工程化的神经干细胞的研究进展论文

工程化的神经干细胞的研究进展论文（精选18篇）

1.工程化的神经干细胞的研究进展论文 篇一

脐带血来源干细胞神经分化的研究进展

中枢神经系统损伤后的自身修复能力有限,因而研究者致力于寻找一种合适的细胞进行移植以代替受损的神经细胞修复神经损伤.近年来的研究表明,在特定的`诱导条件下,脐带血干细胞能够出现类似神经细胞样的形态学变化,并表达不同神经发育标志以及电生理特征;在动物体内实验中,脐带血细胞能定向迁移至受损神经组织并植活,改善神经损伤后遗症.脐带血干细胞有可能作为一种有效的细胞资源,应用于人类中枢神经系统疾病的细胞替代治疗以及神经保护与支持.就脐带血干细胞神经分化的体内外研究以及调控机制方面的进展作一综述.

作 者：李云涛 李桥川 邱录贵 LI Yun-tao LI Qiao-chuan QIU Lu-gui 作者单位：中国医学科学院中国协和医科大学,血液学研究所血液病医院,天津,300020刊 名：中国生物工程杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINA BIOTECHNOLOGY年，卷(期)：200626(6)分类号：Q813关键词：脐带血 神经分化 干细胞

2.工程化的神经干细胞的研究进展论文 篇二

分离培养神经干细胞技术的发展已经有几十年的历史, 目前已有新生大鼠和新生小鼠作为神经干细胞来源的原代培养神经干细胞, 胚胎发育过程中, 神经干细胞分布于神经管的管壁[4], 有研究在海马和纹状体也终生存在神经干细胞[5]。近来有研究表明, 皮层中亦有NSCs分布。[6]神经干细胞 (Neural stem cells, NSCs) 属于多能干细胞, 是具有分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的潜能和自我更新并足以提供大量神经组织细胞的潜能的细胞[7,8]。他们受某些特定因素的调节:如神经生长因子、神经功能活动、应激反应等, 特别是许多神经生长因子的调节作用对干细胞的增殖和扩增尤为重要, 包括成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子以及胰岛素样生长因子-I等均可有效地促进神经干细胞的分裂和增殖, 另外白血病抑制因子及其受体 (leukemia inhibitory factor receptor, LIFR) 介导的信号传递通路在神经干细胞的增殖过程中也起了重要的作用[9]。

2 神经干细胞分离、培养方法的比较

制备体外原代神经干细胞常用方法有:单纯机械吹打法、胰蛋白酶消化法。

2.1 非酶分离细胞法

2.1.1 单纯机械吹打法

大鼠乙醚麻醉后, 首先用消毒酒精消毒其皮肤, 然后迅速取出脑组织并分离两侧海马。D-Hanks液漂洗, 反复切割组织, 放入离心管中, 吸管反复吹打至无可见组织切块, 再用200目细胞筛网过滤, 然后制成单细胞悬液。经细胞计数后, 分装入50ml培养皿中, 细胞数约为5*105/ml[10]。该方法操作简单, 无需复杂以及和胰蛋白酶, 经机械分离得到的单细胞活性要比酶分离得到的单细胞活性大。

2.1.2 无血清培养基培养法

最常用的是原代细胞体外培养法, 神经干细胞具有持续增殖的能力, 血清中含有许多诱导NSCs分化的物质, 所以目前采用无血清培养[11]。一般用碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子刺激细胞生长, 有研究表明, 生长因子的密度会影响到神经干细胞的生长, 密度过高对其生长起到抑制作用, 密度过低不利于神经干细胞增殖, 严重则导致悬浮的细胞贴壁分化最后衰老死亡[12]。

2.2 酶分离细胞法

2.2.1 胰蛋白酶消化法

出生24 h内的新生SD大鼠, 用消毒头部后, 断头处死, 无菌条件下D-Hank’s液中打开颅腔, 分离出海马, 去除脑膜和血管, 稍静置待组织沉入离心管底部, 弃去上清, 加入0.25%胰蛋白酶1m L, 37℃消化10 min后加入4m L添加10%血清的DMEM/F12培养基终止消化, 用尖端抛光的玻璃管轻轻吹打至无可见的组织块, 离心、重悬即可获得神经干细胞[13]。此法用胰蛋白酶分化, 操作简单, 分离效果较好, 价格便宜。但在实际操作中很难客观准确地把握酶作用的最佳时间, 严重影响细胞活性, 酶消化细胞间质的同时也消化了细胞本身。实验采用机械分离和消化分离相结合的方法, 分离培养了大鼠脑神经干细胞, 结果证实采取这一方案种植的细胞生长良好[11]。

2.2.2 传代悬浮培养

在原代培养的第3天能够清楚地观察到神经干细胞以漂浮的细胞团的方式生长, 即形成神经球[14]。神经球在培养基中呈悬浮生长, 予以更换半量培基, 在培养条件不变的情况下, 1周后用吸管轻柔吹打球形克隆成为小的神经球和单细胞悬液, 细胞球大小基本一致, 细胞的折光性增强。刘立[15]的研究结果发现接种初期有突起和生长锥的细胞在无血清培养环境下逐渐死亡, 贴壁的多会生长出短突起, 细胞球迅速贴壁并分化为神经元和胶质细胞, 但随培养时间的延长, 细胞全部呈悬浮状。

与悬浮法对比, 贴壁培养法更利于进行细胞形态学的观察, 获取大量同质化的细胞, 对体内移植、基因操作、进行严格的克隆分析和发育学研究具有重要意义。

3 本实验培养离体神经干细胞的经验

通过以上方法反复大量的实验对比, 笔者采用了饲养层条件下培养神经干细胞的稳定抑制神经干细胞的分化、促进神经干细胞的分裂增殖及保持神经干细胞的多向分化潜能的条件。现将方法叙述如下:取15~16d左右的雄性小鼠的睾丸, 经0.25%胰酶消化后制成单细胞悬液, 培养48h后换液去除悬浮的生精细胞和间质细胞达到纯化睾丸支持细胞的目的, 然后把部分生长良好的Sertoli细胞消化下来, 经洗涤、固定、脱水、包埋和聚合等步骤后使用LKB-V型超薄切片机切片, 铀、铅各复染10min, 在日立H-500型透射电子显微镜下观察, 拍照。其余生长状态良好的Sertoli细胞继续培养待其贴满瓶底表面积80%左右用0.25%胰蛋白酶消化传代, 连续传至第三代待细胞长满瓶底表面积90%以上时, 使用丝裂霉素C溶液处理以抑制其分裂增殖以作为饲养层。

组织化学染色进行碱性磷酸酶检测:神经干细胞碱性磷酸酶呈阳性, 表明其分化程度低;目前检测巢蛋白的表达是鉴定神经干细胞最重要最常用的指标[16]。免疫组织化学染色检测神经干细胞表面特异性分子标志物-巢素蛋 (Nestin) :神经干细胞Nestin染色呈阳性, 胞质被染成棕黄色, 表明分离出的为神经干细胞[17], 分化后的细胞表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原[18]。

4 结语

目前, 神经干细胞的体外培养与分离技术迅速发展, 随着研究的深入, 移植治疗发生退行性变的神经细胞修复机制[19]的探讨奠定了基础, 以及NSCs移植将有可能成为治疗神经变性疾病和脑损伤的有效手段[20]。目前最理想的策略是从需要治疗的患者体内取出NSCs用于自身治疗[21]。

摘要：神经干细胞是指能自我更新并具有分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞, 并足以提供大量神经组织细胞的一类细胞。自从90年代以来, 人们相继从各种动物和人的中枢系统分离和培养出神经干细胞 (neural stem cell, NSC) [1, 2]。近年来, 神经干细胞的发现和研究日益深入, 为神经系统损伤和退行性变的治疗带来希望[3]。文章对神经干细胞来源、分离培养及鉴定方法和笔者的一些实际工作体会做一综述。

3.骨髓神经组织定向干细胞研究现状 篇三

关键词：骨髓 神经组织定向干细胞

中图分类号：R329 文献标识码：A

近年来，骨髓中的干细胞用于治疗脑梗塞成为研究热点，脑梗塞后发挥作用的骨髓细胞类型还不清楚。骨髓中存在一群CXCR4+ TCSCs，这群细胞表达某些组织的mRNA，如心脏、肝脏、骨骼肌和神经组织的mRNA[1]。 TCSCs中存在着一群特殊细胞即神经组织定向干细胞（NTCSCs），NTCSCs能表达神经的标志物，如Nestin、NeuN、βⅢ-Tubulin等，这些生物学特性与脑源性神经干细胞相似。值得注意的是NTCSCs在脑损伤后能被动员到外周血中，在趋化因子受体、白血病抑制因子受体、造血生长因子受体作用下能趋化到受损的神经组织[2]。本文就NTCSCs近年来的研究状况进行简述。

1.NTCSCs表达神经标志物

鼠的某些细胞表达造血干细胞的标志Sca-1+，对组织的再生起重要作用[3-5]。Kucia从C57小鼠中提取出了的骨髓单个核细胞，用磁珠分选法分离出了Sca-1+/lin-/CD45+和Sca-1+/lin-/CD45-这两种细胞，借助RT-PCR对其进行mRNA检测，认为小鼠造血干细胞内Sca-1+/lin-/CD45+亚群是NTCSCs。

分离出Sca-1+/lin-/CD45-细胞数量很少，但Nestin，β Ⅲ-tubulin，GFAP等神经标志物RNA的表达要高于Sca-1+/lin-/CD45+细胞。 Sca-1+/lin-/CD45-比Sca-1+/lin-/CD45+细胞要小很多，直径大概为2um。Sca-1+/lin-/CD45-细胞能表达GFAP蛋白，NeuN蛋白、nestin蛋白、还可以在神经干细胞的培养基中形成神经球。

2.NTCSCs能分化为神经元、星形胶质细胞

将Sca-1+/lin-/CD45+和Sca-1+/lin-/CD45-这2种细胞放入神经干细胞的培养基中培养， 一星期后，出现了悬浮的球状的细胞。为了研究它是否存在自我增殖的能力，取出培养一星期的原代神经球，用胰蛋白酶将其分成单个细胞，加入10%胎牛血清终止细胞的消化，将分离的单个细胞放入与原代细胞相同的神经干细胞的基础培养基中，在培养一星期后又观察到新的神经球出现。证明了NTCSCs具有形成克隆的能力、能自我复制和更新。取出神经球细胞，给予有血清的培养基培养10d。10d后，将培养的细胞进行免疫组织化学鉴定，结果显示Sca-1+/lin-/CD45+的NTCSCs能表达βⅢ-Tubulin、GFAP抗原，表明骨髓神经组织定向干细胞能分化为神经元、星形胶质细胞。

3.NTCSCs在不同年龄阶段含量不一

研究发现NTCSCs在年幼老鼠中对神经干细胞的标志物表达较高。借助实时RT-PCR对三周和一年的C57小鼠骨髓单个核细胞中的NTCSCs进行检测，结果显示，在年老老鼠中Nestin、GFAP、β Ⅲ-tubulin 信使RNA表达降低；1年动物和3周动物相比，Sca-1+/lin-/CD45-细胞数量明显降低。从而可以说明NTCSCs具有年龄依赖性，在年老的动物的骨髓中含量较少，含量随年龄增大而减少。

4.NTCSCs扩增问题

NTCSCs大约占骨髓单个核细胞（BMNCs）0.01%，数量极少，并且具有年龄依赖性，在年老的动物的骨髓中含量较少，年幼动物骨髓中含量较多，含量随年龄增大而减少。有研究显示寄居在骨髓的NTCSCs在脑损伤时可释放入血，被认为可能是参与神经修复的潜能细胞。但脑损伤后，大量神经细胞的丢失，释放入血的NTCSCs不足以重建受损的脑组织。因此，在探究NTCSCs的生物学特性的基础上考虑如何扩增骨髓的NTCSCs成为亟待解决的问题。

参考文献：

[1]Kucia M， Ratajcz ak J， Rat ajczak M Z. Bone marrow as a source of circulating CXCR4+ tissue committed stem cells[J].Biol Cell， 2005， 97（2） ： 133-146.

