鉴定和药敏结果形成检验报告并审核发送，微生物实验室负责人或指定人员按照相关抗菌药物敏感试验标准操作规程核对药敏结果，尤其注意异常和少见结果，例如VRE 等。4.3.2 报告病人结果之前，应确认质控在可接受范围。4.3.3 报告需经认真审核后方可审核发送至HIS系统
4.3.4 血培养阳性、脑脊液阳性的初步报告经核实后，按《危急值报告程序》报告。
4.3.5 发现传染性病原菌应严格按照《传染病报告程序》做好传报。
4.3.6 完成分析后的微生物标本，检验人员应按照按照《废弃物处理程序》处理。4.3.7 遇到来自临床或病人对检验结果的抱怨，应按照《投诉与抱怨处理程序》解决。
4.3.8 发现检验流程、文书等错误，应按照《质量改进程序》处理。
2.检验科室内质控流程图 篇二
1 材料和方法
1.1 仪器与试剂
Advance200全自动血凝分析仪。三洋MDF-382低温冰箱。PT、APTT、TT、Fib试剂及配套校准品及质控品为Instrumentation Laboratory公司产品。BD公司的真空凝血试验采血管。
1.2 质控血浆的制备
选取20～50岁, 性别不限, 无贫血、溶血、黄疸。各项检验指标正常的健康体检者50人。平静状态下顺利静脉采血于BD真空采血管中, 立即颠倒混匀5次。将50份血浆置于干净的离心管中充分混匀, 以3000r/min的速度离心10min, 取上清液加叠氮钠防腐 (使其浓度为5g/L) 。取2mL用于定值, 其余立即分装于塑料子弹头容器中, 置MDF-382低温冰箱中-35℃保存。
1.3 质控血浆的定值
先将Advance200血凝仪进行维护保养。参照试剂说明书, 严格按检验手册对PT、APTT、TT、Fib进行定标校准。取上述2mL血浆重复测定PT、APTT、TT、Fib各10次。根据所得结果, 算出各项目的平均值 (x-) 、标准差 (S) 作为预期靶值。
1.4 质控血浆的使用方法
使用前根据上述定值结果绘出质控图 (x-为基线, x-±2S作为上下失控线) 使用时, 从MDF-382冰箱中取出一支血浆, 立即放入37℃水浴中, 轻轻摇晃使其迅速融化, 然后和患者一起测定并将结果绘制在质控图上。
1.5 自制血浆的观察
(1) 效果观察:用自制血浆和配套定值质控连续测定1个月, 比较质控结果。 (2) 稳定性观察:以自制血浆质控结果的第1个月作为基准, 比较以后每月与第1个月的差异。
2 结果
2.1 自制室内质控血浆质控效果
同时用自制血浆和配套质控品进行室内质控, 并保证仪器的状态良好的情况下, 连续进行30d。对比数据发现质控效果与配套质控品无明显差异。能满足室内质控要求。
2.2 自制室内质控血浆的稳定性结果
(表1)
3 讨论
凝血检验在临床诊断和治疗中起着重要作用, 但由于某些因子易受干扰, 影响结果的准确性。因此较为完善的标准化, 规范化的管理尤为重要。而室内质量控制为凝血检测准确的重要手段。根据对自制质控血浆4个月的使用观察, 结果表明, 自制凝血试验质控血浆符合质控血浆的质控效果和质控血浆稳定性的要求, 与配套质控品具有相似的效果, 能满足室内质控的要求。
在使用过程中, 我们体会到自制血浆要注意 (1) 采集人数应尽量多, 不少于20人。要除去黄疸、贫血、脂血、溶血以及近期有服药史患者血浆, 特别是口服避孕药的正常女性血浆。 (2) 自制血浆不能反复冻融, 每支只使用1次。从冰箱中取出应迅速置于37℃水浴, 轻轻摇动使其迅速融化, 不能置于室温自然融化。
参考文献
[1]丛玉隆.积极开展血栓与止血实验室质量控制[J].中华医学检验杂志, 1998, 21 (5) :261～262.
