中医怎么治疗肺结核(精选7篇)
1.中医怎么治疗肺结核 篇一
肺结核的中医辨证治疗
在此选择字体:大 中 小来源:中医看病网 作者:健康专家 时间:2009-11-28 点击:155中医博大精神,对于肺结核的治疗也有其独特的方法。今天,我们就和大家一起了解下有关肺结核的中医治疗。肺结核是由结核杆菌引起的慢性肺部感染,咳嗽、胸痛、咯血、潮热、盗汗、消瘦为其主要临床特征。近年来其发病率
中医博大精神,对于肺结核的治疗也有其独特的方法。今天,我们就和大家一起了解下有关肺结核的中医治疗。
肺结核是由结核杆菌引起的慢性肺部感染,咳嗽、胸痛、咯血、潮热、盗汗、消瘦为其主要临床特征。近年来其发病率明显上升,其主要原因是在人体抵抗力降低的情况下,因感染结核杆菌而发病。虽然感染后并非立即发病,但一旦感染,终生有发病危险。
本病属中医学“肺痨”、“痨瘵”、“肺疳”等范畴。先天禀赋不强、正气亏耗为其内因,外受“痨虫”所染,邪乘虚而入,而致发病。本病一般分4型治疗:
1.肺阴亏损型
症见干咳,声音嘶哑,痰中带血丝,胸部隐痛,骨蒸潮热与手足心热,两颧发红午后更著,盗汗,形体消瘦,口干喜冷饮,舌红脉细数。治宜养阴润肺。
方药:沙参12g,麦冬12g,天冬10g,生地18g,百部15g,白及20g,山药30g,云苓15g,川贝12g,菊花10g,阿胶15g(烊化),三七3g(冲服)。
2.阴虚火旺型
症见咳嗽气急,痰粘而少,颧红潮热,盗汗少寐,胸疼咯血,遗精,月经不调,消瘦乏力,舌绛苔剥,脉沉细数。治宜滋阴降火。
方药:龟板10g,阿胶12g(烊化),冬虫夏草12g,胡黄连10g,银柴胡10g,百合30g,生地20g,麦冬12g,桔梗12g,贝母12g,当归12g,青蒿15g,知母12g。
3.气阴耗伤型
症见面色不华,神疲体软,咳语声微,纳呆便溏,痰多清稀,畏风自汗与颧红盗汗并见,舌淡苔白有齿痕,脉沉细而少力。治宜益肺健脾。
方药:太子参15g,云苓15g,白术15g,山药30g,桔梗12g,百合30g,大枣10g,黄芪20g,莲子15g,当归12g,白及20g,功劳叶12g。
4.阴阳两虚型
症见少气无力,消瘦面黄,声音嘶哑,潮热盗汗,骨蒸痨热,泄溏便急,痰白沫状或血痰,心悸气短,寡言少欲,纳呆,自汗,滑精,闭经,苔黄燥,脉微细或虚大无力。治宜滋阴补阳。
方药:太子参15g,白术15g,山药30g,茯苓20g,黄芪30g,紫河车15g,当归15g,鹿角胶10g,龟板12g,白芍12g,白及30g,功劳叶12g。
以上就是肺结核的中医治疗方法,希望大家能有所帮助。
2.中医怎么治疗肺结核 篇二
面对这道难题, 面对结核病的死灰复燃, 治疗肺结核究竟有没有其他路径可走?