[2]Magda Kucia1， Wojtek Wojakowski2， Ryan Reca1， The migration of bone marrow-derived non-hematopoietic tissue-committed stem cells is regulated in an SDF-1-， HGF-， and LIF-dependent manne[J]. 2006， 54， 121–135.

[3]Gamie Z， Tran GT， Vyzas G， Stem cells combined with bone graft substitutes in skeletal tissue engineering[J].2012 Apr 14.

[4]Neman J， Hambrecht A， Stem cell-mediated osteogenesis： therapeutic potential for bone tissue engineering[J].2012；6：47-57.

4.工程化的神经干细胞的研究进展论文 篇四

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1 广.药学院东中医药研 究 / 广东省院代性谢病疾中医防治药重实点室验 ，家国中医药理 局管脂高血调肝降脂症重研点究室/ 国家中 药管理医局代谢脂级实三室验 ，东 广广 5州10006 ;.2中 大学山生 科命学院干学胞研究细室 ，广 广州东510 006) 培

养神经干胞细(NSCs ) 并，对其行进鉴定方。 采法用动手法胰蛋白酶消化及 法摘： 要的 体外分目离 分离、鼠脑细胞胎，用 化的无优血清NS C 培s养基行进养培。细胞疫免光荧检法测N CSs特异 性标记子 3 d分左 获右得大未分量化巢呈悬浮状生的长 表的达结。果分 离脑的细体胞培外养48 h已 部分大壁贴 神，经干胞细团第 3 代时，。 少很见到贴细壁胞 ，几乎是神全球，经神经球 周围在存较多刺微。 细 表胞 达一中种间丝蛋白，即巢蛋 白(nes ti)n 。论结成功 分、离鉴定 出C57小鼠 NSsC，并 在体外可件条进下行传 扩增培代养。 关键词：C 57 胎小胚;鼠 经干细胞;神 胞细培;养 蛋巢白 中分图类： 号R392 文献志标码 A：d i： 10.o396 9 j/.sin.1s060873.8214003.0.22878 (3 214)0 00354340 章文编号 ：0016

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3期第

5.工程化的神经干细胞的研究进展论文 篇五

大鼠海马神经细胞原代培养技术的优化

目的:建立海马神经细胞原代培养技术.方法:取新生1～3d的Wistar大鼠,开颅,迅速分离出海马组织在Hanks中剪碎,加入0.125%胰蛋白酶2mL消化,胎牛血清终止消化,细胞计数后种植于多聚赖氨酸包被的`6孔培养板中.结果:神经细胞存活率高,纯度达90%以上,神经细胞生长良好.结论:用此方法能成功获取大鼠海马神经细胞.

作 者：张金波 王淑秋 朱金玲 罗佳滨 张淑红 金岳雷 ZHANG Jin-bo WANG Shu-qiu ZHU Jin-ling LUO Jia-bin MA Xiao-ru JIN Yue-lei 作者单位：佳木斯大学基础医学院,黑龙江,佳木斯,154007刊 名：黑龙江医药科学英文刊名：HEILONGJIANG MEDICINE AND PHARMACY年，卷(期)：200932(4)分类号：Q421 R388关键词：海马神经细胞 原代培养 胰蛋白酶

6.工程化的神经干细胞的研究进展论文 篇六

应用Mawhin连续性定理和不等式方法,给出了-类变系数混合时滞细胞神经网络周期解存在和指数稳定的充分条件.该结论对神经网络的`设计具有重要的参考价值.

作 者：田安峰 盖明久 时宝 黄诘 TIAN An-feng GAI Ming-jiu SHI Bao HUANG Jie 作者单位：田安峰,TIAN An-feng(海军航空工程学院系统科学与数学研究所,山东,烟台,264001;海军航空工程学院青岛分院,山东,青岛,266041)

盖明久,时宝,黄诘,GAI Ming-jiu,SHI Bao,HUANG Jie(海军航空工程学院系统科学与数学研究所,山东,烟台,264001)

7.工程化的神经干细胞的研究进展论文 篇七

1 GSCs概述

随着肿瘤干细胞的发现及其生物学特征的了解，研究者提出了肿瘤发生发展的种子是TSC的假说。应用干细胞研究技术，人们陆续从白血病 (流体瘤) 、骨髓瘤和乳腺癌 (实体瘤) 中分离获得了TSC。

2003年，SINGH等[1]从人脑肿瘤组织中成功分离出了TSC，其表现出与NSC相似的特性，这些细胞被称之为胶质瘤干细胞 (GSCs) 或胶质瘤起始细胞 (glioma-initiating cells) 。其具有以下几个特点: (1) 能自我更新，持续增殖， (2) 具有肿瘤始动能力，在免疫缺陷大鼠颅内原位移植可产生脑肿瘤， (3) 表达神经干细胞标志物， (4) 具有多向分化能力，也就是可分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞3种不同的神经细胞。GSCs的存在对肿瘤组织的持续增长起着重要的作用，它具有放化疗耐受性，肿瘤的复发被认为是由残存的肿瘤干细胞所致。因此这些干细胞也就成了肿瘤治疗的一个重要目标。

随着GSC域的加深，其中不乏各种争议。现把近年来出现的一些新看法、新认识仅列举以下: (1) 测试致瘤能力的常用方法是，将有限密度的细胞接种到NOD/SCID (严重联合免疫缺陷) 大鼠从而使其荷瘤。KELLY等[2]的实验却发现，除了肿瘤干细胞外，其他细胞也有很高的致瘤率。 (2) CD133曾被认为是GSC的一个高度特异的标志物，但不是最理想的标志物，因为CD133阴性细胞同样具有自我更新并始动肿瘤的特性，只是致瘤率非常低，并且CD133阴性细胞在适当条件下还能逆分化成CD133阳性细胞而致瘤[3]。 (3) 集落生成实验被用来评价细胞的自我更新能力，它受细胞微环境的强烈影响，ZHENG等[4]实验显示血清能够极大促进集落生成。

微环境 (niche) 能调节肿瘤干细胞的生长特性，研究表明CD133标志物能被缺氧诱导产生[5]。由于易受外界因素调节，CD133并非GSC一个稳定表达的特性。有学者认为在肿瘤细胞中存在一个亚群，它们新陈代谢能力强，在微环境的调整下能够通过不同的能量通路进行转变，当肿瘤组织内不同分化状态的细胞并存时，这些细胞将会具有去分化和增殖的能力[6]。从理论上来说，只要剩余一个肿瘤干细胞就足可以导致肿瘤的复发。因此，肿瘤干细胞是肿瘤发生发展的源泉，只有杀死肿瘤干细胞才可能成功的治愈癌症。

2 如何以GSCs为靶向

肿瘤的靶向治疗通常依赖于肿瘤细胞特异分子的表达或者是能激活某种信号能量通路，从而提供一个有针对性的治疗方案。随着快速、高效、高通量分析方法的发展，研究人员在分子水平上对阐明肿瘤干细胞的遗传特点进行了卓有成效的研究，发现了更多的特异靶点，为研发选择性杀伤肿瘤干细胞的靶向药物奠定基础，从而成为肿瘤治疗新的突破点。

2.1 信号通路

NOTCH是调节NSC自我更新和分化的一个重要通路，研究发现与非干细胞样肿瘤细胞相比，GSCs激活的NOTCH更多。FAN等[7]应用γ分泌酶抑制剂 (GSIs) 成功阻断NOTCH信号通路传导，减少了CD133+GSCs，并抑制了肿瘤的发生和生长。WANG[8]等发现阻断NOTCH通路还能够进一步增加GSCs的放疗敏感性。

磷酸肌醇3激酶 (PI3K) 通路也是一个重要通路。PI3K是一种癌基因，其编码的蛋白质产物具有磷脂酞肌醇 (phosphatidylinosito, pl) 激酶活性，在肿瘤发生、发展方面起着重要的作用。Akt也称为蛋白激酶B (PKB) ，是一种在进化上高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，主要位于胞浆，是PI3K的关键下游分子，可以调控转录、蛋白质合成、糖类和脂类的代谢。EYLER[9]的实验发现，小分子的Akt抑制剂能显著的减少GSC细胞的数量，抑制GSC的转移及侵袭，从而抑制肿瘤的生长。

Hedgehog传导通路在GSCs中起着重要作用，在多发性骨髓瘤和慢性髓性白血病的CSC细胞中均发现Hedgehog通路的活化。SMO是参与Hedgehog通路活化的重要中间分子，它的拮抗剂环王巴明 (cyclopamine) 可以抑制Hedgehog通路活化。BAR等[10]使用环王巴明治疗神经胶质细胞瘤和多发性骨髓瘤，发现肿瘤细胞的克隆能力明显下降。此外，另一种SMO拮抗剂GDC-0449已经完成了I期临床实验，并取得了较理想的效果。

锌指蛋白A20是NF-κB通路的调节剂，HJELMELAND等[11]发现它在胶质瘤干细胞的表达要高于非干细胞样肿瘤细胞。通过慢病毒sh RNA转染敲除A20能够减弱胶质瘤干细胞自我更新，生长和抗凋亡的能力。

WANG等[12]发现针对C-myc的慢病毒sh RNA转染能够减少GSCs的增殖，增加它的凋亡和减弱其致癌性。EZH2是Pc G (多梳基因蛋白) 基因家族的一员，它能够增加cmyc的表达，同时sh RNA介导的EZH2表达的下调，以及用s-adenosythomocystein水解酶抑制剂DZNep处理导致EZHZ蛋白表达的抑制，都能够减弱GSC的自我更新和成瘤能力。

白细胞介素6 (IL6) 通路的受体是IL6Rα和gp130。以IL6Rα或者IL6为靶的慢病毒sh RNA能在体外实验中阻止GSC的生长和神经球的形成，而在体内实验中敲除IL6Rα和IL6并且使用抗IL6抗体进行治疗能够抑制GSC诱导的肿瘤的生长[13]。

趋化因子CXCL12又称基质细胞衍生因子-1 (SDF-1) 或前B细胞刺激因子 (PBSF) ，其在调控造血环境中起重要作用，研究显示其配体是CXCR4，它们的相互作用与肿瘤的发生发展密切相关。研究发现GSC细胞群中有少部分细胞表达较高的CXCR4受体水平，而在非干细胞的胶质瘤细胞系中仅有个别细胞低表达。AMD3100是一种特异的CXCR4拮抗剂，在体外实验中能够抑制肿瘤细胞的迁移，在体内实验中能够减少高侵袭力的GSC细胞系异种移植的生长。

2.2 分化

诱导分化是GSCs靶向治疗的另外一个重要途径。骨形态形成蛋白 (BMPs) 在神经系统的发育分化中起着重要的作用。LIU A等[14]运用实验胚胎学和遗传学方法证明了BMP在神经组织的形成以及在对神经元形成的类型和数量都起一定的控制作用。LEE等[15]研究发现BMPs在不同的肿瘤干细胞株的分化中起到不同的作用，或者促进或者抑制肿瘤性星形细胞分化程序。运用RNA干扰筛选方式，令衔接子蛋白TRRAP (转化/转录域相关蛋白) 表达沉默，结果显示能诱导GSCs的分化。TRRAP的表达下调能够使细胞对凋亡刺激敏感，并阻止细胞周期的进展，从而抑制体内肿瘤的形成。这些现象说明，TRRAP能够保持GSCs处在一个干细胞样的致瘤状态。

研究发现维甲酸能够促进肿瘤细胞的分化，最近研究揭示其能作用于干细胞样胶质瘤细胞并发挥抗肿瘤的功效[16]。然而在临床研究中，关于全反式维甲酸和顺式维甲酸的确切机制只有较少报导，是否有某种特殊形式的维甲酸能够在联合化疗中使GSCs对细胞毒治疗致敏将是今后研究的热点问题。