3.检验科质控小组活动记录2012 篇三
时间：2012-1
一、质量专题：
学习2012年室内质控要求和新的室内质控上报系统的使用
二、质量现状：
2012年江苏省临床检验中心要求：
1.采用新的上报系统上报室内质控数据
2.增加了参加室内质量控制的检验专业和项目
三、质量对策：
所有质控小组成员学习了2012年江苏省临床检验中心的有关要求：室内质控上报项目，临床生化项目为27项，甲状腺功能5项，肿瘤标志物3项，传染病标志物3项，血细胞8项，尿液干化学10项，逾期不报或漏报的单位将不得参加省级质量管理奖评先活动，也不列入“江苏省检验结果互认单位”名单中。不在通报中其它专业和项目仍按原要求上报，小组成员同时学习了新的室内质控数据实验室间比系统IQC Clinet的安装，下载相关资料，质控项目、批号、仪器、检验方法、质控品等的设置，以及数据的上传、导入和发送等。
四、质量结果：
全部质控小组成员了解了省临床检验中心2012年室内质控的有关要求，特别是新增室内质控类别和项目部分内容，同时掌握了新的室内质控上报系统网络的使用方法。
检验科质量控制工作小结记录
时间：2012-12
一、质量专题：
检验科质量控制工作月总结，2013年的质控计划。质控工作存在的问题。
二、质量现状：
1.检验科部分检验项目因各种客观原因以往未按要求做室内质控
2.少数人员对室内质控的规则、要求、数据分析、质控图绘制等室
内质控知识了解不够
3.室内质控的项目有生化、免疫（乙肝、梅毒、艾滋）、血常规、血
凝
三、质量对策：
以血糖为例，所有质控小组成员对有关室内质控的知识进行了全面地系统地学习。主要内容包括：
1.质控品的保存和使用
质控品应严格按照要求及时保存在-20℃以下，冰冻状态融化使用时，应轻轻摇匀。未用完部分可4℃保存，避免反复冻融。实验过程中应当尽量减少质控血清在室温的放置时间。
2.均值和质控限的确定
根据20次质控结果对数据进行离群值检验(剔除超过3s外的数据)，计算出平均数和标准差，作为暂定均值和暂定标准差，以此暂定值作为下一个月室内质控图的均值和标准差进行室内质控。
3.室内质控图的绘制
主要采用Levey-Jennings质控图。质控规则主要有： 13s:1个质控点落在士3s之外；R4s：连续2个质控点相差超出4s范围；41s:连续4个质控点落在同一侧士1s之外；7x靶：连续7个质控点落在均值之一侧。
4.失控情况处理及原因分析
室内质控出控时，应填写失控报告单，由专业主管做出是否发出与测定质控品相关的批患者标本报告并分析及登记失控原因，要及时查找原因予以纠正。
5.室内质控数据的管理
室内质控数据的周期性评价：每月月末，都要对当月室内质控数据的平均数、标准差、变异系数及累积平均数、标准差、变异系数进行评价，查看与以往是否有明显不同。
四、质量结果：
4.医院质控工作流程（范文） 篇四
一、质控各种医疗文书
（一）出院病历
1、一般情况下：住院病历经过自控、科控，病人出院后及时归档。
2、特殊情况病人临时紧急出院，来不及书写出院病历者经治医师及时从档案室借回补记，及时归档。
3、所有出院病历经过自控、科控归档后，每月10日由质控组长到病案室将上月出院病历借回再次自控和科控。每月20日归档，质控科定期组织全院质控组长进行评比发现问题及时反馈科室整改。将抽查情况以《质控简报》形式通报全院和上报院领导。
（二）在架住院病历
经治医师及时、准确、完整地书写病历，上级医师及时检查病历，质量质控组定期抽查，发现问题及时反馈科室整改。
（三）急、门诊病历
接诊医师及时完善病历，上级医师及时检查病历质量，质控组定期抽查，发现问题及时反馈科室整改。
（四）门诊处方
医师认真、准确、完整、及时的书写处方，质控组定期抽查，发现问题及时反馈科室整改。
（五）医技申请单
医师认真、准确、完整地书写申请单，质控组定期抽查，发现问题及时反馈科室整改。
5.玉米种子室内检验学习心得 篇五
一、扦样分样技术
1、袋装种子扦样频率
a 1-4 个容器，每个容器扦取3个初次样品；
b 5-8 个容器，每个容器扦取2个初次样品；
c 9-15 个容器，每个容器扦取1个初次样品；
d 16-30 个容器，种子批中扦取15个初次样品；
e 31-59 个容器，种子批中扦取20个初次样品；
f 60或更多容器，种子批中扦取30个初次样品。
以前扦样有时没有严格按照这个标准来取，以后取样要严格按照标准执行。2.制备送验样品
（1）需磨碎的种类100g，不需磨碎的为50g；
（2）真实性样品100g。3.机械分样法