广西来宾市迁江镇的民间医生吴惠才, 利用祖传中草药秘方, 经过长期的临床实践证明, 传统中医才是肺结核真正的“克星”。
传统的中草药疗法, 不仅无毒副作用, 无耐药性, 关键是疗效高和效程短。据吴惠才先生介绍, 在他的行医生涯中, 大多数患者先是经过西药久治不愈后, 才转投中医。
例如:广西来宾市迁江镇那记村李某, 男, 35岁, 98年患肺结核。自述咳嗽近一年, 早晚咳嗽, 晚间睡前咳嗽特别严重, 四邻皆闻之。曾服多种中西药无效, 开始服用我的两剂中草药, 咳嗽立止, 继续服用五剂其病告愈。随访至今已有十四年, 无复发。
再如:广西来宾市迁江镇麦圩村卢某, 男, 75岁。2008年在来宾市疾病控制中心确诊患肺结核。在服西药抗结核药的治疗过程中出现毒副作用, 因而拒绝服用西药治疗, 也是他与我有缘, 故为之诊治。其自述全身软困无力, 不思饮食, 有些咳, 但不严重, 整日卧床, 有大限将至之势, 亦是其命不该绝, 服完我的五剂中草药后, 其病治愈。随访至今四年多不见复发。
再如:广西来宾市迁江镇木帆社邓某, 男, 40岁左右, 患肺结核。其自述一年多来经常久咳不愈, 且痰中带有血丝, 多种中西药都服过, 就是不见病情好转。经服我的第一剂中草药后咳嗽立止, 且痰中不再见有血丝。继续服用两剂其病告愈。随访至今三年多未见复发。
又再如:广西来宾市迁江镇大里乡兴仁村唐某, 男, 55岁, 患有陈旧性肺结核和多种并发症。2013年3月9日22时41分其所在的来宾市人民医院对其家属下达病危通知书, 其家属视其病情严重 (根据当地习俗, 患者不能在医院死, 如在医院死其魂魄就不能进家) , 要求出院。据患者家属讲述, 患者出院时躺在担架插着氧气, 生命垂危。9号出院, 10号跟我要第一剂药, 服完后患者发烧消退。服完第二剂药, 能从床上坐起。服完第三剂药, 便能在院子里走动。从出院到2013年4月19日复查, 共服用我的中草药19剂, 其生命体征, 恢复平稳正常。
以上实例说明了民间中草药在治疗肺结核方面明显优于西药。吴惠才说, 在我国的两广、云南、贵州和台湾以及东南亚的一些地区, 都有丰富的野生药物资源, 如能引起社会的更多关注, 结合现代科技进一步开发, 使之利益广大的肺结核患者。将会产生很大的社会效益和经济效益, 成为我国具有自主知识产权治疗肺结核的特效药。填补“自利福平问世以来的四十余年间抗结核药的开发与研制工作步履维艰, 真正意义的新药, 至今一个也没有上市”的空白, 有着重要的意义。
2013年3月24日是第28个防治结核病日, 其中的主题是消除结核病的危害, 结核病的肆虐已经危害了整个人类的生命健康。吴惠才作为一个广西民间的普通医生, 却为了结核病的治疗苦心孤诣、潜心研究, 在祖传秘方的基础上开辟出了一条更可靠, 更有前途的中草药疗法, 为广大患者, 为人类健康, 也为实现世界卫生组织提出的在2050年基本消除结核病的目标做出了自己的一点贡献。“利他在先, 利己在后”, 这是吴惠才先生的人生格言。患者的病痛是他执着前行的动力, 推广中草药疗法, 消灭结核病是他努力奋斗的目标, 也是他的梦想。我们有理由相信, 他在中草药治疗结核病的道路上, 越走越远, 消灭结核病的梦想也终会实现。
3.中医怎样治疗耐药性肺结核 篇三