2.3 放疗敏感性

胶质瘤对放化疗敏感性较差，GSC细胞通过DNA损伤检验点系统以及DNA修复能力，从而具有一定的放化疗抵抗能力。与CD133阴性细胞相比，CD133阳性GSCs无论在体内还是体外的放射线环境下都能较强的存活[17]。CD133+细胞能更有效地修复放射引起的DNA损伤，Chk1和Chk2 (细胞周期检测点激酶) 的特异性抑制剂能够逆转这种放射抗性。在GSCs领域研究DNA损伤检验点系统的反应或许能够提供一个可行的治疗方案。

2.4 GSC微环境 (niche)

niche是指干细胞周围的细胞和外部信号构成的特定的微环境，这个微环境维持着干细胞的特性，为干细胞的自我更新提供了合适的外部条件，并且抑制干细胞向成熟细胞的分化。与非干细胞样胶质瘤细胞相比，GSCs分泌高水平的VEGF (血管内皮生长因子) ，具有很强的促血管生成作用。这说明GSC与血管环境是相互依赖的。

贝伐单抗是一种抗VEGF抗体，能够有效的对抗血管形成，研究证实其能够阻止血管形成和GSC源性的异种移植物的生长。然而它对非GSC源性的异种移植物只有有限的功效。FOLKINS等[18]在细胞毒治疗中联合使用一种抗VEGF受体的抗血管形成治疗，结果GSC细胞明显减少，然而单独的抗血管形成的治疗却难以达到如此效果，说明微环境的破坏能够使GSCs对化疗敏感。

2.5 溶瘤病毒治疗

溶瘤病毒能够选择性地在肿瘤细胞中复制，造成细胞病理效应和机体免疫反应从而导致肿瘤细胞的裂解死亡，同时对正常细胞和组织却没有作用或影响较小。Delta-24-RGD是一种溶瘤腺病毒，它能选择性的进入肿瘤细胞内，通过Rb通路进行复制，尤其是在胶质瘤细胞中。使用Delta-24-RGD治疗脑内荷瘤大鼠，生存期明显延长。

2.6 粘附分子抑制

L1CAM是一类神经细胞粘附分子，属于免疫球蛋白超家族中的一员，它能够调节神经细胞的生长，生存，迁移，以及轴突的生长和神经突的伸展，在胶质瘤细胞以及其它肿瘤细胞中高度表达，因此可作为细胞表面靶的。L1ACM主要在CD133+胶质瘤细胞中表达，在CD133-中呈阴性。针对L1CAM的慢病毒sh RNA能阻止CD133+GSCs生长，干扰神经球的形成，诱导其凋亡[19]。

3 结语

8.神经干细胞移植：现实还是梦想？ 篇八

它的确神奇

与国外病人相比,小董接受“神经干细胞移植”花费的2万多元钱,不算太多,但这笔钱对于小董和他的家庭,已经是巨大的开销｡现在,病情没有好转,小董很想知道自己到底是上當受骗,还是“药不对症”,他努力地在网络上搜索信息,最后发现,没有人能给他一个满意的答案｡

“神经干细胞移植”究竟是一种怎样的治疗技术?记者以咨询者的身份来到“浙江某医院细胞治疗康复中心”,一位姓马的医生介绍说:“随着科学的发展,干细胞可以修复大脑中受到损害的细胞,我们移植的是神经干细胞,修复受损的脑组织,帮助功能的恢复｡”

让非生物或者非医学专业的人理解“神经干细胞”已经足够困难,更别说再加上“移植”“修复”一类的专业术语,事实上,即便是专业学者,对“神经干细胞”的了解也不多,它的发现,仅仅只有10多年的历史｡

1989年以前,没有人相信有“神经干细胞”这个东西的存在｡在此之前,造血干细胞早就被发现,1950年代,科学家已经发现通过移植骨髓,病人获得造血干细胞后可以治疗造血功能障碍等疾病,过去,白血病､地中海贫血等被认为是不治之症,通过骨髓干细胞移植,这些疾病的患者得到生的希望｡

而大脑中的“神经干细胞”一直没有被掀开面纱,所有人都认为神经元是不可再生的,如果神经细胞受到损伤后死亡,就不会像血液细胞一样得到新生力量的补充,只有“神经胶质细胞”来补充空缺｡“神经胶质细胞”是不能替代原来神经细胞的功能的,所以一旦神经细胞受到损伤,就像脑瘫病人的大脑中出现的情况那样,损伤的神经细胞是不能自我修复的｡受损的神经细胞就像一根竹竿,一旦断裂,就无法恢复到原来的样子,就算我们用胶水把竹竿接起来,它也无法重生｡

这种看法在1989年被打破,一位科学家提出“神经干细胞”的设想,后来经过各国科学家的实验,到1990年代初期,科学家们认定神经干细胞的确存在于成年动物脑和脊髓内的大量区域｡

这个发现让人振奋,它意味着,就算是神经细胞受损,人体也能自己把它修复成原来的样子,过去我们看到神经系统疾病无法恢复,可能是因为这些天生的修复材料不够多｡完成这个修复工作的,就是“神经干细胞”,它像“母亲”,能够按照需要“生育”出神经细胞,并且在受损部位让神经细胞死而复生｡只要我们对“神经干细胞”足够了解,就能够在人工的干预下,“制造”足够多的“神经干细胞”,然后根据需要,把它送到该去的地方,这样,很多神经系统的顽症,就可以迎刃而解了｡

世界各地的科学家开始投入到这个充满诱惑的研究领域,在中国,2001年立项的国家重点科研项目973计划里,也把神经干细胞研究作为课题,北京大学和中国科学院上海生命科学研究院的两位科学家主持开展科研｡

实验室中,研究者已经发现神经干细胞的巨大“潜能”｡从胚胎或者成体细胞中能够分化出神经干细胞,如果在实验室中创造出特殊的环境,那么这些分化出来的神经干细胞能够诱导发育成为神经细胞,接着,有科学家继续实验,在动物实验中发现,如果把那些通过特殊方式分化出来的神经干细胞移植进动物的身体,它们能够“长”出神经细胞,“修复”受损的神经细胞｡

这就是“神经干细胞移植”的理论基础,也就是说,把神经干细胞“种”进大脑,让它去需要的地方“修修补补”,是有可能的,这也是主张“神经干细胞移植”可以用于临床的的理由｡不过,上面出现的情况,还是在实验室中发生的“故事”,由于关键技术存在的不确定性,没有严谨的科学家敢把这个看上去“成熟”的过程用在人的身体上,即便存在个别的人体临床试验,也没有科学家声称已经得到了可靠的结果｡

诺贝尔奖提前到来?

“明天的治疗,今日享用”——在青岛某医院干细胞治疗康复中心的宣传资料上,有这样一个响亮的口号,但严谨的科学家表示,幻想“明天的治疗今日享用”实在是太早了,神经干细胞移植关键的难题还没有解决,只要这些关键难题没有解决,临床治疗的安全和效果就无从谈起｡

最重要的难题有两个:神经干细胞能否分化为一定纯度的神经细胞?神经干细胞“移植”进大脑后,能不能在正确的位置“长”出神经细胞来,而且这些“长”出来的神经细胞能不能长期“存活”｡

又是艰涩的专业概念｡

让我们来想象一下｡人的胚胎就像一颗种子,将来是会变成一个人的,这颗种子里包含了无数更小的种子,有的种子将来长成皮肤,有的长成肝脏,有的长成血液,还有的长成神经细胞｡神经干细胞,就是将来神经元和神经胶质细胞的“母亲”｡最早科学家对神经干细胞的研究,是从胚胎里寻找它的,这比较好理解,因为只要把种子放在合适的环境中,可以看到,有一些细胞将来就是变成了神经细胞｡

从胚胎中得到神经干细胞看起来更加可靠,一般有两个途径:一个是从流产胎儿的中枢神经系统中分离出来,一个是从人的胚胎干细胞中诱导分化出来｡不过,由于宗教和伦理的限制,这样获得神经干细胞的途径在很多国家被禁止｡

幸好,通往罗马的路不止一条,科学家们发现神经干细胞不仅存在于胚胎,而且还存在于骨髓､脐血里,如果从这些途径获得神经干细胞,就不存在宗教的禁忌｡于是,很多研究者把注意力集中在非胚胎的神经干细胞来源上｡

但问题是,脐血中神经干细胞的含量很小,如果我们要利用它,就必须分离､纯化和扩增,就像要从矿石中筛取钻石一样｡但到目前为止,科学界还没有成熟的分离､提纯和扩增的技术平台,没有公认的标准来规范这个过程｡也就是说,没有人知道哪种分离方式最好,纯化到什么程度才可以用于移植,扩增后的干细胞要达到哪些指标才是“合格”的｡

至于第二个难题,就更加复杂｡动物的大脑是一个精密到无法想象的“黑匣子”,至今人们对大脑的了解不多,神经系统是传递信号的“道路”,一个挨着一个的神经细胞巧妙而精确地传递电信号,才让我们在看到台阶时知道要抬腿｡就算我们解决了第一个难题,把“安全”的神经干细胞移植进大脑,这些干细胞能不能到达需要修补的地方?到达以后能不能像其他神经细胞一样传递信息?这些,都没有确定的答案｡

除了上面两个难题,还有很多临床使用的细节无章可循,比如移植的方法､途径､佐剂､适应症等等｡而且,神经干细胞治疗的效果评定,也是正在研究中的课题｡“如果有人解决了这些难题,一定能得诺贝尔奖｡”周长福说｡很多科学家都致力于解决这些问题,尽管科学家对神经干细胞移植将来应用于临床充满乐观的信心,但他们不得不面对的是,距离成熟的临床应用,还很遥远｡

神经干细胞“亢奋症”

在专业研究人员眼里,神经干细胞移植离临床治疗还有很长的距离,但那些支持临床应用的人,却只拿“效果”说话｡“我们用了这么几年以后,应该说没有出现毒副作用｡”“我们治疗的脑瘫病人90%以上都有效果｡”在一家开展神经干细胞移植的医院里,医生这样说｡浙江某医院干细胞治疗康复中心的史主任说,他们只想做“实在的工作”,不追求商业目的,所以一直没有过多宣传,但他还是忍不住告诉记者:“我们很多治疗病例,可以说是世界首例的｡”

“一项新技术在没有被证明确实有疗效之前,就不能在临床上应用,最多只能用来做临床试验,那样的话不仅要病人知情同意,还不能收取费用,并必须遵循有关临床试验的法规｡”方舟子在接受记者采访时表明了他的观点｡与他的态度类似,暨南大学附属医院一位康复科医师,也非常不赞同把“神经干细胞移植”应用于临床｡

对于“神经干细胞移植”应用于临床的质疑之声,从来没有停歇过,但这项备受争议的治疗技术,还是蓬勃地发展了起来｡

2005年,国内几家医院开始开展神经干细胞治疗,曾经在医学界掀起热烈的讨论,北京宣武医院是国内神经科实力非常强的医院,医院的几位医生对“神经干细胞移植”应用于临床发表了看法,并发表在《健康报》上｡

记者联系到当年这个报道中反对“神经干细胞移植”临床应用的专家,他们的观点至今没有改变｡

“据我掌握的资料神经干细胞移植在帕金森氏病等治疗方面有一定的效果是指可以产生多巴胺类物质｡至于对诸如运动功能､言语功能､认知功能､吞咽功能､二便功能等最重要的神经功能的恢复方面,至今我没有发现国际上有任何循证医学的证据表明神经干细胞‘移植’是有效的｡”其中一位神经康复专业的医师这样答复｡

9.工程化的神经干细胞的研究进展论文 篇九

2、掌握作物脱毒、人工种子的制备过程和意义

3、了解单倍体育种和突变体的利用

4、了解细胞产物的例子 能力

目标 搜集有关细胞工程研究进展和应用方面的资料，进行整理、分析和交流。 情感

目标 认同细胞学基础理论研究与技术开发之间的关系;

关注细胞工程研究的发展和应用前景。 教学媒体 课件 教学过程 教学内容 教师的组织和引导 个人札记

1.微型繁殖与无性生殖

2.微型繁殖与作物脱毒、人工种子、单倍体育种

巩固练习

【知识网络体系】

【重难热点归纳】

1.微型繁殖与无性生殖

微型繁殖是用于快速繁殖优良品种的植物组织培养技术，实际上是无性生殖的一种。在繁殖的过程中，细胞进行有丝分裂，因此亲、子代细胞内DNA相同，具有相同的基因，因此能保证亲、子代遗传特性不变。利用这种技术能高效快速实现种苗的大量繁殖。

