PCR过程问题全解

PCR过程问题全解

1.PCR过程问题全解 篇一

pcr技术是聚合酶链反应，该技术可将极微量的靶dna特异的扩增上百万倍，从而大大提高对dna分子的分析和检测能力。pcr反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，操作复杂，所以在其操作过程中常有污染发生，即使极少量的污染也会造成假阳性，稍有差错就会出现假阴性。

本文讨论pcr扩增过程中污染的预防与对策。操作者必须熟练掌握技术，严格按操作规程操作，防止假阳性、假阴性结果的产生。

污染的原因调查

标本间的污染；采集标本的容器被污染；提取过程中加样枪污染；试剂的污染；提取过程中气溶胶的污染等。

防止污染的预防与对策

实验人员要熟练掌握pcr操作技术，严格规范操作程序，操作过程中加样枪的使用，手套、枪头、离心管应一次性使用。严格按试剂生产厂家提供的程序进行操作。

严把质量关，在操作当中总结，马上到期的试剂或刚过期试剂对pcr结果影响很大。

设立阴性质控和阳性质控：阴性质控以监测试剂是否污染，阳性质控以监测pcr反应是否成功，产物大小是否合本理论要求。

实验室设置及设备的规范化

实验室划分为4区：试剂准备区、，标本准备区、pcr循环扩增区、检测区。扩增仪的设置要符合要求，取样器刻度准确，减少pcr循环次数，只要pcr产物过剩检测水。

近年来pcr技术已普及到各基层医院，广泛地用于感染性病原体，如hbv hcv的临床检测，由于缺乏对核酸扩增检验技术完整的了解以及缺乏质量保证措施，导致部分实验室结果出现假阳性、假阴性的出现，所以操作者必须熟练掌握技术，严格按操作规程操作，防止假阳性，假阴性结果的产生。