肺结核患者只要得到及时、准确的治疗是完全可以被治愈的。但在临床上,有很多患者的肺结核在经历了病情好转——恶化——好转——恶化这样长期不愈的过程之后,最终成为耐药性肺结核。这些肺结核变成耐药性肺结核的根本原因在于这些患者接受的抗结核治疗不规范。而导致治疗不规范的主要因素有:①治疗方案不合理。很多患者在被确诊患有肺结核后没有到结核病专业医院接受治疗,而是到未经标准化培训的小型医疗机构或小型诊所就诊;或者接诊医生对肺结核的治疗知识相对匮乏而采用了错误的治疗方案,导致用药剂量不足或是服药的方法不当。②患者自身有失误。肺结核患者在进行治疗的过程中,经常会出现肝肾损害等毒副反应。当这类情况发生时,一些患者不但不采取相应的治疗措施,反而自行中断治疗,待病情恶化之后再去就诊,如此循环往复地间断治疗,使得结核病菌对抗结核药逐渐产生了耐受性,从而使其所患的普通肺结核演变为耐药性肺结核。
耐药性肺结核的病程较长,病情较重,耐药率高,并发症多,疗效较差,预后不佳。这会给患者及其家人带来巨大的精神压力和经济压力。此病的特点主要有:①诊断复杂。普通肺结核病仅需做3个痰标本即可确诊,一般只需要2~3天的时间。而诊断耐药性肺结核,在做好痰涂片标本后还要做痰培养,之后还要做药物敏感试验,一般需要2~3个月才可确诊。②治疗周期长。普通肺结核的治疗周期为6个月。而耐药性肺结核的治疗周期长达18个月~24个月,甚至需要36个月以上的时间。③治愈率低。目前,普通肺结核的治愈率在90%以上。而耐药性肺结核的治愈率却不足50%。④治疗费用高。据了解,在我国一位普通肺结核病人6个月的治疗费用为150元左右,而一位耐药性肺结核病人24个月的治疗费用接近2万元。
近年来,我国耐药性肺结核的发病率有逐年增加的趋势,其中老年患者尤多。由于缺乏特效药和敏感药,耐药性肺结核的治疗极其困难。面对如此棘手而又不能回避的治疗问题,很多的此病患者选择了用中医中药来治疗。中医中药治疗耐药性肺结核的优势明显,主要表现在以下几个方面:①毒副作用低。耐药性肺结核患者在服用抗生素类的抗结核药物后会出现不同程度的肝肾损害,而中药对人体的毒副作用较低。②可对症治疗。长期表现为阴虚盗汗、干咳不止、痰中带血的肺结核患者,或是食欲不佳、夜卧不安、便秘难解的气血亏虚型的肺结核患者,均可以通过中医辨证施治的方法进行对症治疗。③可预防发病和复发。中医认为,人体在感染结核病菌以后,并非立即发病,而是在机体的抵抗力降低时才会发病。同理,有肺结核患病史的人,在免疫力低下时,其体内残留的结核病菌也容易“死灰复燃”,这是导致肺结核复发的重要原因。因此,对于身体亏虚者,或处于恢复期的此病患者,宜选用中药进行调理,以提高其机体的免疫力,预防其发病和复发。
中医认为,耐药性肺结核属于“阴阳两虚”型的肺痨范畴。此病患者的主要临床症状为消瘦、下午潮热、全身乏力、咯痰或痰中带血。近年来,中药药理研究证实,有很多中药具有较强的抑制结核杆菌的作用。目前,治疗耐药性肺结核的验方已广泛地应用于临床。笔者常用的一个治疗耐药性肺结核的良方是:百部、黄芩、白芨、白芍、虫草、射干、夏枯草、黄连、黄柏、地榆各15克,鱼腥草、地骨皮、白果、银花、连翘、款冬花、石榴皮各10克。将上述药物用水煎煮,去渣取汁,可每日服一剂,分两次服下。
在治疗耐药性肺结核的中成药中,“回生灵”系列药物因其疗效显著而受到肺结核患者的好评。“回生灵”系列的药物包括润肺化核膏、百地滋阴丸、参芪益肺丸这三种中成药。润肺化核膏具有养血育阴、解毒化瘀的功效,适合气血凝结、邪热壅聚、经络阻滞的肺结核患者使用。百地滋阴丸具有滋补肺肾、凉血除蒸的功效,适合肺肾不足、气阴两伤的肺结核患者使用。参芪益肺丸具有健脾益肺、化痰止咳的功效,适合肺脾同病、痰湿稽留的肺结核患者使用。