2.微型繁殖与作物脱毒、人工种子、单倍体育种

作物脱毒、人工种子、单倍体育种的培育过程均有采用微型繁殖的技术。作物脱毒主要是强调微型繁殖的取材一定是无毒(的如茎尖、根尖)，才能繁殖出无毒的幼苗。

人工种子采用的还是微型繁殖的技术，但是只需培育得到胚状体、不定芽、顶芽和腋芽，包上人工种皮就可形成人工种子。人工种子与微型繁殖得到的幼苗一样能保持亲本的优良性状，另外还可不受气候、季节和地域的限制。

单倍体育种的优点是后代无性状分离，后代都是纯合子，能够稳定遗传，明显缩短育种年限。单倍体育种从本质上说属于有性生殖，这一点与微型繁殖有所区别。但单倍体育种首先要进行花药离体培养，采用还是微型繁殖的技术，然后用秋水仙素处理，获得纯合子。

【经典例题剖析】

1.甘薯种植多年后易积累病毒而导致品种退化。目前生产上采用茎尖分生组织离体培养的方法快速繁殖脱毒的种苗，以保证该品种的品质和产量水平。这种通过分生组织离体培养获得种苗的过程不涉及细胞的

A.有丝分裂 B.分化 C.减数分裂 D.全能性

[解析]考查植物组织培养的原理、过程。植物组织培养的原理是植物细胞的全能性。过程是：离体的植物器官、组织或细胞 愈伤组织 根、芽 植物体。此过程是一个无性繁殖的过程，细胞数目增多的方式是有丝分裂，并且涉及细胞的分化。

[答案]C

2.基因型为AaBb的水稻(含24条染色体)的花药通过无菌操作接入试管后，在一定条件下形成试管苗，问：

(1)愈伤组织是花粉细胞不断分裂后形成的不规则的细胞团，愈伤组织形成过程中，必须从培养基中获得_____________等营养物质。

(2)要促进花粉细胞分裂生长，培养基中应有_____________和________________两类激素。

(3)愈伤组织分化是指愈伤组织形成芽和根，再由芽发育成叶和茎。这一过程必须给予光照，其原因是_____________能利用光能制造有机物，供试管苗生长发育。

(4)试管苗的细胞核中含_________条脱氧核糖核苷酸链。

(5)培育成的试管苗可能出现的基因型有_____________。

[解析]考查对植物组织培养过程的掌握。要准确解答此题需要从以下几个方面入手：

①愈伤组织的形成过程中，不断地从培养基中吸取营养。供生物细胞生活的营养物质主要有无机物(水、无机盐)、有机物(糖类、脂类、蛋白质、维生素)等物质。

②植物激素的种类很多，要促进花粉细胞分裂生长，培养基中应有细胞分裂素和植物生长素两大类。

③试管苗是花药离体培养后得到的单倍体植株。其有叶绿体，可以进行光合作用。

④单倍体是指体细胞中含有本物种配子染色体数目的个体，由水稻的基因型为AaBb可知此水稻为二倍体。已知水稻的体细胞中含有24条染色体，则单倍体细胞中含有12条染色体，12个DNA分子。每个DNA分子由两条平行的脱氧核糖核苷酸链盘旋而成，所以试管苗的细胞核中含有24条脱氧核苷酸链。基因型为AaBb的水稻产生配子时，依据基因的自由组合定律，结果♀、♂配子各有四种，即AB、aB、Ab、ab。

[答案](1)水、无机盐、维生素和小分子有机物 (2)细胞分裂素 植物生长素 (3)叶绿体 (4)24 (5)AB、aB、Ab、ab

【基础试题训练】

一、选择题

1.马铃薯利用它的块茎进行无性繁殖，种植的世代多了以后往往会感染病毒而减产，为此农户都希望得到无病毒的幼苗进行种植。获得无病毒幼苗的最佳办法是 ( )

A.选择优良品种进行杂交

B.进行远缘植物体细胞杂交

C.利有芽尖进行组织培养

D.人工诱导基因突变

2.用植物组织培养技术，可以培养或生产出 ( )

A.食品添加剂 B.无病毒植物

C.人工种子 D.前三项都是

3.甘薯种植多年后易积累病毒而导致品种退化。目前生产上采用茎尖分生组织离体培养的方法快速繁殖脱毒的种苗，以保证该品种的品质和产量水平。这种通过分生组织离体培养获得种苗的过程不涉及细胞( )

A.有丝分裂 B.分化 C.减数分裂 D.全能性

4.科学工作者把胡萝卜的韧皮部细胞分离出来，将单个细胞放入培养基中培养，获得了许多完整的植株，这些植株的特点是 ( )

A.彼此性状相似 B.变异频率较高

C.单倍体 D.都是纯合子

5.水稻(基因型为AaBb)的花药通过无菌操作，接入试管，经过如下过程培育试管苗。以下选项中正确的( )

A.a用花药离体培养法获得单倍体植株;

b通过有丝分裂产生愈伤组织;

c培养基中至少应有乙烯和脱落酸;

d试管苗的生长发育不需要光照

B.a用花药离体培养法获得二倍体植株;

b通过减数分裂产生愈伤组织;

c培养基中至少应有生长素和细胞分裂素;

d试管苗的生长发育不需光照

C.a用花药离体培养法获得单倍体植株;

b通过有丝分裂产生愈伤组织;

c培养基中至少应有生长素和细胞分裂素;

d试管苗的生长发育需要光照

D.a用花药离体培养法获得二倍体植株;b通过有丝分裂产生愈伤组织;c培养基中至少应有乙烯和脱落酸;d试管苗的生长发育需要光照

10.脂肪基质干细胞的研究进展 篇十

脂肪基质干细胞的研究进展

脂肪基质干细胞是存在于脂肪组织中的一群能多向分化的细胞.它们具有与骨髓问充质干细胞相似的`特性,在不同的诱导条件下能向同组织细胞分化.脂肪基质干细胞也具有一定的免疫负调节作用.能用于造血干细胞移植后的造血支持.

作 者：王红祥 赵 WANG Hong-xiang ZHAO Shi 作者单位：武汉市中心医院血液科,武汉,430014刊 名：国际病理科学与临床杂志 ISTIC英文刊名：INTERNATIONAL JOURNAL OF PATHOLOGY AND CLINICAL MEDICINE年，卷(期)：28(2)分类号：Q54关键词：脂肪基质干细胞 多向分化 免疫调节

11.工程化的神经干细胞的研究进展论文 篇十一

关键词BP神经网络；网络结构；工程造价

中图分类号TP文献标识码A文章编号1673-9671-(2011)042-0203-01

人工神经网络具有广泛的适用性。由于工程投资估算中影响工程造价的因素众多，工程投资与这些因素之间表现出一种高度非线性的映射关系，因此有些学者和工程人员尝试利用BP（Back Propagation）神经网络对工程造价的估算进行研究，利用BP神经网络可以精确的描述复杂非线性对象建模、计算或推理，试验发现采用BP神经网络可以获取影响工程造价的不确定因素和工程造价之间的内在非线性关系，从而实现对拟建工程项目的投资进行估算，以达到简化估算程序、提高估算准确率的目的。

1神经网络在造价估算工程中的优势

采用BP神经网络进行工程造价估算，主要是因其具有结构简单、工作状态稳定、易于实现；具有分布储存和容错性特点，可以处理与训练集中相同的数据，同时可以处理不完整的数据；神经网络的信息处理时大规模高度并行的，大量的独立运算可以同时进行；神经网络作为一个高度非线性系统，能够获取系统中复杂输入变量的相互关系，从而可以快捷、准确的处理工程造价估算这类多因素、非线性的问题。可见如果我们利用BP神经网络建立建筑物的工程特征与工程量或造价之间存在的映射关系，且在应用中对神经网络进行专门问题的样本训练，就能够将此类特征反映在神经元之间，如果将实际问题的特征参数输入后，神经网络输出端就能够快速、准确的进行工程造价的估算。

2基于神经网络的造价估算模型简介

1）工程造价受多方面因素的影响，构成复杂，但是都是由部分组合而成的，基于BP神经网络的造价估算实际上是将造价问题看成一种数学映射，其关键就是可以高度逼近任意两个不同维空间的非线性映射。因此，建立工程造价特性信息，并将这些数据赋予向量X=（x1，x2，…，xm），即可利用输入层和输出层之间的非线性映射，建立精确的计算方程，最后将具体的工程造价、主要材料用量作为神经网络的输出Y=（y1，y2，…，yn）。这种映射是建立在简单非线性函数复合的基础之上的，并利用BP神经网络的高度非线性特征，使不同的输出量得到不同的输出值，可见BP神经网络非常适用于难以建立数学模型但是易于收集学习样本的问题，利用过去大量的工程积累，将工程特征、造价信息、主要材料用量等作为训练样本对网格进行训练，就可以得到准确度高度的估算。

2）网络结构与学习算法。径向基函数（Radial Basis Function），即辐射性基本函数网络，是一种将输入矢量扩展或预处理到高维空间中的神经网络学习方法，径向基函数（RBF）包含隐含层和线性层，其中隐含层的传递函数是一种PBF非线性函数，这种函数可作为在局部分布的中心径向局部衰减的非线性函数；而线性层的传递函数是现行函数，这种函数的位置和宽度都由每一个神经元的权重和阈值定义，且一定量隐含层RBF神经元数目和每一层正确的权重将能够逼近任意的复杂函数。

在利用神经网络进行工程造价估算时，选用径向基RBF函数，以工程造价特征信息作为向量X=（x1，x2，…，xp），即利用

（1）

式中：cj——第j个基函数的中心点（由自组织映射神经网络按照输入的样本进行分析确定）；σj——自由选择的参数（确定基函数围绕中心点的宽度）；‖x-cj‖——x-cj的范数。

利用径向基函数（1）式，输入到隐含层便可实现非线性映射，其中从隐含层到输出层的线性关系为：

（2）

权重调节为：

（3）

式中，——第i个输出量的期望值；——第i个输出量第L次计算输出值；a——学习率；a（x）——隐含层基函数映射向量。

3BP神经网络的应用

3.1BP神经网络的基本原理

神经网络是一种基于生理学的智能仿生模型，有大量处理单元及神经元互联组成的非线性大规模自适应动力学系统。BP网络由三个神经元层组成，最下层称为输入层，中间层称为隐含层，最上层称为输出层，利用神经网络，通过学习，可以按照规则自动调节神经元之间的关系，将各层神经元完全连接，BP神经网络的允许过程是学习信号的正向传播和反向传播两个过程。

算法描述如下：

1）正向传播。输出量为X= [x1，…，xi，…，xn]T，一般为样本各分量

输入值；隐含层中输入值为其前一层各节点输入值xi的加权和；

最后利用sigmoid函数为节点输出函数，得实际输出为：

式中，n——节点j的输入节点个数；xi是第i个输入节点的输出值；Wij——第i个输入节点到节点j的权值（i=0时，Wij和xi分别代表阈值和1）

2）反向传播。修改第K层节点的权值和阈值

Wij(t+1)=Wij(t)+ηδjx'i

式中，Wij——第K-1层节点i到K层节点j的连接权值和阈值；x'i——节点i的输出；η——学习速率（0<η<1）。

当节点j是输出层时，取：

δj=yj(1-yj)(dj-yj)

式中，yj和dj——节点j的实际输出和期望值，否则取：

（i=0~m）

式中，xj——节点j的实际输出值；m——节点j的输出节点个数。

3.2神经网络集成的实现

神经网络集成是指用有限个神经网络对同一个问题进行学习，集成在某输入示例下的输出共同决定，使用这种方法时，可以简单地通过训练多个神经网络并将其结果进行合成，提高学习系统的泛化能力。神经网络的集成实现主要体现在两个方面：怎样将多个神经网络的输出结论进行组合和如何生成集成中的网络个体。常用的方法为：结论生成方法，根据各个体网络的输出得出神经网络集成的输出时影响结论正确性的关键，宜采用简单平均作为集成的输出；个体生成方法，采用Bagging方法生成网络集成个体，先从原始训练集中随机选取若干示例组成训练集，以这些训练集训练不同的网络，各训练好的网络个体组成了神经网络集成的个体。这种选取方式导致原始训练集中某些示例可能在新的训练集中出现多次，而有些示例则可能一次也选不上，这增加了神经网络的差异度，从而极大的提高了泛化能力。

4结束语

通过大量试验研究发现，神经网络在工程造价估算中的应用是能满足要求的，只有在估算中充分利用神经网络这个“特征提取器”，统计有关特征参数的数据信息，通过神经网络的高度非线性映射，可以快速、准确的处理数据，满足工程造价估算的要求。

参考文献

[1]段晓牧,吴艳华.基于神经网络高层框架建筑工程的造价估算,2007.

