光谱法研究加替沙星与牛血清白蛋白的相互作用

光谱法研究加替沙星与牛血清白蛋白的相互作用（精选2篇）

1.光谱法研究加替沙星与牛血清白蛋白的相互作用 篇一

荧光光谱法研究吲哚美辛与牛血清白蛋白结合作用的热力学特征

在模拟动物体生理条件下,用荧光猝灭光谱、同步荧光光谱和紫外可见吸收光谱,研究了不同温度下吲哚美辛(IDT)与牛血清白蛋白(BSA)结合作用的光谱行为.结果表明,IDT对BSA有较强的`荧光猝灭作用.用Stern-Volmer方程、Lineweaver-Burk双倒数方程和热力学方程等处理实验数据,得到了在25℃、31℃和38℃下,结合反应的生成常数KLB平均值为2.081×105L・mol-1、热力学参数平均值ΔHθ、ΔGθ和ΔSθ分别为-10.43 kJ・mol-1、-31.13 kJ・mol-1和67.94 J・K-1;发现IDT与BSA结合可形成具有一定结构的复合物,其荧光猝灭作用更符合静态猝灭作用特征,作用力可能主要是静电力;同时探讨了IDT对BSA构象的影响.为研究IDT的毒理作用、生态环境效应和生物学效应等提供了重要信息.

作 者：作者单位：刊 名：化学与生物工程 ISTIC英文刊名：CHEMISTRY & BIOENGINEERING年，卷(期)：26(9)分类号：O657.34关键词：吲哚美辛 牛血清白蛋白 荧光光谱法 猝灭作用 热力学参数

2.光谱法研究加替沙星与牛血清白蛋白的相互作用 篇二

关键词：扑尔敏,牛血清白蛋白,相互作用,循环伏安法

扑尔敏(Chlorphenamine Maleate,简称CPM),又称马来酸氯苯那敏,属于丙胺类H1受体拮抗剂。临床主要用于过敏性鼻炎,皮肤粘膜的过敏,荨麻疹,接触性皮炎以及药物和食物引起的过敏性疾病[1]等。研究药物与蛋白质之间的相互作用,有助于认识药物的最佳治疗窗口及不良反应,对于认识药物的作用机制及对药物进行安全评估有着重要意义[2]。

药物与蛋白质的相互作用的研究方法常用的有荧光光谱法、紫外光谱法等光谱分析法[3,4,5],电化学分析法[6,7,8]等,马来酸氯苯那敏与牛血清白蛋白的相互作用的光谱法研究已有报道[9],但是未见报道采用电化学方法来研究两者的相互作用。本文利用自制的碳糊电极,采用循环伏安法研究了扑尔敏与牛血清白蛋白的相互作用,尝试从分子水平研究生物大分子与药物小分子相互作用的作用机制。

1 实验

1.1 仪器与试剂

LK-2005型电化学工作站,天津市兰力科化学电子高科技有限公司;雷磁PHS-25型数显p H计,上海仪电科学仪器股份有限公司。电极系统:自制碳糊电极为工作电极,铂丝为对电极,饱和甘汞电极为参比电极。

牛血清白蛋白(BSA),广州齐云生物技术有限公司;扑尔敏,中国药品生物制品检定所。p H 7.40磷酸盐缓冲溶液;1.5×10-6mol·L-1牛血清白蛋白标准储备溶液,4℃保存备用;2.6×10-4mol·L-1扑尔敏标准储备溶液,4℃保存备用;使用时用磷酸盐缓冲液稀释。其他试剂均为分析纯,实验用水为超纯水。

1.2 实验方法

碳糊电极的制备:将石墨粉、液体石蜡按照2∶1的比例搅拌混合均匀后,填入内径为4 mm的玻璃管中,压紧,插入铜丝作导线,在光滑的纸上抛光,备用。

在p H为7.40的混合磷酸盐缓冲溶液中,以碳糊电极为工作电极,加入适量的扑尔敏溶液和不同浓度的牛血清白蛋白溶液,采用三电极系统进行循环伏安实验。

2 结果与讨论

2.1 扑尔敏与牛血清白蛋白相互作用的循环伏安图

扑尔敏与牛血清白蛋白相互作用的循环伏安图如图1所示。

CPM在自制的碳糊电极上于0.953 V产生一个氧化峰,如图2a所示。加入BSA后,氧化峰电流降低,且随着BSA浓度的增大,峰电流降低得越明显(见图2b,图2c),说明CPM与BSA发生了相互作用。而在研究的整个电位范围内,BSA在碳糊电极上没有氧化峰,CPM与BSA发生相互作用后,峰电流下降,说明CPM与BSA之间形成了非电化学活性的超分子化合物。

2.2 实验条件的选择

2.2.1 电极组成的选择

分别试验了液体石蜡、液体石蜡和甘油为粘合剂与石墨粉制备碳糊电极,发现用液体石蜡为粘合剂制备的碳糊电极效果较好。当液体石蜡和石墨粉的比例为2∶1时,峰高最高且稳定,因此碳糊电极的组成为石墨粉和液体石蜡以2∶1的比例混合。

2.2.2 底液p H的影响

考察p H对扑尔敏氧化峰的影响。当溶液p H小于4.50时,扑尔敏没有氧化峰,当p H在4.50~10.00时,扑尔敏出现一个氧化峰,在p H大于10.00时,氧化峰又消失。当p H在6.00~8.00时,CPM的峰电位与p H呈良好的线性关系,循环伏安图如图2所示。

峰电位与p H的线性回归方程为:E=1.5078-0.0769p H,相关系数为r=0.9979。由于药物与蛋白质的作用一般在生理p H条件下进行,因此选择CPM与BSA作用的底液为p H值为7.40的混合磷酸盐。

2.2.3 反应时间对体系的影响

扑尔敏与牛血清白蛋白相互作用6 min后,峰电流趋于稳定,因此选择作用时间为6 min。

2.3 测定BSA的工作曲线和检测限

在最佳实验条件下,CPM与BSA作用后的峰电流降低值与BSA的浓度呈线性关系,由此可测定BSA的含量。当BSA浓度在7.5×10-9~7.5×10-8mol/L,工作曲线为:I(μA)=0.3682-0.0606c(nmol/L),相关系数为r=0.9968。其中I为CPM与BSA-CPM峰电流的差值,c为BSA的浓度。检出下限为5.0×10-9mol/L。

2.4 BSA-CPM结合位点数和结合常数

假设BSA和CPM只形成一种简单的化合物BSA-n CPM,则有BSA+n CPM=BSA-n CPM,结合常数为:

根据BSA与CPM相互作用前后峰电流的变化,由文献[10,11][10,11]可求出结合位点数n。即:lg[ΔI/(ΔImax-ΔI)]=lg K+nlg[CPM],其中ΔI为相互作用前后峰电流的变化值,ΔImax为相互作用前后峰电流的最大变化值,作lg[ΔI/(ΔImax-ΔI)]-lg[CPM]的变化曲线,如图3所示。

所得校正方程为lg[ΔI/(ΔImax-ΔI)]=8.09+1.69lg[CPM],即n=1.69,K=1.2×108L/mol。

3 结论