临床上还可用针灸疗法和梅花针疗法辅助治疗肺结核。这两种疗法均具有增强人体免疫力,加快人体新陈代谢的功效,对治疗耐药性肺结核具有较好的辅助效果。用针灸疗法治疗肺结 核时,可选择的主要穴位有:大椎、肺腧、膏肓、心腧、足三里、三阴交,可每周针灸2次,连续针灸3个月为一个疗程。用梅花针疗法治疗肺结核时,可选择在背部脊柱两旁的背腧穴进行叩刺,可每隔两天叩刺一次,每次叩刺80~100下,以局部皮肤红润为宜。
此外,耐药性肺结核患者还应重视日常的养生保健,以预防此病的发生和复发。耐药性肺结核患者在日常生活中应做到以下几点:①常呼吸新鲜的空气。可每日早晚开窗通风,保持室内空气的清新,或经常去树林和公园散步,多呼吸新鲜空气。②保持乐观的心态。中医认为,忧悲伤肺,此病患者宜保持乐观的心态,切忌忧虑悲伤,勿生闲气。③合理地安排饮食。肺结核患者在饮食方面,应多摄取富含蛋白质和维生素的食物。高蛋白、高维生素的食物主要有鱼类、蛋类、瘦肉、豆制品、菠菜、油菜、白菜、萝卜、木耳、蘑菇、梨、枇杷、桔子等。④睡眠要充足。此病患者应养成早睡早起、中午睡午觉的好习惯,生活宜规律,并戒烟忌酒。⑤适当地进行运动。肺结核患者宜适当地进行一些户外运动,比如练习太极拳、气功、五禽戏、八段锦等。
小贴士——
哪些患者的肺结核
易转变为耐药性肺结核
一、合并糖尿病、肝病、癫痫、消化性溃疡等疾病的肺结核患者。
二、伴有咯血、气胸、呼吸衰竭、心脏衰竭等症状的肺结核患者。
三、年龄较大和免疫力低下的肺结核患者。
四、对此病的认识不足,治疗不规律的肺结核患者。
4.中医怎么治疗耳聋 篇四
在外耳道前有一软骨凸起称为耳屏,如把耳屏比作小山,在耳屏前对应着两个山脚和山顶,自上而下于一条直线上排列着三个穴位,分别叫做耳门、听宫、听会。我们张嘴时三个穴位都会出现凹陷。按揉它们都有治疗耳鸣耳聋的作用。老年人每天可以用手指按揉它们,也可用食指或中指指腹上下搓擦,以发热为最佳的按揉程度。
指摩耳轮:
中医有介绍,“以手摩耳轮,不拘遍数,所谓修其城廓,以补肾气,以防聋聩”。双手握空拳,以拇、食指沿耳轮上下来回作推摩直至发红发热。再用两拇指、食指、中指屈蜷成钳子形状,夹捏外耳道做向前、后、左、右的提扯动作,整套动作做6次。
鸣天鼓:
两手掌心按住耳孔,食指放于中指上作弹击耳后枕部约20次。
振耳:
接上法,手掌置于耳上,一紧一松挤压耳部。先慢而有力,再作快速振颤。
黄蜂入洞:
将两食指或中指插入耳孔,指腹向前,转动3次再骤然抽出,每次做3遍。
点穴:
按揉后枕部酸痛点及双侧风池穴,要有酸胀感。
猿猴摘果:
用手经头上提捏对侧耳尖各14次。
全耳腹背按摩:
5.中医怎么治疗痛经 篇五
山楂30克,向日葵籽15克,红糖30克。先将山楂、向日葵籽一齐放在锅内炒,以葵花籽炒香熟为度。再加水,熬成浓汁后,将红糖放入熬化即成。每次于经前1-2天,连服2-3剂,正痛时亦可服用。
本方适用于血瘀为主的痛经。
[方二]
荔枝核、香附、黄酒各30克。将荔枝核、香附研成细末,混合成装入瓷瓶密封保存,每个痛经发生之前一天开始服用,每次服6克,以黄酒适量调服,1日3次。
本方适用于以气滞为主的实证痛经。
[方三]
丹参、延胡索各30克,牛膝、红花、郁金各15克,白酒半公斤。将生丹参、延胡索、牛膝、红花、郁金倒人瓶中,用白酒浸泡加盖,密封半个月。每隔3天,用力摇动药酒瓶1次,每次约摇3分钟。行经前两天开始饮服,每日3次,每次1-2匙,至经血干净时停饮。连服4个经期为I疗程。
本方适用于气滞血瘀之痛经。
[方四]
阿胶、杜仲各15克,陈艾10克,净子鸡1只(约500克),生姜6克。将杜仲、陈艾与鸡入砂锅中同炖,将熟时加人生姜,炖20分钟,加盐调味每次用热汤烊化阿胶5克,日3次,饮汤食肉。
本方适用于寒混凝滞之痛经。
[方五]
桂枝5克,山楂肉15克,红糖30克。将前2味加水2碗,文火煎成1碗,加红糖再煎片刻,日2次,趁热饮。