[2]潘华,乐云,李永奎.神经网络在工业厂房造价估算中的应用研究,2010.

12.工程化的神经干细胞的研究进展论文 篇十二

1.1 一般材料

2008年6月至2010年2月我科收治的10例运动性脊髓损伤患者, 其中男8例、女2例, 年龄24~48岁, 平均年龄34岁。术前AIS评分A级7例, C级2例, D级1例 (表1) 。选取患者材料时要求脊髓损伤的诊断明确且脊髓损伤部位无压迫性病变并且其他指标良好可以接受手术治疗的患者。

1.2 神经功能的评价及其统计学分析

术前及术后的半年时间内, 按照目前国际通用的SCI评价标准对患者各方面的变化情况进行评价, 利用目前较常用的美国医学方面制定的评分标准 (ASIA) 对手术前后运动、感觉等功能的变化情况进行评估。将所获得的数据用统计学软件进行处理, 在存在统计学意义的P<0.05的范围内采用t检验。

2 结果

根据AIS分级变化可以看出部分患者的肢体感觉情况有所改善。其中3例患者由A级到B级, 2例患者由C级到D级。根据ASIA评分的变化可以看出所有患者术后半年时间内运动功能的评分与术前相比较有显著差异, 均有所提高。

3 讨论

结合以上结果我们可以看出神经干细胞的移植有利于脊髓损伤的修复并且可以明显改善脊髓损伤患者的神经功能。当患者的神经系统遭到损伤后, 受损的神经元很难再生需要被替换。移植的神经干细胞可以存活、融入患者组织的损伤部位中, 与患者的神经细胞之间形成神经元之间的突触样结构, 使中枢神经系统的功能得到一定改善。神经干细胞移植治疗运动性脊髓损伤在临床上的应用仍处于起步阶段, 有很多问题需要我们进一步发现并解决。

参考文献

[1]王磊, 王连仲.神经干细胞与脊髓损伤的治疗[J].中国组织工程研究与临床康复, 2008, 12 (12) :2335～2338.

[2]柴勇, 杨成.神经干细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展[J].滨州医学院学报, 2008, 31 (1) :43～45.

13.动物细胞工程教案 篇十三

【教学目标】 1．知识目标：

1.1简述动物细胞的培养过程、条件及其应用； 1.2简述克隆动物的概念含义和基本原理

1.3简述体细胞核移植技术和动物克隆技术，以及应用前景 1.4简述细胞融合的方法过程和单克隆抗体的制备过程应用 1.5关注克隆技术的伦理问题。2．能力目标：

2.1通过阅读、自学、质疑、讨论、总结等环节，提高获取知识、分析问题和解决问题的能力

2.2由植物体细胞杂交技术导出动物细胞融合过程，培养学生的知识迁移能力和思维能力

2.3通过设计单克隆抗体的制备过程，使学生了解生物科学认识模式发展学生的创造性能力。3．情感态度与价值目标：

3.1 初步培养学生探索、创新和合作精神

3.2 明确知识不断更新并向前发展，认识到学无止境，形成终生学习的意识。

【教学重点】简述动物细胞的培养过程；举例说出细胞融合和单克隆抗体；关注克隆技术的伦理问题。

【教学难点】动物细胞培养过程；细胞融合技术和单克隆抗体的制备。【教学设计思路】 采用自学、指导模式对动物细胞培养技术进行较深刻、透彻地学习，这部分内容主要是解决三个问题：（1）为什么要进行动物细胞的培养？（2）什么是动物细胞的培养？（3）怎样进行动物细胞的培养？第三个问题是本节课的重点。关于动物细胞的培养过程，教师可参照教材中的动物细胞培养过程示意图进行讲解，讲解中要注意区分原代培养和传代培养这两个概念。对于动物细胞培养的条件，则要从学生已有的内环境的知识出发，启发学生自己动脑思考这个问题，以加深对培养条件的理解。为学习其他动物细胞工程打好基础。在动物体细胞核移植技术及克隆动物的教学中，可首先让学生列举所知道的克隆动物，调动学生已有的知识。随后可向学生提问：克隆动物的方法与植物组织培养一样吗？然后向学生说明目前动物体细胞克隆是通过核移植技术来实现的，以引入本节的主题。关于核移植技术发展简史，可让学生在课堂上阅读，本节的重点和难点是在动物体细胞核移植技术过程，教材中选用了 “多利羊”为例，来说明体细胞核移植的过程。教师应充分利用和挖掘教材内容，带领学生一步步弄清动物体细胞核移植技术的过程。对于体细胞核移植技术的应用前景和存在的问题这部分内容，可结合本节教材“积极思维”中的有关问题，让学生讨论。在细胞融合和单克隆抗体的教学中，教师启发学生回忆植物体细胞杂交过程；通过新旧知识对比，引导学生大胆推测动物细胞融合过程，培养学生知识迁移能力，并通过课件演示细胞融合的全过程，加强教学的直观性，培养学生的观察、思维能力。教师要讲明动物细胞融合技术的意义和应用，以便自然过渡到单克隆抗体上来。关于单克隆抗体的教学，教师要利用好教材提供的材料，突出从问题入手的思路，先介绍医疗实践中仅靠细胞培养难以获得大量抗体，然后，一步一步启发学生讨论怎样解决这个问题。要把科学家在研制单克隆抗体过程中，通过大胆的想像，创造性地解决问题的过程作为本节教学的重点和亮点，使学生在获得单克隆抗体知识的同时，受到创新精神的教育。【教学课时】二课时 【教学过程】

（一）导入新课 图片展示:克隆羊“多利”的复制品 投影：新华网

克隆羊多利重生 这4只克隆羊在遗传上与多莉毫无差异。多莉诞生于14年前，是第一个使用成熟细胞克隆的哺乳动物。克隆羊多莉(Dolly)已经获得“重生”。最初进行此项克隆研究的英国科学家又培育出4只克隆羊，被形象地称之为“Dollies”(多莉的复数)。它们是多莉的复制品，在遗传上与多莉丝毫不差，多莉在7年前离开这个世界。

问题导入

师：克隆羊“多利”的重生，采用的是什么技术？ 生：细胞工程技术？

师：动物细胞工程技术到底是干啥的？下面请同学们带着以下问题阅读与总结：（阅读课本P53,回答）

一、动物细胞工程：

1、主要理论依据？ 2技术手段？ 学生：1.细胞生物学 分子生物学

2.①动物细胞和组织培养 ②细胞核移植③体细胞克隆④细胞融合⑤单克隆抗体制备

3.①探索并改造生物的遗传特性，②大量培养细胞。

师：动物细胞与组织培养是细胞工程的基础，它开始于20世纪初期，那么动物细胞与组织培养主要是指什么？请读课本P53-54,完成以下内容。

二、动物细胞与组织培养：

1、概念： ①材料：取自 ； ②场所： 模拟动物体 ；

③条件：在、和 等条件下； ④目的：

使

动

物

细

胞

或

组

织

继续。

学生：①动物胚胎或出生后不久的幼龄动物的器官或组织

②体外 体内环境 ③无菌 温度适宜 营养充足 ④生长、增殖并维持原有结构和功能

师：动物细胞与组织培养是指在体外模拟动物体内环境，将动物体细胞或组织，在无菌、温度适宜和营养充足条件下培养，使其继续生长、增殖并维持原有结构和功能的技术。那么请同学们思考并讨论一下问题：（投影展示）

1、动物细胞培养的原理是什么？

学生：

1、细胞增殖

2、为什么要取动物胚胎或出生后不久的幼龄动物的器官或组织进行培养？

学生：因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强。一般幼体细胞比老龄细胞易培养，分化程度低的细胞比分化程度高的细胞易培养。

3、动物细胞体外培养需要满足哪些条件？ 学生：①无菌、无毒的环境：（添加一定量的抗生素；定期更换培养液，以便清除代谢产物。）②营养物质(引导学生引导学生引导学生引导学生区分天然培养基与合成培养基区分天然培养基与合成培养基区分天然培养基与合成培养基区分天然培养基与合成培养基)（无机盐、葡萄糖、氨基酸、核酸、维生素、动物血清等。）③温度和pH：37℃, 7.2-7.4 ④气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2）

4、组织分散成单个细胞的方法是什么？ 学生：用胰蛋白酶处理。教师补充：动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。

5、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？ 学生：不能，因为动物细胞培养适宜的pH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。投影展示：动物细胞与组织培养过程

示

意

图

10代细胞 教师：：：： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁生长当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。

思考：细胞发生接触抑制后如何使细胞继续分裂增殖？ 学生：将原代培养的细胞分离稀释后转入新的培养瓶中继续培养，称为传代培养。

思考：传代培养的细胞能一直传代下去吗？

细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40～50代，这种传代细胞为细胞株。

细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。教师引导学生总结动物细胞培养过程。

过渡：动物细胞培养能否像植物组织培养那样最终培养成新个体？我们来一起比较一下这两个过程：比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 因此，目前还不能用类似植物组织培养的方法获得完整的动物个体，用动物体细胞克隆的动物，实际是通过核移植来实现的。

三、细胞核移植与动物体细胞克隆: 读课本P54-57,完成以下内容。

1、体细胞克隆： 是将供体 的细胞核与受体去核 的细胞质进行，借助于 的发育能力，经过培养发育成 进而形成 的技术。其关键是。

学生：细胞核 卵细胞 人工组合 卵细胞 胚胎 个体 细胞核移植技术

2、细胞核移植： 是一种利用 将某种动物细胞的移入

或

动物的去除细胞核的成熟 内的技术。

学生：：：：显微操作技术 细胞核 同种 异种

3、展示克隆羊“多利”产生过程归纳克隆流程： 供体细胞 →

①

-------→ ③------→ 早期胚胎------→ 代孕动物 受

体

细

胞

→

②

-------→ 克隆个体

学生：细胞核 去核的卵细胞 融合的细胞

问题：1）、上述多利羊的成功培育过程表明了什么？也反映出了什么问题？

学生：动物体细胞核具有全能性。许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等。

2）、书上说治疗性克隆和生殖性克隆的大讨论，你有何观点，请说出来。你认为生殖性克隆会带来哪些伦理上的问题？（发散思维）3）克隆个体性状与亲本性状的关系怎样？ 学生：克隆个体性状与供核亲本性状一致。

4、意义：在克服动物、创造 等方面有重要意义。

学生：种间杂交繁殖障碍 新物种

5、应用① ；② ； ③ 等。

学生：①利用克隆技术大量复制实验动物，减少实验误差；②利用异种动物借腹妊娠挽救珍稀动物 ；③利用患者自身的细胞培育新的组织和器官以治疗疾病。

四、细胞融合与单克隆抗体：读课本P57,完成以下内容。

（一）细胞融合：

1、概念：指在一定的条件下将 或 细胞 为 的过程。

2、结果：形成，如。

3、原理：

学生：

1、2个 多个 融合 一个细胞

2、杂种细胞 鼠—鸡、鼠—猴等

3、细胞膜具有一定的流动性

4、物理法、化学法和生物法

5、制备单克隆抗体 动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较：：：： 植物体细胞杂交（获得杂种植株）动物细胞融合（制备单抗）原理 融合前的处理 促融方法 意义和用途 过渡：何为单克隆抗体？