混合2-3次，对分递减分至所需重量，每类样品要独立分取。
4.如果发现种子异常，要进行异质性检测判定。
二、抓关键技术环节，控制影响因素
1.检验员（人）（1）熟悉有关的法律、法规规定
对种子法还不熟悉，种子检验理论和技术还有待加强和提高。
（2）具有良好的职业道德
爱岗敬业，诚实守信，客观公正，遵纪守法等。2.种子生活力和种子活力
种子生活力：种子发芽的潜在能力或种胚具有的生命力。反映的是种子发芽率和休眠种子百分率的总合。
种子活力是指在广泛的环境条件下，决定可接受发芽率的种子批的活性和性能那些特性的综合表现。与种子田间出苗质量密切相关。3.发芽结果计算与表示
当重复正常幼苗百分率都在容许差距范围内，则取其平均数；当重复间超过容许差距时，要重新试验。4.发芽试验数据修约
a)先将正常幼苗百分率修约至最接近的整数，0.5进位，并与其余部分（不正常幼苗、硬实、新鲜种子和死种子）百分率整数部分的数值相加。如果总和为100，则修约程序结束。b)执行a)程序后的总和不是100，则在不正常幼苗、硬实、新鲜种子和死种子百分率中找出小数部分最大数值者，将此修约至整数，并作为最终结果。并与其余部分百分率整数部分的数值相加。如果其总和为100，则修约程序结束。c）执行b)程序后的总和不是100，继续重复执行b)程序，直至获得总和为100。
d)执行b)和c)程序时，凡小数部分均相同的，按照下列顺序优先进行修约：不正常幼苗、硬实、新鲜种子和死种子。5.发芽试验重复间和重复试验间超差的处理：
（1）假如四次重复间最高和最低值的差距在容许误差范围内，该发芽试验的结果是可靠的。将各重复的平均数修约成最接近的整数，查容许误差表，如重复间的最大差异小于规定的容许误差，则认为结果是可信的。容许误差至少适用于正常幼苗种类。
（2）当重复间的差距超过表中最大容许误差时，应采用同样的方法重新试验。如果第二次结果与第一次结果相符合，即其差异不超过表中规定的容许误差，则填报两次试验的平均数。
（3）如果第二次结果与第一次结果不相符，即其差异超过表中所示容许误差，则采用同法第三次试验，如果三次试验的结果相符合，即其差异不超规定容许误差，则填报三次试验结果的平均数。如果三次试验结果不相符，即其差异超过规定容许误差，则三次试验结果进行两两比较，取不超过容许误差的一对结果的平均值作为最后结果。若第三次试验仍得不到符合要求的结果，则应考虑人员操作、仪器设备或其他反面原因。
三、实验室质量管理
1、质量法规
对《产品质量法》、《标准化法》、《种子法》、《农作物种子标签和使用说明管理办法》等的学习有待进一步学习。
2、质量与检验
（1）从过程管理的角度来看，质量绝对不是检验出来的，预防产生质量，检验不能产生质量；
（2）合格产品不是检验出来的，而是干出来的；
（3）检验可以发现不合格产品。
3、种子检验室质量管理
应建立相适应的有效的管理体系，形成文件，将抽样到结果报告各环节检验活动标准化、制度化。管理体系文件一般包括四个层次：《质量手册》、《程序文件》、《作业指导书》、《记录格式》。
4、试验要求
（1）若发现试验结果异常，试验人员不要轻易下结论，应认真查记录、查计算、查操作、查试剂、查方法、查样品，找出原因后有针对性地进行复验。
（2）要认真及时做好原始记录，要求所有的实验内容都要有原始记录，不得漏记。
5、记录控制要求
（1）试验数据应用中性笔或钢笔在实验同时记录在原始记载表上，不应事后抄录，也不应漏记。试验中出现的异常情况也应及时记录。书写要求工整、清楚、真实、准确、完整。不准用铅笔记录，不得随意涂改、乱写、乱画和折叠。当发生笔误时，用“－”注销，并在“－”上方由本人更正，加盖改正章。
（2）试验原始记录要按年编目成册，做好标识，归档保管。（每年做一次整理归档）。
6、检测数据修约规则
（1）称重规定：1g以下保留四位小数，1～10g保留三位小数，10～100g保留二位小数，100～1 000g保留一位小数。（2）在净度分析中，各成分之和是99．9％或100．1％，从最大值(通常是净种子成分)增减0．1％。（3）数字修约规则：“四舍六入五成双”法则。（4）检测室报出数值最右的非零数字为5时，应在数值后面加“(+)”或“(-)”或不加符号，以分别表明已进行过舍进或未舍未进。
四、净度分析水分测定
1、净种子
未成熟的、瘦小的、皱缩的、带病的或发过芽的种子单位都应作为净种子。
2、试验样品的分取
试验样品至少含有2500个种子单位的重量，玉米种子不少于900克。
3、净度分析称重计算