本方适用于因寒而致痛经。
[方六]
荔枝核、香附各等分,黄酒适量。荔枝、香附共研末,每服6克,黄酒调服,日2次。
本方适用于阳虚内寒之痛经。
[方七]
鸡蛋2个,元胡20克,益母草50克。3物加水同煮,蛋熟后去壳,再煮片刻。食蛋饮汤,于经前开始,日服1次,连服5—7天。
本方适用于阳虚内寒之痛经。
[方八]
鲜蔷薇根①克(干者30克),七叶莲9克,鸡蛋2只。将蔷薇根、七叶莲加清水3碗煎至1碗,去渣,再把鸡蛋两只煮熟去壳放人药液中同煮,加少量米酒服食。在月经来潮前1-2天开始服,每日1次,连服2-4天。
本方适用于湿热下注所致之痛经。
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6.中医怎么治疗甲亢 篇六
肝郁火旺证
病因:忧思愤怒,肝失疏泄。
临床表现:烦躁易怒,恶热多汗,心悸失眠,口渴引饮,多食善饥,便频量多,目赤肿胀,舌质红苔黄,脉弦数。
食疗原则:疏肝清热。
食疗处方:
柿子蜂蜜膏
原料:青柿子1000克,蜂蜜适量。
烹制方法:将青柿子去柄、洗净,捣烂绞汁,放入锅中煎煮浓缩至黏稠。加入蜂蜜1倍量,继续煎煮至 黏稠,离火待冷,装瓶备用。
食用方法:每日1汤匙,以沸水冲服,每日2次,连服10~15天。
壁虎末
原料:壁虎2条,白糖适量。
烹制方法:将壁虎去内脏洗净,炙干后研成细末,加白糖用开水冲服。
食用方法:每次1克,隔天1次,连服数天。
白虎粥
原料:梗米50克,生石膏100克,知母20克,鲜石斛10克。
烹制方法:先将生石膏、知母、石斛以水煎煮30分钟、去渣留汁。粳米淘净煮粥,粥将成时兑入药汁。
食用方法:作早、晚餐。
发菜佛手蚌肉汤
原料:蚌肉250克,发菜、琼枝各30克,蜜枣8枚,佛手、陈皮各12克。
烹制方法:将发菜、琼枝浸泡,洗净。蚌肉、佛手洗净。陈皮浸软,刮白。然后将全部用料放入滚水锅内,用武火煮滚后,改用文火提2小时,调味供用。
食用方法:佐餐当菜,随量服食。
复方夏枯草膏
原料:夏枯草100克,沙参、麦冬、生地黄、元参各30克,海藻50克,白蜜100毫升。
烹制方法:将前6味洗净,共煎2次,取汁500毫升,加白蜜炼膏。
食用方法:每次服用20毫升,每日3次,20天为1个疗程。
夏枯草蛇蜕猪肉汤
原料:夏枯草60克,蛇蜕6克,猪肉500克。
烹制方法:将猪肉切成小块,加大1500毫升清水,放入以上2味药,袋至药味俱出,调味即可。
7.中医怎么治疗肺结核 篇七
【摘 要】 目的:通过对耐多药肺结核中医证候与耐药基因突变的探讨,初步明确耐多药肺结核客观化指征。方法:选择120例耐多药肺结核患者,利用现代基因芯片检测技术,测定分枝杆菌对利福平、异烟肼耐药的基因突变位点,并分析比较其在各中医证候间出现的几率。 结果:利福平耐多药肺结核基因突变位点主要集中于rpoB-531(62.50%)和rpoB-526(19.17%)二个位点,其中在rpoB-531基因突变位点上,阴虚火旺证、气阴两虚证比肺阴亏虚证、阴阳两虚证发生率显著增高;在rpoB-526基因突变位点上,肺阴亏虚证比阴虚火旺证、气阴两虚证、阴阳两虚证发生率明显增高。异烟肼耐药基因在KatG315基因突变位点上,肺阴亏虚证比阴虚火旺证、气阴两虚证、阴阳两虚证发生率显著增高;在inhA15基因突变位点上,阴阳两虚证比肺阴亏虚证、阴虚火旺证、气阴两虚证发生率明显增高。结论:耐多药肺结核利福平耐药基因位点rpoB-526和/或KatG315突变可作为肺阴亏虚证的辨证指征,inhA15突变作为阴阳两虚证的辨证指征,rpoB-531突变可作为阴虚火旺证、气阴两虚证的辨证指征。