（二）单克隆抗体：：：：读课本P58-59,完成以下内容。

14.细胞工程综述 篇十四

摘要：

细胞是生命活动的最基本单位，为各种基因的表达和产物的合成提供了基础和载体。当前细胞工程所涉及的主要技术领域有细胞培养、细胞融合、细胞拆合、染色体操作及基因转移等方面。通过细胞工程可以生产有用的生物产品或培养有价值的植株，并可以产生新的物种或品系。

关键字：

细胞融合；细胞培养；概述；种类；应用；展望

正文：

一、细胞的概述

细胞工程是生物工程的一个重要方面。总的来说，它是应用细胞生物学和分子生物学和分子生物学的理论和方法，按照人们的设计蓝图，进行在细胞水平上的遗传操作及进行大规模的细胞和组织培养。细胞工程所涉及的范围很广，按生物类型可分为动物细胞工程、植物细胞工程和微生物细胞工程，按实验操作对象可分为细胞与组织培养、细胞融合、细胞核移植、染色体操作及基因转移等方面。通过细胞工程可以生产有用的生物产品或培养有价值的植株，并可以产生新的物种或品系。

细胞工程就是在细胞水平研究、开发。利用各类细胞的工程。亦即人们根据科学设计改变细胞的遗传基础，及通过无菌操作，大量培养细胞、组织乃至完整个体的技术。迄今为止，人们已经从基因水平、细胞器水平以及细胞水平开展了多层次的大量一丁作，在细胞培养、细胞融合、细胞代谢物的生产和生物克隆等诸多领域取得一系列令人瞩目的成果。

细胞工程是一种细胞水平上的遗传工程，它是将一种生物细胞中携带遗传信息的细胞核或染色体整个地转移给另一种生物细胞，使新细胞产生具有人们所需要的功能，从而改变受体细胞的遗传特性，打破只有同种生物才能进行杂交的限制，为改良品种或创造新品种开拓了广阔前景，细胞工程包含细胞融合、体细胞杂交、动植物细胞规模培养核和卵移以及植物组织培养技术等方面。

当前细胞工程所涉及的主要技术领域有细胞培养、细胞融合、细胞拆合、染色体操作及基因转移等方面。通过细胞工程可以生产有用的生物产品或培养有价值的植株，并可以产生新的物种或品系。

1.细胞融合技术

细胞融合技术是指把两个细胞（可以是同种细胞，也可以是异种细胞）在融合剂的作用下，融合成一个细胞的技术。应用细胞融合技术进行细胞杂交，能够克服远缘杂交不育的缺陷，对培育新品种具有广阔的应用前景。

2．细胞拆合技术

细胞拆合技术也称为细胞核（包括细胞器）移植技术，是将细胞核和细胞质用某种方法拆开，然后再把分离的细胞核和胞质体重新组合成一个新细胞。把从细胞中分离出来的染色体或基因转入另一个细胞中，赋予重建的细胞以某种新的功能，这属于染色体导入或基因转移的技术范畴。

3．细胞培养技术

细胞培养技术是将生物体内的某一组织分散成单个细胞，接种在人工配制的适于细胞生长发育的培养基上，然后在适当的无菌的生长条件下(如一定的光照、温度或pH值等)进行培养，使细胞能够生长和不断增殖的技术。由于从组织中分离单细胞并分化成生物体的技术难度较大，目前多采用组织培养技术。如通过植

物胚胎（成熟或未成熟胚）或器官（根尖、茎尖、叶原基、花药等）的离体培养，再生成新植株（试管苗）。这种方法能快速、大量繁殖一些有价值的苗林、花卉、药材和濒危植物等。

二、细胞工程的应用

（一）动物细胞工程的应用

1.在疫苗生产上的应用疫苗是一种其主要成分具有免疫原性的蛋白质。它是利用动物细胞大规模培养技术生产的最成熟的一种产品。例如讲乙型肝炎表面抗原基因插入哺乳动物细胞内进行高效表达，已生产出乙型肝炎疫苗。

2．在干扰素生产上的应用干扰素是以一种在同种细胞上具有广谱抗病毒活性的蛋白质，其活性的发挥受细胞基因组的调节和控制，涉及RNA和蛋白质的合成。

3.繁育优良品种 目前，人工受精、胚胎移植等技术已广泛应用于畜牧业生产。精液和胚胎的液氮超低温（-196摄氏度）保存技术的综合使用，使优良公畜、禽的交配数与交配范围大为扩展，并且突破了动物交配的季节限制。另外，可以从优良母畜或公畜中分离出卵细胞与精子，在体外受精，然后再将人工控制的新型受精卵种植到种质较差的母畜子宫内，繁殖优良新个体。综合利用各项技术，如胚胎分割技术、核移植细胞融合技术、显微操作技术等，在细胞水平改造卵细胞，有可能创造出高产奶牛、瘦肉型猪等新品种。特别是干细胞的建立，更展现了美好的前景。

4.临床医学与药物自1975年英国剑桥大学的科学家利用动物细胞融合技术首次获得单克隆抗体以来，许多人类无能为力的病毒性疾病遇到了克星。用单克隆抗体可以检测出多种病毒中非常细微的株间差异，鉴定细菌的种型和亚种。这些都是传统血清法或动物免疫法所做不到的，而且诊断异常准确，误诊率大大降低。

（二）植物细胞工程的应用

1.在果树园林花卉林木生产实践中应用细胞工程技术主要是微繁殖和去病毒技术。几乎所有的果树都患有病毒病，而且多是通过营养体繁殖代代相传的。用去病毒试管苗技术，可以有效地防止病毒病的侵害，恢复种性并加速繁殖速度。近年来，对经济林木组织培养技术的研究也受到很大的重视。采用这一技术可比常规方法提前数年进行大面积种植。特别是有些林木的种子休眠期很长，常规育种十分费时。植物细胞工程技术使现代花卉生产发生了革命性的变化。1960年，科学家首次利用微繁殖技术将兰花的愈伤组织培养成植株后，很快形成了以组织培养技术为基础的工业化生产体系——兰花工业。现在，世界兰花市场上有150多种产品，其中大部分都是用快速微繁殖技术得到的试管苗。从此，市场供应摆脱了气候、地理和自然灾害等因素的限制。

2.粮食与蔬菜生产利用细胞工程技术进行作物育种，是迄今人类受益最多的一个方面。我国在这一领域已达到世界先进水平，以花药单倍体育种途径，培育出的水稻品种或品系有近百个，小麦有30个左右。在常规的杂交育种中，育成一个新品种一般需要8～10年，而用细胞工程技术对杂种的花药进行离体培养，可大大缩短育种周期，一般提前2～3年，而且有利优良性状的筛选。前面已介绍过的微繁殖技术，在农业生产上也有广泛的用途，其技术比较成熟，并已取得较大的经济效益。蔬菜是人类膳食中不可缺少的成分，它为人体提供必需的维生素、矿物质等。蔬菜通常以种子、块根、块茎、插扦或分根等传统方式进行繁殖，化费成本低。但是，在引种与繁育、品种的种性提纯与复壮、育种过程的某些中间环节，植物细胞工程技术仍大有作为。

三、细胞工程种类

1．染色体工程 染色体工程是按人们需要来添加或削减一种生物的染色体，或用别的生物的染色体来替换。可分为动物染色体工程和植物染色体工程两种。动物染色体工程主要采用对细胞进行微操作的方法(如微细胞转移方法等)来达到转移基因的目的。植物细胞工程目前主要是利用传统的杂交回交等方法来达到添加、消除或置换染色体的目的。

2．染色体组工程 染色体组工程是整个改变染色体组数的技术。自从1937年秋水仙素用于生物学后，多倍体的工作得到了迅速发展，例如得到四倍体小麦，八倍体小黑麦等。

3．细胞质工程 细胞质工程又称细胞拆合工程，是通过物理或化学方法将细胞质与细胞核分开，再进行不同细胞间核质的重新组合，重建成新细胞。可用于研究细胞核与细胞质的关系的基础研究和育种工作。

4．细胞融合工程 细胞融合工程是用自然或人工的方法使两个或几个不同细胞融合为一个细胞的过程。可用于产生新的物种或品系(植物上用得多，动物上用得少)及产生单克隆抗体等。其中单克隆抗体技术利用克隆化的杂交瘤细胞分泌高度纯一的单克隆抗体，具有很高的实用价值，在诊断和治疗病症方面有着广泛的应用前途。

四、对细胞工程的展望

细胞工程是一个非常年轻富有活力的领域。从诞生但现在还不到100年的历史，组织培养技术与其他生物技术一起已经成为世界经济中最具活力的支柱性的产业，产生了巨大的经济效益和社会影响。细胞工程已经渗透到人类生活的许多领域，取得了许多具有开发性的研究成果。相信随着人们对生命科学的认识的不断深入，细胞工程技术会得到更快的发展，在解决困扰人类的人口、资源与环境等重大问题上会有更大作为。随细胞工程技术研究的不断深入，它的前景和产生的影响将会日益地显示出来。

参考文献：

[1]安利国.2009.细胞工程.北京：科学出版社

[2]陈志南.2005.细胞工程.北京:科学出版社

[3]李志勇.2003.细胞工程.北京：科学出版社

[4]杨淑慎.2009.细胞工程.北京：科学出版社

[5]杨吉成.2008.细胞工程.北京：化学工业出版社

[6]徐永华.2003.动物细胞工程.北京：化学工业出版社

15.工程化的神经干细胞的研究进展论文 篇十五

1 材料与方法

1.1 切割海马伞

取220-250g SD大鼠(南通大学实验动物中心提供)6只,腹腔注射复合麻醉剂Chlorpent 0.2ml/100克。麻醉后固定于立体定位仪,分离颅骨外骨膜,记录前囟A(矢状轴)、L(冠状轴)、V(垂直轴)坐标,参照Paxinos图谱确定双侧海马伞的切割范围。具体方法详见陈蓉报道[1]。

1.2 Native-PAGE及电洗脱

分别取6只正常及切割海马伞后14天大鼠的海马组织制成匀浆,按照郭尧君方法进行不连续的自然凝胶电泳。根据染色结果切取未染色部分含有83KD蛋白的条带,将其分别切碎后分别放入处理过的透析袋中,加入少量电洗脱缓冲液,然后把透析袋放入普通的核酸电泳槽中,并在电泳槽中加入适量电洗脱缓冲液,在稳压60V条件下进行低温(4℃)电泳2～3小时后,反向电泳5分钟。最后直接用消毒过的移液器吸头把透析袋中液体转入另一处理过的透析袋中。将盛有蛋白提取液的透析袋两端用专门的透析夹夹紧,放入灭菌双蒸水中在4℃环境下透析2～3小时,不断更换双蒸水以尽可能除净液体中的盐分。将透析袋放入20%PEG(分子量20 000)中4℃环境下浓缩30分钟。蛋白定量后将各组蛋白质浓度稀释调整为300μg/ml后分装于消毒过的Eppendorf管中,置于4℃冰箱中备用。

1.3 鼠胚神经干细胞的分离、克隆、检测及扩增

取E17 SD大鼠的前脑组织,按金国华等[3]和谭雪锋等[4]报道的方法,进行神经干细胞的分离、克隆、Nestin免疫荧光检测、BrdU标记和免疫荧光检测及传代和扩增。

1.4 分组及分化培养液:

(1)空白对照组:单纯DMEM/F12无血清培养基;

(2)56KD组:含10μg/ml 56KD蛋白的DMEM/F12无血清培养基;

(3)65KD组:含10μg/ml 65 KD蛋白的DMEM/F12无血清培养基;

(4)83KD组:含10μg/ml 83 KD蛋白的DMEM/F12无血清培养基;

(5)56KD+65KD组:含10μg/ml 56KD和10μg/ml65 KD蛋白的DMEM/F12无血清培养基;

(6)56KD+83KD组:含10μg/ml 56KD和10μg/ml83 KD蛋白的DMEM/F12无血清培养基;