（1）如果增失超过原试样重量的5%，必须重做。（2）如增失小于原试样重量的5%，则计算各组分百分率。各组分百分率的计算应以分析后各种组分的重量之和为分母，而不用试样原来的重量。
（3）若分析的是全试样，各组分重量百分率应计算到一位小数。若分析的是半试样，各组分重量百分率应计算到二位小数。
4、净度分析容许差距
实际差距容许范围内，取其平均值。如超过，再分析一份试样，若分析后的最高值和最低值差异没有大于容许误差2倍时，填报三者的平均值。
4、净度分析容许差距
若一种组分的结果为零，须在适当空格内用“-0.0-”表 示,若其一组分少于0.05%，则填报“微量”。
五、玉米品种鉴定技术-SSR标记法
1、SSR技术特点
•多态性丰富，分辨能力强，每个位点最多可含有十多个等位基因； •较高重复性，针对于每个位点设计特异性引物，扩增均为特异性目的片段扩增；
•前期研发基础强，有大量已知染色体位置的共享位点； •为共显性标记，能准确区分不同等位变异； •为中性变异标记；
•数据形式为具体片段长度，能够实现数据标准化； •技术非常成熟，检测方法简便易行； •SSR技术易于推广，不受专利限制。
2、DNA提取的原则
（1）保证DNA结构的完整性；
（2）将蛋白质、多糖、多酚等杂质降低到最低程度；（3）排除有机溶剂和金属离子的污染；（4）纯化后不应存在对酶有抑制作用的物质；（5）排除其他核酸分子的污染。
3、快速碱煮法
（1）碱：在碱性环境下裂解细胞，使DNA变性，从而达到提取的目的。碱能够使DNA变性，且不会复性，并缠结成网状物质析出最终加入TE溶液溶解。
（2）煮：煮沸的方式能够代替液氮冷冻法，抑制DNA酶的活性，防止煮沸还能够代替研磨，破坏细胞壁和细胞膜，释放出DNA。
4、核酸提取注意事项 •最好使用新鲜材料，低温保存的样品材料不要反复冻融 •材料应适量，过多会影响裂解，导致DNA量少，纯度低
5、DNA提取量少（1）主要原因
实验材料不佳或量少；破壁或裂解不充分；沉淀不完全；洗涤时DNA丢失（2）解决方法
尽量选用新鲜（幼嫩）的组织；样品预处理充分；适当延长高温裂解时间；用枪头将洗涤液吸出，勿倾倒；低温沉淀，延长沉淀时间，加沉淀辅助物
6、PCR扩增
（1）PCR，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA体外合成放大技术，能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。
（2）一是被扩增的DNA所需量极小，理论上讲一个分子就可以用于扩增了；二是扩增效率高，几个小时就扩增1000万倍以上。
7、PCR反应体系及循环条件
PCR反应是Taq酶以dNTP为原料，以一对寡核苷酸引物为起点，以被扩增的DNA序列为模板在PCR热循环仪中进行的扩增反应。标准的PCR过程分为三步：1.DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA。2.退火（25℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。3.延伸（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′→3 ′端延伸，合成与模板互补的DNA链。
每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量即增加一倍。
8、模板DNA对PCR反应的影响
（1）模板纯度：蛋白、酚类、多糖等杂质会抑制PCR反应；（2）模板完整性：模板DNA降解会导致PCR无扩增产物；（3）模板浓度：实验表明：在一定范围内PCR的产量随模板的浓度的升高而显著升高。模板的量与循环数要匹配,如果循环数一定,模板的量太少,会出现阴性结果或条带很弱;模板的量太多,则会出现条带弥散,模糊不清。
（4）PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度（5）PCR反应体系中引物的浓度一般为0.1~0.5umol/L，在此范围内，PCR的产物量基本相同。
（6）若引物量过低会导致PCR产物量降低，而如果引物量过高，则会引起碱基的错配和非特异性扩增、生成引物二聚体，从而使目的DNA片断的扩增量下降。
（7）通常引物量应当10倍于靶序列。此外，引物的Tm值与退火温度相关，故引物的Tm值最好在55～80℃的范围。（8）高浓度dNTP易产生错误掺入，过高则可能不扩增；但浓度过低，将降低反应产物的产量。