【关键词】 耐多药肺结核;中医证候;基因突变
【中图分类号】R259 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517(2016)06-0078-03
2007年我国被世卫组织列为全球25个耐多药结核病和严重耐多药结核病最优先控制的国家之一,且位居第一位。耐多药结核病(multidrug-resistant tuberculosis,MDR-TB)和广泛耐药结核病(extensively drug-resistant tuberculosis,XDR-TB)已成为世界范围最为严重的流行疾病,其治疗费用多,治愈率低,死亡率高,是结核病控制所面临的最大难题[1]。证候是中医临床诊断和治疗的逻辑起点,是辨证论治的核心,加强揭示规律和本质的中医证候学研究具有重要的意义[2]。本研究选取120例耐多药肺结核病例,应用现代分子基因芯片检测技术分析利福平、异烟肼耐药基因突变位点与中医证候的关系,初步明确耐多药肺结核中医证候客观化指征,为提高辨证论治水平奠定基础。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2014年1月至2014年12月住院及门诊耐多药结核病患者120例,其中男97例,女23例。年龄18~65岁,平均年龄(45.64±15.55)岁,病程3~600个月,平均病程(56.24±31.52)月。所有患者均符合《耐药结核病防治手册》[3]关于耐多药肺结核的诊断,以及国家中医药管理局颁布的《中医证候诊断标准》[4]、《中药新药临床研究指导原则》[5]等关于“肺痨(肺结核)”的诊断标准。排除标准:①罹患各系统重大疾病、长期服用免疫调节剂等可能干预中医证候判断的患者;②妊娠期或哺乳期妇女、精神病患者;③合并肺外结核病者。
1.2 中医证候诊断标准 ①肺阴亏虚证。主症:干咳,盗汗,手足心热;次症:痰中带血丝或血点,咳声短促,胸部隐隐作痛,口燥咽干,颧红,皮肤干灼;舌红少津,脉细或细数。②阴虚火旺证。主症:呛咳气急、午后潮热、盗汗;次症:时时咯血色鲜红,形体消瘦,五心烦热,骨蒸,失眠,颧红,口渴,胸胁掣痛,痰少质粘或痰黄稠量多,口燥咽干;舌红干,苔薄黄或见花剥苔,脉细数。③气阴两虚证。主症:气短声低、午后潮热、自汗与盗汗并见;次症:咳痰清稀、咳嗽无力,痰中夹血血色淡红,神疲乏力,畏风怕冷,纳呆,颧红,面色晄白;舌光淡,边有齿印,脉细弱而数。④阴阳两虚证。主症:形寒肢冷,自汗,盗汗;次症:潮热,五更泄泻,面浮肢肿,咳逆喘促少气,咯痰色白,痰中带血丝色暗淡,男子遗精,女子经少或经闭;舌质光淡甚者隐紫,少津,脉细数或虚大无力。以上以主症必备其中两项,次症兼具两项以上,综合舌、脉象即可诊断,均由三位副主任中医师以上职称专家共同进行判断。120例耐多药肺结核患者中肺阴亏虚证者11例,其中男9例,女2例,年龄20~64岁,平均年龄(44.09±16.18)岁,病程6~580个月,平均病程(57.18±30.96)月;阴虚火旺证者49例,其中男39例,女10例,年龄18~64岁,平均年龄(46.33±14.65)岁,病程3~590个月,平均病程(56.07±29.45)月;气阴两虚证者46例,其中男38例,女8例,年龄18~65岁,平均年龄(45.87±16.21)岁,病程5~600个月,平均病程(57.58±31.22)月;阴阳两虚证者14例,其中男11例,女3例,年龄19~65岁,平均年龄(46.23±15.34)岁,病程3~590个月,平均病程(57.41±32.15)月。各组患者男女比例,平均年龄以及平均病程等一般资料比较,差异均不具有统计学意义,组间具有可比性(P>0.05)。