(7)65KD+83KD组:含10μg/ml 65KD和10μg/ml83 KD蛋白的DMEM/F12无血清培养基;

(8)56KD+65KD+83KD组:分别含10μg/ml 56KD、10μg/ml65 KD和10μg/ml 83KD蛋白的DMEM/F12无血清培养基;

1.5 神经干细胞球的接种培养和观察:

将圆盖玻片高温高压消毒后放入4块24孔培养板各孔中,将浓度为0.1mg/ml的多聚赖氨酸涂布于圆盖玻片上,室温下干燥20分钟,用消毒双蒸水冲洗一遍后,置于37℃恒温箱中烘干备用。

4块培养板共计96孔,分成8组,每板每组3孔,每组共12孔,分别加入与上述分组相应的分化培养液1.5ml。将从单克隆后扩增所得到的来源于同一细胞的神经干细胞克隆球吸入10ml玻璃离心管中,用毛细吸管轻轻吹打后加盖垂直静置10分钟,待细胞球完全下沉至管底后,吸去上清液,再混匀克隆球,台盼蓝计数后将适量混匀的细胞球液体种植于上述2块培养板的45个孔中,使每孔接种的细胞克隆球数约为5个左右。将培养板放入饱和湿度、37℃、5%CO2培养箱中培养。每天在倒置显微镜下观察细胞分化情况。培养液每4天半量换液一次。

1.6 MAP-2免疫荧光检测

培养12d后,进行神经元特异性标记物MAP-2免疫荧光检测。吸去培养液,加人100%甲醇1ml,-20℃固定7min。吸去甲醇,每孔再加人含4%多聚甲醛的0.1%mol/L PBS (pH7.2) 1ml,固定20 min。吸去多聚甲醛,每孔加人含10%山羊血清的0.01mol/L PBS (pH7.2)200μl封闭30min。吸去封闭液,每孔加人1:100稀释的鼠抗MAP-2单克隆抗体(Chemicon公司)200μl,室温下轻轻振摇lh后置4℃冰箱中72h。然后吸去MAP-2抗体,每孔再加人1:100稀释的结合有异硫氰酸荧光素(fluoresecein isothiacyanate,FITC)的山羊抗小鼠IgG抗体(sigma公司)200μl,室温下轻轻振摇2h后吸去荧光抗体,最后用甘油缓冲液封片。在激发光波长为495nm,吸收光波长为520nm的荧光显微镜下观察MAP-2阳性的神经元。免疫荧光阴性对照除用0.01mol/L PBS替代MAP-2抗体外,其余步骤同上,结果为阴性。

1.7 MAP-2阳性神经元图象处理和统计学分析

将MAP-2免疫荧光检测时各组摄取的荧光激发情况下的照片导入图像处理系统,应用捷达801系列形态学分析系统软件计数每一个视野内的MAP-2阳性神经元数,同时通过该图像处理系统得到每一张照片中MAP-2阳性神经元的胞体面积和细胞(包括突起)周长。用STATA7.0统计软件对8组的MAP-2阳性神经元数目、平均胞体面积和细胞周长进行方差分析和组间比较。

2 结果

2.1 倒置显微镜下观察结果

接种4小时后,除对照组外7个实验组中神经干细胞球的边缘均长出毛刺样突起。接种后1天8组均见有细胞从球的边缘爬出,但含83KD蛋白的4组可见细胞已经发出突起,其中以56KD+65KD+83KD组细胞的突起最长,56KD+83KD组稍次之,而65KD组和空白对照组最差。起初3～6天内除空白对照组和65KD组细胞生长较慢外,其余6组均有细胞不断自球的边缘向外迁移,突起生长迅速,突起的长度无明显差异。接种9天后,可见很多细胞已从神经球内向外迁移,整个盖玻片上均已布满细胞。向外迁移和分化的细胞已可从形态上区分胶质样细胞和神经元样细胞。其中胶质样细胞迁出较近,大多靠近神经球,胞体较大扁平,呈毯片状平铺于盖玻片上,立体感不强,细胞有较多宽而扁平的突起,有的突起由胞体直接延续而来,难以和胞体区分。而神经元样细胞迁出较远胞体饱满,呈圆形或椭圆形,周围有很强的光晕,立体感强,从胞体发出的突起细长,以双突起为多。空白对照组中几乎未见神经元样细胞(图1)65KD组偶尔可见1～2个神经元样细胞,但突起较短(图2);56KD+65KD+83KD组和56KD+83KD组可见大量光晕很强的神经元样细胞,胞体较大,突起较多较长,且相互交织成网状(图3,4)。其它4组神经元样细胞较多,但胞体较小,突起较少较短,组间镜下观察不出明显差异(图5～8),接种后12天,倒置显微镜下所见和9天时所见无明显区别。

2.2 MAP-2阳性神经元图象处理和统计分析结果

诱导分化后8组的MAP-2阳性神经元数量、胞体面积和细胞周长的数据详见表。方差分析显示8组之间3项指标的F值分别为902.08、64.83和1660.96,P值均为0.0000,表明8组之间这3项指标均有显著性差异。两两比较结果显示:56KD+65KD+83KD组与56KD+83KD组之间没有显著性差异,但它们与其它各组之间均有显著性差异;65KD+83KD组、83KD组、56KD+65KD组和56KD组4组之间无显著性差异,但它们与65KD组和对照组之间均有显著性差异;65KD组和对照组之间无显著性差异。

3 讨论

从发育中和成年哺乳动物脑内分离出的神经干细胞,在体外可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。但研究发现大部分神经干细胞分化成了胶质细胞,仅少数神经干细胞分化为神经元[5]。这不是人们所希望的结果。因此,目前在神经干细胞分化研究中急需解决的问题有二:首先是如何控制神经干细胞向神经元分化而少向胶质细胞分化;其次是如何使神经干细胞分化为特定表型的神经元,如多巴胺能神经元、胆碱能神经元和GABA能神经元等。

神经干细胞的分化受多种因素的影响:①细胞因子的影响:成纤维细胞生长因子(FGF)特别是bFGF在神经干细胞的分化过程中的影响。体外实验已证明bFGF能够直接刺激神经干细胞的增殖与分化。Kuhn等[6]将bFGF注入成鼠的侧脑室内引起了室下区神经元前体细胞数量增加,以及从室下区迁移到嗅球的神经元数量增加。Kilpatrick等[7]发现在血清存在时,高浓度bFGF刺激的克隆只产生较少的神经元,低剂量bFGF时(0.1ng/ml)则产生较多的神经元。Kuhn[6]等还发现EGF能诱导室管膜下区产生星形胶质细胞。白血病抑制因子(LIF)对神经干细胞的分化也有一定的作用。Galli等[8]研究发现在人胚间脑神经干细胞的分化调节中,LIF可促进神经干细胞的分化;在睫状神经营养因子的协同作用下,可使神经干细胞分化为成熟神经元的数量增加2倍。②细胞的自身基因调控机制在神经干细胞的分化过程中也起着一定的作用。神经干细胞和祖细胞可以产生信号调控其自身的分化。有证据表明神经干细胞发育的多样性可能与干细胞表达多种多样的转录因子有关,不同的转录因子的表达导致不同谱系的分化[9]。③中枢神经系统局部微环境对神经干细胞分化的影响。Nishino等[10]的研究发现,移植到去多巴胺神经支配纹状体内的神经干细胞存活和分化为TH阳性神经元的数量要明显地比正常侧纹状体中的为多。从而推测物质对神经干细胞的存活和分化为TH阳性神经元有着促进作用。根据这一推测,Hida等[11,12]利用去多巴胺神经支配的纹状体和正常纹状体提取液在体外培养多巴胺能神经元和PC12细胞,发现加有去多巴胺神经支配的纹状体提取液培养的细胞数量和突起长度明显比用正常侧纹状体提取液培养的细胞要多和长。庆宏等[13]采用梯度离心法获取不同分子量的纹状体提取液,用这种提取液培养中脑黑质神经元,发现纹状体中10～30KD分子量的提取物有支持中脑黑质神经元生存和增强其活性的作用。Nakajima等[14]通过分子生物学方法证实,在去多巴胺神经支配的纹状体内bFGF和GDNF水平增高。bFGF能促进神经干细胞分裂增殖,GDNF可以促进多巴胺能神经元存活和生长。这一结果进一步解释了上述Nishino等[10]将神经干细胞移植到去多巴胺神经支配的纹状体中发现的结果。

我们通过切割海马伞阻断隔区的胆碱能神经元向海马的投射,导致海马中乙酸胆碱递质浓度的降低。由于机体的代偿作用,病变海马可能表达某种物质促进神经干细胞的存活,这种物质还可能诱导神经干细胞向胆碱能神经元分化,以弥补本身乙酰胆碱递质的不足。

海马中56KD蛋白能够诱导神经干细胞向神经元分化。本研究第一部分结果发现海马中83KD蛋白也有诱导神经干细胞向神经元分化的作用。为进一步研究海马中83KD蛋白在诱导神经干细胞向神经元分化方面是否与56KD蛋白具有协同作用、以及与65KD蛋白的关系,本实验将切割海马伞后14天海马与正常海马组织匀浆自然凝胶电泳比较后,将低分子量区所出现的56KD、65KD和83KD 3条差异条带进行电洗脱。收集后,以不同的组合加入鼠胚神经干细胞分化培养液中,观察上述3种差异蛋白对神经干细胞分化为神经元和AChE阳性神经元是否具有明显的促进作用和协同作用。结果显示,海马中83KD蛋白与56KD蛋白在诱导神经干细胞向神经元分化方面具有协同作用。65KD蛋白没有明显的诱导神经干细胞向神经元分化的作用,在含56KD、83KD两种差异蛋白培养液中加入和不加65KD蛋白的组间并没有明显的差异,说明65KD蛋白没有协同诱导神经干细胞向神经元分化的作用。

16.鼻腔嗅神经母细胞瘤临床病理观察 篇十六

【关键词】鼻腔；嗅神经母细胞瘤；免疫组化；鉴别诊断

嗅神经母细胞瘤起源于嗅神经的神经外胚层，占鼻腔肿瘤的3%，本病可见于任何年龄，其中l0～20岁、50～60岁为双高峰，男性多见。该肿瘤一般发生于鼻腔顶部、上壁及侧壁，病程进展较缓慢，呈局部侵袭性生长，可侵及筛窦、上颌窦、蝶窦和额窦，也可向眼眶、鼻咽部和颅内侵犯，可有淋巴结转移，约1/5的病例有远处转移。本文报道1例嗅神经母细胞瘤，研究其临床病理特征、免疫组化特点、诊断和鉴别诊断并结合文献进行讨论，以提高对本病的认识。

1 材料与方法

1.1 临床资料 患者男性，64岁，右侧鼻腔反复出血三月，术中右侧鼻腔内可见一新生物，表面光滑，触之易出血，大小约2.0×1.5×1.0cm。

1.2 方法 標本经过4%中性甲醛固定，常规石蜡包埋切片、HE染色、免疫组化SP法行单克隆抗体标记，光镜观察。所用抗体均购自福建迈新生物技术有限公司，DAB显色，苏木精衬染。

2 结果

2.1巨检 息肉样组织一块，体积：2.2×1.5×1.3cm，表面光滑，切面灰红色，有光泽，质软。

2.2 镜检 镜下表现为小蓝圆形细胞，胞浆少，被纤维血管分隔成小叶状、片状或条索状，大多数病例均存在多少不一，典型及不典型的菊形团结构。（图1）。

2.3 免疫组化 瘤细胞CD56（图2）、S-100、Syn、CgA（+）；CK、NS、EMA、CEA、desmin、CD99均（-）；Ki-67<8%（+）。

病理诊断：（右侧鼻腔）嗅神经母细胞瘤WHOⅠ-Ⅱ级 。

3 讨论

嗅神经母细胞瘤是一种罕见的神经源性恶性肿瘤，占所有鼻腔肿瘤的3%-6%[1]。肿瘤细胞为小蓝圆细胞，胞质少，典型的嗅神经母细胞瘤内可见到Flexner-Wintersteiner型菊形团结构。嗅神经母细胞瘤的预后与Kadish分期、病理分化程度、治疗方式有关， 早期诊断，手术+放疗等的综合治疗，能提高本病的生存率，晚期患者的辅助化疗是必要的[2]。