（9）PCR中常用终浓度为50-400μM的dNTP。四种脱氧三磷酸核苷酸的浓度应相同，如果其中任何一种的浓度明显不同于其它几种时（偏高或偏低），就会诱发聚合酶的错误掺入作用，降低合成速度，过早终止延伸反应。
（10）此外，dNTP能与Mg2+结合，使游离的Mg2+浓度降低。因此，dNTP的浓度直接影响到反应中起重要作用的Mg2+浓度。
（11）耐热DNA聚合酶的活性依赖于反应体系中的二价阳离子。
（12）反应体系中Mg2＋浓度过低，会显著降低酶的活性；而Mg2＋浓度过高时，又使酶催化非特异性扩增增强。（13）Mg2＋浓度还会影响引物的退火、模板与PCR产物解链的温度，从而影响扩增片度的产率。
（14）由于在PCR反应体系中的模板DNA、dNTP、引物中的磷酸基团均可与Mg2＋结合从而降低反应体系中的Mg2＋的浓度，而耐热DNA聚合酶需要的是游离的Mg2＋，因此，一般Mg2＋的加入量应比dNTP的总浓度高0.2～2.5mmol/L。（15）在不同的反应体系中模板DNA、引物以及dNTP的量各不相同，因此应根据具体的情况来确定特定PCR反应体系中Mg2＋的最适浓度。
9、PCR循环条件
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至95℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备； ②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至60℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；
③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。
在最后一个循环后，反应在72℃维持5-15分钟。使引物延伸完全，并使单链产物退火成双链。
10、无扩增产物（1）原因
模板含有抑制物，模板含量低；该Buffer对样品不合适；引物设计不当或者引物发生降解；反应条件不适，退火温度太高，延伸时间太短。（2）对策
纯化模板；更换Buffer或者调整浓度；重新设.引物；降低退火温度，延长延伸时间。
11、PAGE电泳检测 聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是由丙烯酰胺（简称Acr）单体和少量交联剂甲叉双丙烯酰胺（简称Bis）通过化学催化剂AP（过硫酸铵）和加速剂TEMED（四甲基乙二胺）形成的三维空间的高聚物。聚合后的聚丙烯酰胺凝胶形成网状结构。网格孔径的平均直径决定于丙烯酰胺和双功能交联剂的浓度。聚丙烯酰胺凝胶具有浓缩效应、电荷效应、分子筛效应。因此适用于不同相对分子质量物质的分离，且分离效果好。
12、注意事项
（1）在配制胶时，过硫酸铵最好现配现用，不要先配AP（过硫酸铵）溶液，因为AP很容易变质。而且过硫酸铵固体时间过久也会失效的。
（2）电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液。
（3）丙烯酰胺为神经剧毒和可疑致癌物，实验过程中应穿工作衣，戴手套并加倍小心。
13、SSR技术在品种真实性鉴定中的应用（1）成对比较
a)与来自农业部品种权保护的标准样品比较； b)与已审定品种标准样品比较； c)与模仿对象进行比较。（2）数据库比较
a)在品种权保护中，辅助筛查申请品种的最近似品种，代替原来由申请者自行提供。
b)在国家和各省区试中，鉴定区试品种是否与已知品种雷同，并作为品种能否推荐审定的必要条件。
c)在种子市场打假中，鉴定市场抽检的品种仿冒了什么已知品种。
14、纯度鉴定流程（1）引物筛选
利用至少10个核心引物进行筛选和评估（杂交种取20粒），一方面确定该纯度问题是以自交苗、回交苗、其它类型杂株还是遗传不稳定造成的，一方面挑选出合适的双亲互补型引物进行下一步鉴定。（2）样品鉴定
从待测样品中随机取样至少100粒种子，利用确定下的若干引物进行进一步鉴定，并利用这些引物综合判定待测杂交种的纯度。
如果是自交苗造成的，采用其中1个互补型引物即可； 如果是回交苗造成的，则应采用2-4个能够综合判定出回交苗的互补型引物；
如果是其它杂株，则根据实际情况选择1-2个能够将杂株鉴定出来的互补型引物； 如果是遗传不稳定，则尽量剔除一致性极差的位点，对一致性表现较相近的引物中选择1-2个进行鉴定。（3）结果表示