1.3 基因芯片方法 选用Evidenceinvestigator-生物芯片仪(英国朗道实验诊断有限公司生产)。核酸提取:取 2ml痰标本于标本消化管内,加入NaOH-NALC 2ml。室温静置15min。提取1ml的标本处理液离心5min(12000r/min)共2次。向离心管内加入80μl核酸提取液,涡旋振荡混匀后移入核酸提取管。将核酸提取管于超声振荡器中震荡15min。待水浴锅温度达到 95℃以上后,将核酸提取管放入其中处理5min。取出后离心1min(12000r/min)。扩增:将PCR扩增试剂1、2、3分装扩增管中,18μl/管,每个管中加入2μl 模板DNA、阳性质控品或阴性质控品,做好标记。将扩增管放入扩增仪以下表的程序扩增。杂交:根据样品数目(n) 取2n个PCR管置于PCR架上,排成两排,同一列编排为一组,分别向PCR管内加入9μl杂交缓冲液;取出PCR产物,分别向列排管中加入反应体系一3μl,在上侧管内加入3μl对应体系二充分吸打混匀,在下侧管内加入3μl对应体系三充分吸打混匀,各反应体系共计15μl。将杂交混合物置于PCR仪上95℃加热5min,待其变性后立即放入冰水混合物中冰浴3min。吸取13.5μl杂交混合物加入杂交反应盒芯片点阵中,密封杂交盒。将杂交盒放入50℃预热20min的杂交仪中;50℃杂交2h,转速5r/min。读取:取出杂交反应盒组芯片,放入洗干仪进行洗涤甩干。将处理好的芯片放入扫描仪,读出结果。
1.4 观察指标 观察结核分枝杆菌对利福平、异烟肼耐药相关基因突变位点在中医各证候间出现的几率。
1.5 统计学处理 数据采用SPSS 12. 0软件进行统计学处理和分析,其中计数资料采用χ2检验,计量资料采用t检验,P﹤0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 耐多药肺结核利福平耐药基因位点与中医证候的相关性分析 利福平耐多药肺结核基因突变位点主要集中于rpoB-531(62.50%)和rpoB-526(19.17%)二个位点,其中在rpoB-531基因突变位点上,阴虚火旺证、气阴两虚证与肺阴亏虚证、阴阳两虚证比较,有显著统计学差异(P<0.05),说明阴虚火旺证、气阴两虚证与肺阴亏虚证、阴阳两虚证比较,其rpoB-531基因突变发生率显著增高,提示rpoB-531基因突变可作为阴虚火旺证和气阴两虚证的基因辨证特征之一;在rpoB-526基因突变位点上,肺阴亏虚证与阴虚火旺证、气阴两虚证、阴阳两虚证比较,有显著统计学差异(P<0.05),说明肺阴亏虚证与阴虚火旺证、气阴两虚证、阴阳两虚证比较,其rpoB-526基因突变发生率明显增高,提示rpoB-526基因突变可作为肺阴亏虚证的基因辨证特征之一。具体见表1。
2.2 耐多药肺结核中医证候不同位点基因突变发生率的比较 耐多药肺结核异烟肼耐药基因在KatG315基因突变位点上,肺阴亏虚证与阴虚火旺证、气阴两虚证、阴阳两虚证比较,统计学有极显著性差异(P<0.05),说明肺阴亏虚证与阴虚火旺证、气阴两虚证、阴阳两虚证等三型比较,其KatG315基因突变发生率更高,提示KatG315基因突变可作为肺阴亏虚证的基因辨证特征之一;在inhA15基因突变位点上,阴阳两虚证与肺阴亏虚证、阴虚火旺证、气阴两虚证比较,有极显著统计学差异(P<0.05),说明阴阳两虚证与肺阴亏虚证、阴虚火旺证、气阴两虚证比较,其inhA15基因突变发生率明显增高,提示inhA15基因突变可作为阴阳两虚证的基因辨证特征之一。具体见表2。