3.1 临床特点 本例肿瘤位于鼻中隔后上方，表面光滑，息肉样，生长缓慢，呈局部侵袭性生长。

3.2 病理特点 肿瘤位于粘膜下层，分叶状或巢状，境界清楚，间隔以丰富的血管纤维间质。达30%的肿瘤中可见Homer-Wright型菊形团（假菊形团），而可见Flexner-Wintersteiner型菊形团（真神经菊形团）的肿瘤少于5%[3]。此肿瘤镜下组织学分为四级，级别越高，分化越差。本例CD56（+），s-100蛋白特征性的只表达于肿瘤小叶周围的支持细胞。

3.3 鉴别诊断 ①小细胞癌：小圆细胞，无核仁，胞浆极少或裸核，如燕麦样，S-100阴性。②鼻NK/T细胞淋巴瘤：镜下常为多灶性大片坏死，细胞多形，胞质透亮，有核沟，肿瘤间质较少，LCA、CD45RO、CD56阳性。③胚胎性横纹肌肉瘤：典型者在疏松粘液样背景中见星芒状细胞，胞质少，或出现带状，蝌蚪样或蜘蛛样横纹肌母细胞，desmin、myosin及myoglobin等肌源性标记阳性。

3.4 治疗与预后 嗅神经母细胞瘤治疗选择完整的手术切除，术后辅以放疗效果更加，也可联合化疗以提高生存率。预后与临床分期有关。最新发现完整切除比临床分期预后更重要[4]。

参考文献：

[1] Resto VA，Eisele DW，Forastiere A，et al.Esthesioneuroblastoma：the Johns Hopkins experience. Head and Neck . 2000

[2] 张运东，蔡奇山.嗅神经母细胞瘤7例诊疗分析[J].现代肿瘤医学，2012，20（08）：1573-1575.

[3] irose T，ScheitauerBW，LopesMB，GerberHA，AltermattHJ，HarnerSG， Vanden Berg SR（1955）.Olfactory neuroblastoma.Animmunohistochemical，ultrastructural，and flow cytometric study.Cancer 76：4-19.

17.细胞工程教案简版 篇十七

大家好，我们这一组给大家讲的是植物细胞培养技术。在这个内容之前呢，我们先了解一下植物细胞培养所用的培养基与其他培养基有什么样的不同。主要成分有……

已经知道了培养基的成分，我们就来共同学习植物细胞培养技术，植物细胞培养技术科分为四种类型，分别是…..首先是植物单细胞分离与小规模培养技术，要培养植物细胞，我们首先要得到我们想培养的细胞，这就涉及到了单细胞的分离。

单细胞分离主要采用的是酶解法和愈伤组织诱导法。（分别介绍两种方法。）已经分离出来我们想要培养的细胞，这时候我们就可以进行小规模的培养了，植物细胞小规模培养一种有四种方法，我们分别来看一看。看护培养……细胞同步化培养。有时我们所需的植物细胞不多，就可以采用小规模培养技术，如果我们所需的植物细胞数目比较多时，这是就要采用植物细胞大规模悬浮培养技术了。

在了解这个技术之前，我们首先补充几个概念，细胞系和细胞株。细胞系是指…..细胞株是指…..适合于工业化生产的细胞株必须满足一下条件。细胞株的筛选是植物细胞大规模培养的前提，那么如何进行细胞株的筛选和保存呢？我们一起来看一看。细胞株筛选的一般步骤…..细胞株的保存方法…… 有了这些知识铺垫，我们就一同来看一看什么是植物细胞大规模悬浮培养。植物细胞大规模悬浮培养是指…..植物细胞大规模悬浮培养的生长曲线与微生物细胞生长曲线基本相同，上学期的微生物学我们已经学过这个生长曲线，这里我就不重复讲解了。那么一般我们在平台期前进行继代培养，可以获得尽量高的细胞产量。

说了这么多，植物细胞大规模悬浮培养有着什么样的优点呢？我们一起来看一看。优点有…..悬浮培养需要一定的环境，也就是生物反应器。那么什么样的生物反应器才适合悬浮培养？ 生物反应器应具有：….的优点。

18.工程化的神经干细胞的研究进展论文 篇十八

1、知识目标

（1）掌握作物脱毒、人工种子的制备过程和意义（2）了解单倍体育种和突变体的利用（3）了解细胞产物的例子

2、能力目标

搜集有关细胞工程研究进展和应用方面的资料，进行整理、分析和交流。

3、情感目标

（1）认同细胞学基础理论研究与技术开发之间的关系（2）关注细胞工程研究的发展和应用前景。

学习者特征分析（结合实际情况，从学生的学习习惯、心理特征、知识结构等方面进行描述）：

本节教材内容对学生来说，第一课时已经学习了植物细胞工程的基本技术知识，这节课学习起来有一定的基础。教师可以采用学案导学、让学生理解记忆为主结合讨论的方法。但是，本节内容都是前沿科技，学生难以亲身体会，教师可以用多媒体相关图片等资料，增强学生的感性认识。

教学方法设计（结合教学重点与难点和学生情况描述所选择的具体方法）：

本节教学重点是知道植物繁殖的新途径及细胞产物的工业化发展，这部分内容通过学生自学基本能够掌握；教学难点是作物新品种的培育，这部分内容与必修二的知识联系较紧密，需要教师引领学生回忆单倍体的概念、特点等相关知识，还可以通过多媒体展示单倍体育种与杂交育种的图解，比较各自的优缺点，使抽象的知识清晰、明了。

教学过程（按照教学步骤和相应的活动序列进行描述，要注意说明各教学活动中所需的具体资源及环境）：

【旧知复习、导入新课】

1、回忆植物组织培养技术的基本原理和过程

2、思考利用这项技术能做哪些工作。[学生]思考回答问题。

[设计意图]对前面的已学知识进行复习巩固，为后面的知识做铺垫。【教学内容】

一、植物繁殖的新途径

[教师]课件展示以下问题，指导学生根据问题阅读课本，找到问题的答案。

1、微型繁殖技术的概念是什么？

2、微型繁殖的原理是什么？

3、微型繁殖的优点是什么？

4、作物脱毒的原因、材料、方法、结果、优点分别是什么？

5、人工种子的概念、结构？

6、培育人工种子的技术、原理？

7、人工种子有哪些优点？

[学生]阅读教材，解决问题并回答问题：

1、概念：应用植物组织培养技术，快速繁殖优良品种植物（也叫快速繁殖技术）。

2、原理：植物细胞的全能性

3、优点：①繁殖速度快；②保持优良品种的遗传特性（因为是无性繁殖）

4、原因：长期进行无性繁殖的作物，易积累感染病毒，导致产量降低，品质变差。

材料：分生区（如茎尖）的细胞

方法：植物组织培养

结果：获得脱毒苗

优点：提高作物的产量和品质

5、概念：以植物组培技术得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，经过人工薄膜包装得到的种子。

结构：人工种皮+胚状体（或不定芽、顶芽、腋芽）

6、技术：植物组织培养

原理：植物细胞的全能性

7、优点：①后代无性状分离，保留优良特性；

②不受气候,季节和地域限制；

③贮藏、运输方便。[设计意图]教师指导学生自己对以上知识点进行概括和梳理，便于知识的理解和掌握，使知识条理化，便于复习和记忆。

二、作物新品种的培育 [师生活动] [教师]引导学生复习旧知识

传统方法——杂交育种依据的原理是什么？优点和缺点分别是什么？ [学生]思考回答问题。原理：基因重组。

优点：优良的基因通过基因重组，把两亲本的优良性状组合在同一后代中。缺点：要不断进行（多年）纯化和选择，才能得到符合理想要求的新品种。[教师]进一步追问：用什么方法可以弥补杂交育种的缺点呢？ [学生]思考回答问题。单倍体育种

[教师]引导学生复习旧知识

1、单倍体定义？

2、单倍体是如何形成的？

3、单倍体植株的特点？ [学生]思考回答问题。

1、体细胞中含有本物种配子染色体数目的个体。

2、由配子不经过受精作用而直接发育成的个体。例：蜜蜂中的雄蜂。

3、植株弱小，而且高度不育。[设计意图] 联系旧知识，使学生认识到新技术的必要性，引发学习兴趣。

[教师]课件展示以下问题，指导学生根据问题阅读课本，找到问题的答案。

1、单倍体育种的方法、技术、原理和优点分别是什么？

2、突变体是如何产生的？其依据的遗传学原理是？ [学生]阅读教材，解决问题并回答问题：

1、方法：花药离体培养获得单倍体植株，再用秋水仙素处理使染色体数目加倍。技术：植物组织培养

原理：染色体变异

优点：明显缩短了育种年限

2、产生：植物组织培养过程中，由于培养细胞一直处于不断地分生状态，易受到培养条件和外界压力的影响而产生突变。

遗传学原理：基因突变

[设计意图]教师指导学生自己对以上知识点进行概括和梳理，便于知识的理解和掌握，使知识条理化，便于复习和记忆。

三、细胞产物的工业化发展 [师生活动] [教师]引导学生完成以下问题：

1、细胞产物种类有哪些？

2、细胞产物运用的技术是什么？ [学生]阅读教材，解决问题并回答问题：

1、种类：蛋白质、脂肪、糖类、药物、香料、生物碱等。

2、技术：植物的组织培养—愈伤组织培养

[设计意图]培养学生阅读、观察和分析问题的能力。

【课堂小结】

[师生互动]引导学生一起总结本节知识，构建知识网络。[设计意图]形成知识结构，使知识系统化、结构化。

【巩固练习】课件展示当堂练习，规定时间让学生完成。

[设计意图]对所学知识及时巩固。

板书设计

植物细胞工程的实际应用

一、植物繁殖的新途径

1、微型繁殖

2、作物脱毒

3、神奇的人工种子

二、作物新品种的培育

1、单倍体育种

2、突变体的利用

三、细胞产物的工业化发展

技术应用（说明在教学中使用了哪些相关的软硬件）： 多媒体与黑板有机结合

资源应用（说明在教学中资源应用的思路、制作或搜集方法）：

1、通过百度文库整理制作预习学案，学生课前预习。

2、通过百度搜索、百度文库下载相关资料，并结合教参制作课件，以展示问题、图片、知识网络和当堂检测题。资料引用（说明所引用资料来源出处）：

百度搜索、百度文库、人教版高中生物《现代生物科技专题》教参

评价方法或工具（说明在教学过程中将用到哪些评价工具，如何评价以及目的是什么）：

1、个人评价: 对积极发言的同学给与鼓励性评价，如果学生能正确回答问题，教师应及时给与表扬，若回答欠准确或思路不对，教师也不能批评或指责学生，而应该作出提示，引导学生得出正确答案，以免打消学生的积极性。这样通过课堂观察，教师便能及时了解学生的情况，从而作出积极反馈，正确的给予鼓励和强化，错误的给予指导与矫正，使他们不断品尝成功的喜悦，多鼓励，尤其是对中下学生，以促成其良性循环。

2、小组评价：以学习小组为单位进行，评价标准如下：

优：组内成员人人积极思考，踊跃参与讨论，互相学习与纠错，共同顺利完成本节课的学习任务。

良：组内成员大部分积极参与，较好地完成了本节课的学习任务。

差：组内成员没有合作意识，没有讨论、交流与互评等活动。

通过小组评价，可以增强学生的合作意识，从而增进合作交流技巧，使学生群体的智慧和思维可以共享，相互解释所学知识、能够相互帮助理解和完成作业，取得最佳的学习效果。教学反思（对整堂课进行总结评价、分析）：

“问题启发式”教学的效果还是很好的，它符合新课程改革的要求，充分体现了学生的主体作用，调动了学生的思维和积极性，学生在积极思考的同时，能够相互讨论，积极发言，同学们在相互借鉴的同时也很好的提升了自己的知识水平，同时这种“问题启发式”教学对培养学生的能力是很有帮助的。