3 讨论
耐药结核病是指经体外药物敏感等试验证实,结核分枝杆菌对一种或多种抗结核化学治疗药物耐药,目前共分四大类:单耐药结核病、耐多药结核病、多耐药结核病以及广泛耐药结核病。耐多药结核病(简称MDR-TB)是指结核分枝菌经体外证实至少同时对利福平、异烟肼两种以上抗结核药物产生耐药。结核分枝杆菌发生耐药的机制包括靶结构基因突变、药物失活酶作用、细菌胞壁通透性改变和代谢途径改变等多种模式,而目前已证实的主要机制是由于菌内药物作用靶编码基因突变所致[6]。多项研究表明利福平的耐药发生与RNA聚合酶β亚基的编码基因rpoB突变密切,异烟肼的耐药发生与过氧化氢酶-过氧化物酶编码基因katG的缺失和突变及烯酰基还原酶编码基因inhA基因突变高度相关[7]。
基因芯片技术以其具有高通量、简便、微缩、平行化、集约化等方面的优点,中医药临床和研究领域如中医证候研究、中药药理学研究、中药有效成分筛选、中药毒性及不良反应研究等方面被广泛应用,在分子生物学与中医药学研究之间架起了一座技术桥梁,为中医药客观化和标准化研究提供了技术上的保障。结核分枝杆菌对抗结核化学治疗药物产生耐药的最主要机制为细菌菌体内药物作用靶编码基因的发生突变所致,利福平耐药的产生与结核菌RNA聚合酶β亚基的编码基因rpoB突变密切相关,异烟肼耐药与过氧化氢酶-过氧化物酶编码基因katG的缺失、突变及烯酰基还原酶编码基因inhA基因突变高度相关,因此,通过利用基因芯片耐药检测技术,探讨耐多药肺结核中医证候与利福平、异烟肼耐药基因突变位点之间相关性和内在联系,将有助于阐明基于基因水平的耐多药肺结核中医证候之本质。通过耐多药肺结核中医证候本质和规律的研究,将有助于了解其疾病的病因、病机,为临床辨证提供参考、证候标准的修订与完善提供依据。
本研究结果表明,利福平耐多药肺结核基因突变位点主要集中于rpoB-531和rpoB-526二个位点,其中在rpoB-531基因突变位点上,阴虚火旺证、气阴两虚证比肺阴亏
虚证、阴阳两虚证基因突变发生率显著增高;在rpoB-526基因突变位点上,肺阴亏虚证比阴虚火旺证、气阴两虚证、阴阳两虚证突变发生率明显增高。异烟肼耐药基因在KatG315基因突变位点上,肺阴亏虚证比阴虚火旺证、气阴两虚证、阴阳两虚证基因突变发生率显著增高;在inhA15基因突变位点上,阴阳两虚证比肺阴亏虚证、阴虚火旺证、气阴两虚证基因突变发生率明显增高。李桂莲等[8]分析了30株利福平耐药菌株的rpoB基因突变情况:总突变率为96.7%,其中rpoB 531突变率为70.0%,rpoB 526突变率为16.7%,利福平MIC≥32.00μg/ml与0.500~16.00μg/ml相比,菌株rpoB 531和rpoB 526基因位点的突变发生率高,推断rpoB基因突变与利福平高水平耐药有关。孙凤丹等[9]利用PCR-SSCP方法发现KatG菌耐异烟肼临床分离株是主要的基因突变类型,说明KatG在INH耐药中起主导作用,但某些菌株的耐异烟肼可能与KatG无关,而与inhA基因突变有关。因此,KatG基因突变是异烟肼耐药性的重要分子机制,inhA基因突变是重要的辅助机制。
综上所述,耐多药肺结核利福平耐药基因位点rpoB-526和/或KatG315突变可作为肺阴亏虚证的辨证指征,inhA15突变作为阴阳两虚证的辨证指征,rpoB-531突变可作为阴虚火旺证、气阴两虚证的辨证指征。
参考文献
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